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IGSF10通过抑制fak/pi3k/akt信号通路降低右美托咪定对乳腺癌促进作用的研究

中华肿瘤防治杂志 2022年第14期29卷 1052-1061页

作者：吴娜萍张磊方琦王磊苏州大学附属第三医院乳腺外科江苏常州213000

目的探讨免疫球蛋白超家族成员10(IGSF10)对右美托咪定(DEX)干预的乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响及作用机制。方法以人正常乳腺上皮细胞MCF-10A,人乳腺癌细胞MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231和MDA-MB-415为... 详细信息

目的探讨免疫球蛋白超家族成员10(IGSF10)对右美托咪定(DEX)干预的乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响及作用机制。方法以人正常乳腺上皮细胞MCF-10A,人乳腺癌细胞MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231和MDA-MB-415为研究对象,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测IGSF10在细胞中的表达。选取IGSF10表达最低的细胞株为后续实验的研究对象。分为空白对照组、过表达阴性对照组和IGSF10过表达组,用于研究IGSF10对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响;分为空白对照组、DEX组、DEX+过表达阴性对照组和DEX+IGSF10过表达组,用于研究IGSF10对DEX诱导的乳腺癌细胞的影响。IGSF10过表达质粒载体转染乳腺癌细胞;细胞计数盒8(CCk8)、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测IGSF10对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹法检测IGSF10对增殖细胞核抗原(PCNA)、ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadberin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、黏着斑激酶(fak)、磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)和蛋白激酶B(akt)表达的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞系MCF-7(0.66±0.06和0.76±0.07)、ZR-75-1(0.60±0.04和0.69±0.05)、MDA-MB-231(0.31±0.04和0.38±0.06)和MDA-MB-415(0.39±0.03和0.43±0.05)中IGSF10 mRNA和蛋白表达水平降低(F值分别为105.80和66.41,均P31细胞株进行后续实验。与空白对照组和过表达阴性对照组相比,IGSF10过表达组24和48 h细胞活力(F_(24 h)=35.84,F_(48 h)=28.30,均Pki-67、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin、磷酸化(p-)fak/fak、p-pi3k/pi3k和p-akt/akt蛋白表达下调(F值分别为20.68、22.58、38.49、31.93、35.49、28.33、78.22、52.17和10.60,均P3。与空白对照组相比,DEX组24和48 h细胞活力、克隆数量、细胞迁移和侵袭能力均增加,PCNA、ki-67、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin、磷酸化(p-)fak/fak、p-pi3k/pi3k和p-akt/akt蛋白表达上调,且E-cadherin蛋白表达下调。IGSF10过表达部分逆转了DEX对MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT的影响。结论IGSF10可能通过调节fak/pi3k/akt信号通路抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并且逆转了DEX对乳腺癌细胞恶性行为的促进作用。

关键词：乳腺癌免疫球蛋白超家族成员10 右美托咪定 fak/pi3k/akt信号通路增殖侵袭迁移

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相思藤总黄酮基于fak/pi3k/akt信号通路抗CCl4大鼠肝纤维化作用机制的研究

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广西医科大学学报 2020年第10期37卷 1816-1823页

作者：韦淇元诸葛芳粟莲玉唐秀能黄仁彬朱金芳欧灿纯广西中医药大学南宁530000 广西壮族自治区妇幼保健院南宁530003 广西医科大学南宁530021 南宁市第五人民医院南宁530001

目的:研究相思藤总黄酮(XSTF)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠HF的保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg),XSTF高、中、低剂量组(800 mg/kg、400 mg/kg、200 mg/kg),每组12只,除正常对照... 详细信息

目的:研究相思藤总黄酮(XSTF)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠HF的保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg),XSTF高、中、低剂量组(800 mg/kg、400 mg/kg、200 mg/kg),每组12只,除正常对照组外,其余各组大鼠灌胃给予剂量50%CCl4花生油混合液(1 mL/kg)制备肝纤维化(HF)模型,2次/周。确定大鼠形成HF后连续4周,每日给予大鼠秋水仙碱和XSTF相应剂量药物,正常对照组和模型组给予相应体积的生理盐水。给药期间,除正常对照组外,其余各组同时继续造模处理。末次给药24 h后,收集血清及肝组织,检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;制备肝脏匀浆,检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织fak、pi3k、akt mRNA表达情况;免疫组化法检测肝组织中pi3k、akt蛋白表达水平。结果:XSTF干预后可明显抑制CCl4诱导的肝脏氧化应激反应,与模型组大鼠相比,XSTF给药组血清中TNF-α、IL-6含量显著降低(Ppi3k、akt蛋白表达水平明显上升(Pfak、pi3k、akt的mRNA表达水平明显提升(Pfak/pi3k/akt信号传导通路有关。

