检索结果-南通市图书馆

作者：潘国强兰州大学

学位级别：硕士

目的：去甲肾上腺素α2受体和抑制性gi蛋白相偶联,通过gi蛋白α亚基(giα)和βγ亚基(gβγ)触发多种细胞内信号转导通路。α2受体包含多种亚型;其中,A型去甲肾上腺素α2受体(α2A受体)表达于脊髓背角、并在痛觉信息的调控中发挥着至关... 详细信息

目的：去甲肾上腺素α2受体和抑制性gi蛋白相偶联,通过gi蛋白α亚基(giα)和βγ亚基(gβγ)触发多种细胞内信号转导通路。α2受体包含多种亚型;其中,A型去甲肾上腺素α2受体(α2A受体)表达于脊髓背角、并在痛觉信息的调控中发挥着至关重要的作用。目前为止,绝大多数实验探讨了giα亚基诱发的cAMP信号通路与痛觉调制的关系;但gβγ亚基的作用尚不清楚。本研究的目的,在于探讨gβγ通路在α2A受体抑制慢性炎性疼痛中的作用及其分子机制。方法：本研究给小鼠后足底皮下注射完全弗氏佐剂(Complete Freund’s Adjuvant, CFA)、建立慢性炎性疼痛模型;构建腺病毒表达载体,使脊髓背角表达gβγ亚基的特异性阻断剂PARKct(即：195个氨基酸组成的β-肾上腺素受体激酶-1的胞浆C-末端序列);鞘内注射a2A受体的选择性激动剂guanfacine,通过痛行为学测试、免疫印迹、膜片钳电生理记录、免疫沉淀等方法,探讨了PARKct对 guanfacine效应的影响。结果：(1)鞘内注射α2A受体激动剂guanfacine (0.28μg),能够有效缓解CFA诱发的热痛觉过敏和机械性痛觉超敏,但这一作用可被PARKct拮抗;(2)α2A受体可能通过gβγ亚基下调N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-Aspartate;NMD A)型谷氨酸受体的突触表达,因为βARKct会阻断guanfacine对突触小体膜结构中NMDA受体gluNl/gluN2B亚基的抑制效应;(3)免疫印迹实验显示：α2A受体通过gβγ亚基降低gluN2B亚基第1472位酪氨酸残基(gluN2B-Tyrl472)的磷酸化水平,从而诱发包含gluN2B亚基的NMDA受体的内陷;(4)免疫沉淀实验显示：gluN2B亚基的催化激酶---Src,可能是α2A受体/gβγ亚基的重要调控靶点,因为：guanfacine能够降低Src的第418位酪氨酸残基(Tyr418)的磷酸化、同时升高其529位酪氨酸残基(Tyr529)的磷酸化,而预先表达βARKct则拮抗guanfacine对Src活性的影响;(5)α2A受体/gβγ亚基对Src的调节作用,可能与C-末端-Src激酶(CSK)有关;我们发现：βARKct能够取消guanfacine诱导的炎性疼痛小鼠脊髓背角CSK的突触再分布;(6)为直接探讨CSK的痛觉调控作用,我们构建重组腺病毒载体,使脊髓表达无活性的CSK突变体CSK(K222R),结果发现：在正常动物,CSK(K222R)能够升高gluN2B-Tyr1472的磷酸化水平;而在炎性疼痛动物,CSK(K222R)会阻断guanfacine对突触NMDA受体的调节效应;(7)尤为重要的是：通过重组腺病毒载体、使炎性疼痛动物的脊髓背角表达野生型CSK[CSK(WT)],能够产生和guanfacine相似的效应,即：降低gluNl/gluN2B亚基的突触表达水平,逆转gluN2B-Tyr1472的磷酸化,阻断NMDA受体介导的痛觉突触传递,有效缓解慢性炎性疼痛症状。结论：去甲肾上腺素α2A受体,能够通过gβγ/CSK信号通路,抑制Src对gluN2B的磷酸化、降低gluN2B的突触表达,这可能是α2A受体干预慢性炎性疼痛的一条重要途径。

关键词：去甲肾上腺素α2A受体 C-末端Src激酶 gβγ亚基炎性疼痛 N-甲基-D-天冬氨酸型谷氨酸受体

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gβγ亚基及其下游分子对吗啡诱导小鼠的抓挠行为的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2023年第7期37卷 532-532页

