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fhl2基因表达改变对急性红白血病细胞生物学功能的影响

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白血病．淋巴瘤 2014年第6期23卷 321-324,338页

作者：于滕滕贾玉娇邱少伟王厚才邢海燕田征唐克晶饶青王敏中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨fhl2基因对人类急性红白血病细胞生物学功能的影响.方法应用Western blot检测常见白血病细胞系（K562、HEK293T、U937、HL-60、Kasumi-1、SKNO-1、NB-4及Nalm-6）fhl2蛋白表达情况.采用RNA干扰技术设计并合成fhl2 mRNA特异性s... 详细信息

目的探讨fhl2基因对人类急性红白血病细胞生物学功能的影响.方法应用Western blot检测常见白血病细胞系（K562、HEK293T、U937、HL-60、Kasumi-1、SKNO-1、NB-4及Nalm-6）fhl2蛋白表达情况.采用RNA干扰技术设计并合成fhl2 mRNA特异性shRNA,构建pLKO.1-puro干扰载体,制备慢病毒并感染人类急性红白血病K562细胞;应用实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测干扰效率;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测干扰fhl2对细胞增殖能力的影响;用流式细胞术分析细胞凋亡的变化.结果 fhl2在K562、Kasumi-1和Nalm-6等白血病细胞系中表达,尤其在K562细胞中高表达.Western blot检测显示干扰fhl2的K562细胞fhl2蛋白相对表达水平较转染阴性对照序列的K562细胞明显下降（相对表达水平分别为1、0.284,t=8.872,P=0.0004）,干扰K562细胞中fhl2基因表达能够抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡.结论 fhl2基因在多种白血病细胞系中表达升高.shRNA靶向干扰fhl2基因的表达可有效抑制K562细胞的增殖,促进其凋亡.

关键词： RNA 小分子干扰 fhl2基因 K562细胞细胞增殖细胞凋亡

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fhl2基因异位表达对肺癌细胞的影响

湖南师范大学自然科学学报 2019年第4期42卷 41-46页

作者：刘志强朱双丽花瑞江志刚林礼梁积峰陈宇温瑶王跃群刘作良吴秀山范雄伟湖南师范大学心脏发育研究中心省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室动物多肽药物创制国家地方联合工程实验室中国长沙410081 中南大学湘雅三医院重症医学科中国长沙410013

依据细胞的全能性,心肌细胞中的高表达基因可能对细胞增殖具有一定的抑制作用。fhl2作为心脏高表达的基因,为证实其对癌细胞增殖具有一定的抑制作用,通过COSMIC网站对fhl2基因进行生物信息学、统计学分析,发现其与肺癌的发生有一定的相... 详细信息

依据细胞的全能性,心肌细胞中的高表达基因可能对细胞增殖具有一定的抑制作用。fhl2作为心脏高表达的基因,为证实其对癌细胞增殖具有一定的抑制作用,通过COSMIC网站对fhl2基因进行生物信息学、统计学分析,发现其与肺癌的发生有一定的相关性;采用流式细胞术检测过表达fhl2基因的A549细胞的表型,并进一步通过蛋白免疫印迹检测相关的周期蛋白调控因子,结果表明,在A549细胞中过表达fhl2基因会使细胞周期阻滞,伴随着G1/S检验点的相关蛋白因子的表达变化。因此,心脏高表达基因fhl2可能是通过调节细胞周期蛋白阻碍A549细胞的增殖,从而达到对肺癌的发生发展的阻碍作用。