关键词：相思藤总黄酮肝纤维化炎症因子免疫组化作用机制 fak/pi3k/akt信号通路

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瑞德西韦抑制胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移侵袭的作用及机制研究

瑞德西韦抑制胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移侵袭的作用及机制研究

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作者：任洁西南大学

学位级别：硕士

胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)是中枢神经系统实体瘤中常见的神经上皮肿瘤,被世界卫生组织(WHO)归类为Ⅳ级胶质瘤,是恶性程度最高、致命性最强的原发性脑肿瘤。除此之外,GBM是脑瘤中最具侵袭性的一种,其侵袭性特征部分是由于其高迁移... 详细信息

胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)是中枢神经系统实体瘤中常见的神经上皮肿瘤,被世界卫生组织(WHO)归类为Ⅳ级胶质瘤,是恶性程度最高、致命性最强的原发性脑肿瘤。除此之外,GBM是脑瘤中最具侵袭性的一种,其侵袭性特征部分是由于其高迁移潜能从而侵入周围组织。GBM患者的预后极差,一般确诊后的中位生存期仅为14个月,1年生存率为39.5%,5年生存率仅为5.4%。GBM的全球年发病率约为3～4/10万人,在发展中国家十分常见。临床上GBM的常规治疗手段是手术切除后辅以放疗和替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)治疗,但TMZ易出现耐药性问题,大部分患者在接受治疗后6个月内易复发。因此,亟需探索新的GBM治疗药物。药物再利用(也称为老药新用)是将已批准药物用于另一适应症,具有降低药物研发失败风险、缩短研发周期、降低研发成本等优势。我们前期药物筛选发现瑞德西韦(Remdesivir,RDS)具有较强的抗GBM细胞的活性。RDS是一种新型的1’-氰基取代核苷类似物的磷酸化前药,是一种广谱抗病毒药物,对多种RNA逆转录病毒有较好的抑制作用,包括埃博拉病毒、冠状病毒等。RDS通过抑制RNA逆转录病毒中的RNA依赖型RNA聚合酶(Rd Rp)发挥抗病毒作用,其三磷酸代谢物NTP可作为RNA合成底物掺入病毒RNA中,与内源性核苷酸竞争,导致复制提前终止,以此抑制病毒增殖。血液和大脑之间形成的可渗透血脑屏障是影响GBM药物治疗效果的一大原因,而RDS具有良好的血脑屏障渗透能力。近年来,大量证据表明一些抗病毒药物具有抗肿瘤活性,而且也发现抗病毒药物与常用化疗药物联用可增强抗肿瘤效果。然而,RDS对GBM细胞的影响以及分子作用机制尚不清楚,缺乏相关研究。在本文中,我们通过开展体外细胞学和体内动物实验研究RDS在抑制GBM细胞增殖和迁移侵袭中的作用,并探索其分子作用机制。本文所取得的主要研究结果如下:1、RDS抑制GBM细胞的增殖和克隆形成能力为了探究RDS对GBM细胞增殖的影响,我们使用不同浓度的RDS处理5种GBM细胞系,发现随着药物浓度升高,细胞活力逐渐降低,且呈现出明显的浓度依赖效应。RDS对U87-MG和LN229 GBM细胞的抑制效果最为显著,其半抑制浓度(IC50值)分别为11.88μM和5.418μM。我们通过MTT实验、细胞计数实验、Edu实验及平板克隆形成实验检测发现RDS能显著抑制GBM细胞增殖和克隆形成能力。通过流式细胞术检测RDS对GBM细胞周期进程的影响,发现RDS能够使细胞阻滞在G2/M期。免疫印迹实验检测相关周期蛋白表达发现G2/M期相关蛋白cyclin B1、cyclin A2和CDk1显著下调。通过软琼脂克隆形成实验和皮下成瘤实验发现RDS显著抑制GBM细胞在体外体内实验条件下的成瘤能力。2、RDS抑制GBM细胞的迁移和侵袭能力为了探究RDS对GBM细胞迁移和侵袭能力的影响,我们通过细胞划痕愈合实验和细胞迁移能力分析实验发现RDS能够显著抑制GBM细胞迁移能力。通过在加基质胶的小室中进行细胞侵袭能力分析实验发现RDS能够显著抑制GBM细胞侵袭能力。最后通过免疫印迹实验检测RDS对迁移侵袭相关蛋白的影响,结果显示N-cadherin和Vimentin表达下调,而E-cadherin表达上调。3、RDS抑制GBM细胞的fak/pi3k/akt信号通路为了探究RDS抑制GBM细胞增殖和迁移侵袭能力的作用机制,首先对RDS处理后的GBM细胞进行RNA转录组测序分析,测序结果显示调控肿瘤细胞迁移侵袭的细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)、细胞外基质受体相互作用(ECM receptor interaction)、上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因发生了显著下调;此外,正向调控肿瘤细胞增殖和迁移侵袭的fak/pi3k/akt信号通路也明显被抑制。通过免疫印迹实验验证RDS处理后fak/pi3k/akt信号通路相关蛋白的表达,发现fak、pi3k、akt蛋白磷酸化水平明显下降,证实此信号通路被RDS所抑制。4、RDS通过抑制fak/pi3k/akt信号通路抑制GBM细胞的增殖和迁移侵袭为了进一步研究RDS抑制GBM细胞增殖和迁移侵袭的作用与fak/pi3k/akt信号通路的关系,我们通过检测fak抑制剂PF573228或pi3k抑制剂LY294002与RDS联用后对GBM细胞增殖和迁移侵袭能力的影响,结果发现GBM细胞增殖和迁移侵袭能力被进一步抑制,并通过免疫印迹实验检测fak/pi3k/akt信号通路相关蛋白得到验证。这些结果说明RDS可通过调控fak/pi3k/akt信号通路而发挥抑制GBM细胞增殖和迁移侵袭的作用。综