作者：马芳周培岚苏瑞斌军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室神经精神药理学北京市重点实验室

目的建立鞘内吗啡给药致痒小鼠模型，探究gβγ亚基及下游信号分子对鞘内吗啡所致瘙痒作用的影响。方法选用C57BL/6J雄性小鼠，鞘内注射吗啡建立瘙痒模型，探究gβγ亚基及下游相关分子抑制剂对吗啡所致瘙痒行为的影响。同时取小鼠腰... 详细信息

目的建立鞘内吗啡给药致痒小鼠模型，探究gβγ亚基及下游信号分子对鞘内吗啡所致瘙痒作用的影响。方法选用C57BL/6J雄性小鼠，鞘内注射吗啡建立瘙痒模型，探究gβγ亚基及下游相关分子抑制剂对吗啡所致瘙痒行为的影响。同时取小鼠腰段脊髓组织采用Western印迹法检测gβγ亚基抑制后下游相关蛋白表达水平，以期揭示gβγ亚基在鞘内吗啡致痒机制中的影响。结果鞘内注射吗啡(1 nmol/5μL)后小鼠抓挠行为明显增加。gβγ亚基抑制剂gallein(2.5 mg·kg-1)和拮抗肽βARKct明显降低了吗啡诱导的小鼠的抓挠回合数和次数。与μ阿片受体敲除一样，gallien在WT小鼠腰段脊髓抑制吗啡诱导的PLCβ磷酸化(p PLCβ)、Ca2+上调和ERK1/2磷酸化(p ERK1/2)。此外，PLCβ蛋白抑制剂U73122(每只小鼠10 nmol)、细胞内Ca2+阻滞剂肝素(每只小鼠5 nmol)、L型Ca2+通道阻滞剂尼莫地平(4 mg·kg-1)和ERK1/2抑制剂U0126(每只小鼠5nmol)可降低吗啡诱导的C57BL/6J小鼠的瘙痒行为。结论 gβγ亚基可能通过PLCβ/IP3/Ca2+/ERK1/2信号通路介导吗啡诱导的小鼠抓挠行为。靶向gβγ亚基及通路抑制剂可能抑制鞘内吗啡诱导的瘙痒作用。

关键词：鞘内吗啡瘙痒抓挠行为 gβγ亚基

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g蛋白偶联受体激活Rho gTPases的研究

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免疫学杂志 2002年第B6期18卷 91-94页

作者：韦娜第三军医大学营养卫生学教研室重庆400038

g蛋白偶联受体是细胞表面一类重要的受体蛋白。它将各种胞外刺激传导入胞内 ,促使位于g蛋白下游的RhogTPases活化 ,活化的RhogTPases作用于效应因子后调控MAPK及转录因子的活性 ,从而调控细胞的增殖、分化或调亡。但这一复杂的调控机制... 详细信息

g蛋白偶联受体是细胞表面一类重要的受体蛋白。它将各种胞外刺激传导入胞内 ,促使位于g蛋白下游的RhogTPases活化 ,活化的RhogTPases作用于效应因子后调控MAPK及转录因子的活性 ,从而调控细胞的增殖、分化或调亡。但这一复杂的调控机制还未被完全了解 ,本文拟从gPCRs的多样性和g蛋白α、β和γ亚基在信号通路中不同程度的激活 ,来探讨g蛋白偶联受体活化RhogTPases的可能机制。

关键词： g蛋白偶联受体 gα亚基 gβγ亚基 Rho gTPase

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DOM激活5-HT2AR致小鼠甩头反应的信号通路研究

DOM激活5-HT2AR致小鼠甩头反应的信号通路研究

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作者：朱慧丽烟台大学

学位级别：硕士

研究背景:2,5-二甲氧基-4-甲基苯丙胺(2,5-dimethoxy-4-methylamphetamine,DOM)是一种强大的精神活性物质,可以强烈改变人的知觉、情绪和认知。DOM为新型毒品的一种,严重危害公众健康和财产安全。近年来,众多研究表明,DOM具有很好的医... 详细信息