关键词： fhl2基因生物信息学细胞周期流式细胞术蛋白免疫印迹

fhl2基因在鸡骨骼肌卫星细胞增殖与分化中的作用研究

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FHL2基因在鸡骨骼肌卫星细胞增殖与分化中的作用研究

作者：卿莹四川农业大学

学位级别：硕士

fhl2 (Four and a Half LIM protein 2)属于fhl蛋白家族的成员,是一种只含有四个半LIM结构域的蛋白质。已有研究表明,fhl2直接或间接参与调控卫星细胞增值与分化相关重要通路(Wnt/β-catenin, TGFβ)的信号转导过程,且该基因在鸡出生后... 详细信息

fhl2 (Four and a Half LIM protein 2)属于fhl蛋白家族的成员,是一种只含有四个半LIM结构域的蛋白质。已有研究表明,fhl2直接或间接参与调控卫星细胞增值与分化相关重要通路(Wnt/β-catenin, TGFβ)的信号转导过程,且该基因在鸡出生后不同阶段的胸肌中表达呈现显著差异,推测fhl2基因可能为调控鸡骨骼肌卫星细胞增殖分化的重要因子。因此,本研究通过对体外培养的原代鸡胸肌卫星细胞进行fhl2 SiRNA的转染处理,观察对转染不同时间点(12h、24h、48h和72h)的肌卫星细胞增增与分化形态,并通过RT-PCR技术检测转染后(12h、24h和48h)相关成肌调节因子以及Wnt/β-catenin、TGFβ、Notch三条重要信号转导通路中关键基因的1mRNA表达,以及采用Western-Blot检测了fhl2、MYH7B以及NUMB蛋白在转染后(24h、48h和72h)的蛋白表达情况。结果表明：(1)细胞形态学变化：转染后12h,三个试验组细胞在形态学上没有明显的差异;24h后,处理组的卫星细胞数量明显少于两个对照组,对照组细胞极少部分出现分化;48h后,两个对照组细胞长满且大量分化,而处理组细胞少量增殖且仅有极少数细胞开始分化;72h后,两个对照组完全分化且出现肌管,而处理组的细胞数量无明显变化,部分细胞开始分化,但无肌管出现。(2)成肌调节因子的mRNA表达：在转染12h和24h后,处理组中fhl2的mRNA表达显著低于两个对照组(P2h,处理组中成肌调节因子MyoD和MyoG的mRNA表达量显著低于两个对照组(P24h,处理组中MyoG和MYHC的mRNA表达量显著低于两个对照组(P0.05)(3) Notch信号通路：转染12h后,处理组中hairyl的1mRNA表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P24h后,处理组中Notch2、Hey1以及hairy1的mRNA表达量显著或极显著低于对照组(P基因ACVR1的mRNA表达量在转染12h时处理组显著低于两个对照组(P2的mRNA表达量则在转染后三个时间点中均为处理组显著低于两个对照组(P2h后,处理组中β-catenin、Wnt2b以及Wnt4的mRNA表达量显著或极显著低于对照组(P24h后,处理组中Wnt4和Wnt6的mRNA表达量极显著低于对照组(Pfhl2蛋白和MYH7B蛋白的表达量明显低于空白对照组和阴性对照组;在转染72h后,处理组中NUMB蛋白的表达量明显低于两个对照组。综上,转染fhl2 SiRNA后,鸡骨骼肌卫星细胞的增殖和分化均受到明显的抑制,fhl2的表达量降低下调部分成肌因子的表达,Wnt/β-catenin、TGFβ、Notch三条通路的信号转导也受到不同程度的抑制。因此,本研究推测fhl2基因可能通过Wnt/β-catenin、TGFβ、Notch三条通路的信号转导来调控鸡骨骼肌卫星细胞的增殖和分化,从而影响鸡肌肉的生长。

关键词：鸡骨骼肌卫星细胞 fhl2基因增殖分化信号转导通路

牦牛fhl2基因的克隆、组织表达与蛋白定位分析

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畜牧兽医学报 2023年第1期54卷 146-156页

作者：龚三你蒋旭东马瑶卢建远字向东西南民族大学动物科学国家民委重点试验室成都610041

旨在获得牦牛fhl2基因序列,阐明该基因序列、蛋白质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛... 详细信息