关键词： RDS GBM 细胞增殖迁移侵袭 fak/pi3k/akt信号通路

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相思藤总黄酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用及其机制研究

相思藤总黄酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用及其机制研究

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作者：韦淇元广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究相思藤总黄酮(XIANGSITENG Flavonoid,XSTF)对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用及作用机制。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2mg/kg)、相思藤总黄酮高、中、低剂量组(800、400、200mg/kg),... 详细信息

目的:研究相思藤总黄酮(XIANGSITENG Flavonoid,XSTF)对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用及作用机制。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2mg/kg)、相思藤总黄酮高、中、低剂量组(800、400、200mg/kg),除正常对照组外,其余各组大鼠灌胃给予剂量为0.1ml/kg 50%-四氯化碳花生油混合液制造肝纤维化模型,每周两次。确定大鼠形成肝纤维化后连续四周每日给予大鼠秋水仙碱和相思藤总黄酮相应剂量药物,正常对照组和模型组给予相应体积的生理盐水。在给药期间,除正常对照组外,其余各组同时继续造模处理。末次给药24h后,收集血清及肝组织,称量肝脏、脾脏、胸腺重量,分别计算脏器指数;检测大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、层粘蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;制备肝脏匀浆,检测肝组织中羟脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量;取大鼠肝组织固定于10%甲醛中用于苏木素-伊红(HE)染色,MASSON染色观察病理变化及胶原堆积情况;免疫组化法检测肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、pi3k、akt蛋白表达水平;荧光定量PCR检测肝组织fak、pi3k、akt m RNA表达情况。结果:与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠肝脾指数显著升高(Ppi3k、akt蛋白表达水平明显上升(Pfak、pi3k、akt的m RNA表达水平提升(Pfak-pi3k-akt信号通路中fak、pi3k、akt m RNA和pi3k、akt蛋白的表达(Pfak m RNA及akt蛋白的表达(Pfak/pi3k/akt信号传导通路有关。

关键词：相思藤总黄酮肝纤维化 fak/pi3k/akt信号通路

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