研究背景:2,5-二甲氧基-4-甲基苯丙胺(2,5-dimethoxy-4-methylamphetamine,DOM)是一种强大的精神活性物质,可以强烈改变人的知觉、情绪和认知。DOM为新型毒品的一种,严重危害公众健康和财产安全。近年来,众多研究表明,DOM具有很好的医疗价值。DOM激活5-羟色胺2A受体(5-hydroxytryptamine 2A Receptor,5-HTR)可以使人产生幻觉,但受体后精确的分子调节机制还不清楚。如何趋利避害的使用DOM首先要明确它们作用的机制。甩头反应(Head twitch response,HTR)是啮齿类动物在给予DOM后产生的一种节律性、阵发性、快速左右侧头旋转的运动。小鼠的甩头反应与DOM在人类的幻觉效应高度相关。另外一些5-HTR激动剂,如麦角乙脲(Lisuride,LIS)和麦角胺(Ergotamine,ERg)在临床应用时没有使人产生幻觉的报道,也不引起小鼠甩头反应。研究者们猜测这种差异可能与5-HTR信号转导的偏向性有关。5-HTR除了偶联经典的gα-PLC信号通路外,还可以偶联gα、gα和β-arrestin2信号通路,但主要介导甩头反应的受体后信号通路尚无定论。研究目的与意义:明确DOM诱发小鼠甩头反应的关键分子通路,阐明DOM特殊药理作用的分子机制,为设计合成具有治疗作用、无致幻作用的新化合物提供理论基础。研究思路与方法:(1)5-HTR介导DOM致小鼠甩头反应的验证选用两类工具药:DOM和LIS。用自发活动模型评价DOM与LIS对C57BL/6J小鼠运动能力的影响。用甩头反应模型评价DOM与LIS对C57BL/6J小鼠甩头反应的影响;并预先给予5-HTR高选择性拮抗剂M100907验证5-HTR是DOM致小鼠甩头反应的关键靶点。(2)5-HTR介导DOM甩头反应的信号通路机制(1)C57BL/6J小鼠分别预先给予gα抑制剂(YM-254890)、钙库抑制剂(TMB-8、heparin)和L型钙通道阻断剂(nimodipine),探究gα信号通路对DOM诱导小鼠甩头反应的影响。选用瞬转或稳转5-HTR的HEK293细胞,探究DOM与LIS激活5-HTR后对胞内下游分子IP1(HTRF IP1实验)、Ca(FLIPR Calcium 6实验)、c AMP(glo Sensorc AMP实验)的影响。预先给予YM-254890探究gα信号通路对DOM升高胞内IP1、Ca、c AMP含量的影响。(2)C57BL/6J小鼠预先给予gα抑制剂PTX,探究gα信号通路对DOM诱导小鼠甩头反应的影响。(3)C57BL/6J小鼠预先给予gα抑制剂(melittin)、c AMP的类似物(8-Br-c AMP),探究gα信号通路对DOM诱导小鼠甩头反应的影响。瞬转或稳转5-HTR的HEK293细胞,预先给予melittin,探究gα信号通路对DOM升高胞内c AMP、IP1、Ca含量的影响。(4)C57BL/6J小鼠预先给予gβγ抑制剂(gallein)或全脑过表达gβγ抑制肽(βARK),探究gβγ信号通路对DOM诱导小鼠甩头反应的影响。瞬转或稳转5-HTR的HEK293细胞,预先给予gallein,探究gβγ信号通路对DOM升高胞内c AMP、IP1、Ca含量的影响。(5)利用C57BL/6Jβ-arrestin2基因敲除小鼠,探究β-arrestin2信号通路对DOM诱导小鼠甩头反应的影响。研究结果:(1)DOM致小鼠甩头反应的靶点验证(1)DOM在低剂量时对小鼠的自发活动有增加的趋势,LIS低剂量时对小鼠的自发活动无影响,DOM和LIS在高剂量时与溶媒组相比均明显减弱小鼠的自发活动(Pg/kg,i.p.)诱导的小鼠甩头反应;选用对小鼠自发活动及甩头反应都没有影响的M100907(10.00μg/kg,i.p.),给药后能够显著抑制DOM诱导的小鼠甩头反应(Pgα信号通路与小鼠甩头反应的关系:gα抑制剂YM-254890(0.10nmol/5μL,i.c.v.)可显著降低DOM诱导的甩头反应(Pg/5μL,i.c.v.)及heparin(5.00 nmol/5μL,i.c.v.)均可显著降低DOM诱导的甩头反应(Pg/kg,i.p.)也可以显著降低DOM诱导的甩头反应(P<0.01)。在稳转5-HTR-HEK2

关键词： 5-HT2A受体 gαq/11亚基 gαi/o亚基 gαs亚基 gβγ亚基

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