旨在获得牦牛fhl2基因序列,阐明该基因序列、蛋白质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛的子宫、输卵管和卵巢为研究材料,利用逆转录PCR(RT-PCR)技术克隆fhl2基因,并使用在线分子生物学软件分析其生物信息学特性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析fhl2基因的组织表达特性;应用免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)技术检测fhl2蛋白在雌性生殖器官的分布和颗粒细胞上的亚细胞定位。结果发现,fhl2基因CDS区全长840 bp (ON456866),编码279个氨基酸,fhl2蛋白属于弱碱性亲水不稳定蛋白,没有跨膜结构。不同物种的fhl2氨基酸序列比对和进化树分析表明,fhl2基因编码区在物种进化中比较保守。RT-qPCR结果显示,fhl2基因在检测的组织都有表达,在心的表达量极显著高于其他检测组织(Pfhl2基因在妊娠期子宫中的表达量极显著高于空怀期(Pfhl2蛋白主要在卵泡颗粒细胞、子宫内膜和输卵管黏膜表达;IF定位结果显示,fhl2蛋白主要分布在卵泡颗粒细胞的细胞核中。综上所述,牦牛fhl2基因在动物进化过程中比较保守,在心、肺、卵巢、输卵管和子宫中表达量高,可能在参与牦牛低氧适应性、卵泡发育和妊娠维持等生理功能的调控中发挥重要作用。

关键词：牦牛 fhl2基因表达特性实时荧光定量PCR 免疫组化

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fhl2基因及其相关疾病的研究进展

医学综述 2017年第4期23卷 645-649,654页

作者：卢文婷王敏中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

fhl2属于fhl家族,含有4个半LIM结构域,其可以通过LIM结构域与其他蛋白质结合,作为支架蛋白调控细胞信号转导和基因转录,在细胞存活、增殖、分化、黏附以及运动等过程中发挥重要作用。在不同类型的肿瘤中,fhl2的表达水平和功能不尽相同,... 详细信息

fhl2属于fhl家族,含有4个半LIM结构域,其可以通过LIM结构域与其他蛋白质结合,作为支架蛋白调控细胞信号转导和基因转录,在细胞存活、增殖、分化、黏附以及运动等过程中发挥重要作用。在不同类型的肿瘤中,fhl2的表达水平和功能不尽相同,提示其在不同肿瘤的发生、发展中,既可作为癌基因又可作为抑癌基因,这可能与其在不同细胞类型中结合的相互作用蛋白不同有关。另外,fhl2还参与动脉粥样硬化、阿尔茨海默病等非肿瘤性疾病的发生、发展。

关键词： fhl2基因转录调控 p53 癌基因抑癌基因疾病

放射诱导基因fhl2在人群中表达水平的检测

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生物技术通讯 2009年第6期20卷 792-794页

作者：王凌雪徐小洁蔺静丁丽华秦玺程龙叶棋浓军事医学科学院生物工程研究所北京100850 解放军总医院第一附属医院北京100048

目的:分析fhl2基因在健康人群个体间表达的差异,评估fhl2作为一种新的辐射生物剂量计的可行性。方法:收集20例健康人血液样本,提取白细胞RNA进行反转录,以β-actin作为内参,利用实时定量PCR方法,检测人群中fhl2基因相对表达水平,并分析... 详细信息

目的:分析fhl2基因在健康人群个体间表达的差异,评估fhl2作为一种新的辐射生物剂量计的可行性。方法:收集20例健康人血液样本,提取白细胞RNA进行反转录,以β-actin作为内参,利用实时定量PCR方法,检测人群中fhl2基因相对表达水平,并分析其差异。结果:fhl2和β-actin基因的实时定量PCR熔解曲线均为单峰,所得到的Ct值与相应的PCR产物呈良好的线性关系;20例血液标本中fhl2表达水平之间存在较大差异,且其表达水平与性别无关。结论:公认的放射诱导基因fhl2可能不适合作为辐射生物剂量计。

关键词： fhl2基因基因表达生物剂量计

fhl2在人胆管癌组织中的表达及其临床意义

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江苏医药 2012年第12期38卷 1413-1414,F0002页

作者：田舍张弛孙跃明南京医科大学第一附属医院普通外科江苏省210029

目的探讨fhl2基因在上皮间质转化过程中的功能及其临床意义。方法用免疫组织化学方法检测35例胆管癌组织、10例正常胆管黏膜组织中fhl2蛋白的表达,分析其与相关临床病理因素的关系。结果 fhl2蛋白在胆管癌组织表达率为91.4%,显著高于正... 详细信息

目的探讨fhl2基因在上皮间质转化过程中的功能及其临床意义。方法用免疫组织化学方法检测35例胆管癌组织、10例正常胆管黏膜组织中fhl2蛋白的表达,分析其与相关临床病理因素的关系。结果 fhl2蛋白在胆管癌组织表达率为91.4%,显著高于正常胆管黏膜组织的10.0%(Pfhl2蛋白在胆管癌的高表达,在预示肿瘤的发展与侵袭方面有重要作用。

关键词：胆管癌 fhl2基因

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fhl2在大肠癌组织中的表达及其作用

实用医学杂志 2006年第17期22卷 1979-1981页

作者：杨洲徐迪晖张宇声武金宝王继德南方医科大学南方医院消化内科研究所广州市在读硕士研究生510515

目的:探讨fhl2基因在大肠癌中的表达及其临床意义。方法:用免疫组织化学方法检测35例大肠癌组织、15例大肠息肉组织和15例正常结肠黏膜组织中fhl2蛋白的表达情况,并分析其与相关临床病理因素的关系。结果:fhl2蛋白表达阳性率在大肠癌组... 详细信息

目的:探讨fhl2基因在大肠癌中的表达及其临床意义。方法:用免疫组织化学方法检测35例大肠癌组织、15例大肠息肉组织和15例正常结肠黏膜组织中fhl2蛋白的表达情况,并分析其与相关临床病理因素的关系。结果:fhl2蛋白表达阳性率在大肠癌组织中显著高于正常大肠黏膜组织和大肠息肉组织。结论:fhl2蛋白在大肠癌组织中高度表达,但表达程度与癌症病理分级无明显相关性。

关键词：结直肠肿瘤 fhl2基因免疫组织化学

绵羊fhl2蛋白原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备

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畜禽业 2021年第1期32卷 3-4页

作者：聂晓宁李闰婷陈龙欣李玉华聂文营张丽萌王林青郑州师范学院分子生物学实验室河南郑州450044

通过表达和纯化重组的绵羊fhl2抗原蛋白和制备其多克隆抗体,用于研究该蛋白的生物学功能及绵羊繁殖调控的作用机制。研究采用PCR技术扩增绵羊fhl2蛋白的编码序列,利用限制性内切酶双酶切后插入pET28a-sumo中,加入0.5 M IPTG诱导蛋白表达... 详细信息

通过表达和纯化重组的绵羊fhl2抗原蛋白和制备其多克隆抗体,用于研究该蛋白的生物学功能及绵羊繁殖调控的作用机制。研究采用PCR技术扩增绵羊fhl2蛋白的编码序列,利用限制性内切酶双酶切后插入pET28a-sumo中,加入0.5 M IPTG诱导蛋白表达,利用Ni-NTA纯化获得48 ku的重组fhl2蛋白。以重组fhl2蛋白为抗原,混合佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,获得抗fhl2的多克隆抗体,间接ELISA检测结果显示抗体效价达到16400。通过转染pEGFP-C1-fhl2质粒至HEK 293F细胞,提取细胞总蛋白,利用制备的抗fhl2多克隆抗体检测蛋白的结合力,具有良好的免疫原性,为研究fhl2蛋白的生物学功能及繁殖调控机制提供良好的基础材料。

关键词：绵羊 fhl2基因原核表达蛋白纯化多克隆抗体