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cAMP衍生物特异性激活epac2/Akt信号通路促进大鼠脊髓损伤的修复

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第三军医大学学报 2012年第24期34卷 2493-2497页

作者：张涛文益民魏祥科李含兰州大学第二临床医学院科教科兰州730000 兰州军区兰州总医院脊柱外科兰州730050

目的研究应用cAMP衍生物特异性激活epac2/Akt信号通路在哺乳动物脊髓损伤中的病理和生理机制。方法 96只成年健康雌性SD大鼠,完全随机分为4组(n=24),A、B、C组均采用改良Allen重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型。A组给予8-CPT-2'-O-Me-cAM... 详细信息

目的研究应用cAMP衍生物特异性激活epac2/Akt信号通路在哺乳动物脊髓损伤中的病理和生理机制。方法 96只成年健康雌性SD大鼠,完全随机分为4组(n=24),A、B、C组均采用改良Allen重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型。A组给予8-CPT-2'-O-Me-cAMP 0.5 mg/(kg·d)、B组给予等量10%(体积分数)DMSO、C组给予8-CPT-2'-O-Me-cAMP 0.5 mg/(kg·d)加LY294002 0.2 mg/(kg·d)各7 d。D组为正常对照组。各组分别于1、2、3、4周采用BBB评分法评估大鼠后肢功能恢复情况,各时间点取材行HE染色、免疫荧光、实时荧光定量PCR检测脊髓细胞标志物(Nestin、NF200、GFAP)和通路因子(epac2、Akt)的表达。结果 A组大鼠在术后1～4周BBB评分持续升高,均高于B、C组(P2、3周,A组epac2 mRNA表达与C组epac2 mRNA表达差异无意义,但高于B组(P200 mRNA表达在各期均高于B、C、D组(Pepac2/Akt通路,促使神经干细胞分化和神经细胞增殖,有助于脊髓修复。

关键词：脊髓损伤环磷腺苷 epac2 信号通路大鼠

epac2/P38MAPK信号通路在创伤性颅脑损伤中的作用与机制研究

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Epac2/P38MAPK信号通路在创伤性颅脑损伤中的作用与机制研究

作者：王欢景苏州大学

学位级别：硕士

目的创伤性脑损伤（TBI）是全球死亡和残疾的主要原因。TBI诱导的神经元凋亡是继发性损伤过程的主要原因之一。本研究的目的是分析epac2（Exchange protein directly activated by cAMP2）在TBI病理过程中的作用与机制。方法1.自由落体... 详细信息

目的创伤性脑损伤（TBI）是全球死亡和残疾的主要原因。TBI诱导的神经元凋亡是继发性损伤过程的主要原因之一。本研究的目的是分析epac2（Exchange protein directly activated by cAMP2）在TBI病理过程中的作用与机制。方法1.自由落体撞击法制作创伤性颅脑损伤大鼠模型,收集颅脑损伤后6小时,12小时,24小时,48小时,72小时的大鼠脑组织标本,利用免疫荧光染色和Western Blot技术检测epac2在脑损伤后不同时间点在脑内的表达水平及在大脑皮层组织内的表达定位。2.大鼠被随机分为假手术组,TBI组,溶剂组,epac2抑制剂（ESI-05）组。在TBI前30分钟向空白溶剂组和ESI-05组大鼠脑室内分别注射1%DMSO和ESI-05（10μg/kg,溶于1%DMSO）,颅脑损伤12小时后测定各组大鼠神经行为学评分,然后收集各组大鼠脑组织。3.利用Western Blot技术检测P38、p-P38、caspase-3在各组大鼠脑组织中的表达水平,利用免疫荧光染色技术检测caspase-3在各组大鼠脑组织中的表达水平及定位,利用FJB、Tunel染色检测各组大鼠的神经细胞凋亡情况,利用干湿重法测定各组大鼠脑组织含水量情况。4.最后我们利用SPSS统计软件对所有实验数据进行统计分析。结果***2与神经元共定位,并且TBI后12小时epac2的表达水平显著升高。***组神经行为评分显著高于假手术组（神经功能评分越高表明神经功能损伤越重）,表明TBI组大鼠与假手术组相比有明显的神经功能缺损,而ESI-05治疗组可显著降低神经行为评分,表明抑制epac2后改善了TBI后的神经行为障碍,epac2表达水平的降低有助于缓解TBI后的神经功能障碍。3、发现TBI组大鼠的脑含水量较假手术组显著增加,而ESI-05组可显著改善这一情况,空白溶剂组则不能,说明抑制epac2有助于改善TBI后的脑水肿。4、Western Blot和免疫荧光染色结果显示,ESI-05处理组中caspase-3的表达显著降低,在假手术组中发现少量FJB阳性和TUNEL阳性凋亡细胞,而TBI组凋亡细胞数量显著增加。FJB和TUNEL染色结果表明ESI-05处理组凋亡细胞数量显著减少,各实验组之间P38的表达无显著差异,但TBI后p-P38的表达显著增加,并且用ESI-05处理后可以逆转这种变化,表明epac2可能是通过上调P38的磷酸化水平参与TBI调控的,并且抑制epac2有助于减少TBI后的神经元细胞死亡。结论*** Blot和免疫荧光染色结果表明,在TBI后12小时,epac2的表达显著增加。脑含水量测量显示,抑制epac2能够减轻TBI引起的脑水肿。神经行为测试表明,抑制epac2能够改善TBI后的神经功能障碍。免疫荧光染色,FJB染色,TUNEL染色,Western Blot都显示epac2抑制后TBI模型中的神经元细胞死亡也显著减少,并且epac2可能是通过促进P38的磷酸化参与到这一过程。2.抑制epac2可能通过减轻神经细胞死亡,减轻脑水肿和改善神经功能障碍在TBI中起到神经保护作用,这意味着epac2可能成为治疗TBI后继发性脑损伤的新靶点。

关键词：创伤性脑损伤 epac2 P38 细胞凋亡神经保护

cAMP/epac2/Akt信号通路激活促进大鼠脊髓损伤的修复

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cAMP/Epac2/Akt信号通路激活促进大鼠脊髓损伤的修复

作者：张涛兰州大学

学位级别：硕士

目的研究应用cAMP衍生物特异性激活epac2/Akt信号通路在哺乳动物脊髓损伤中的病理和生理机制。方法96只成年健康雌性SD大鼠,完全随机分为4组(n=24),A、B、C组均采用改良Allens重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型。A组给予8-CPT-2’-O-Me-c... 详细信息

目的研究应用cAMP衍生物特异性激活epac2/Akt信号通路在哺乳动物脊髓损伤中的病理和生理机制。方法96只成年健康雌性SD大鼠,完全随机分为4组(n=24),A、B、C组均采用改良Allens重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型。A组给予8-CPT-2’-O-Me-cAMP[0.5mg/(kg·d)]、B组给予等量10%DMSO(体积分数)、C组给予8-CPT-2’-O-Me-cAMP[0.5mg/(kg·d)]加LY294002[0.2mg/(kg·d)]各7天。D组为正常对照组。各组分别于1、2、3、4周采用BBB评分法评估大鼠后肢功能恢复情况,各时间点取材行HE染色、免疫荧光、实时荧光定量PCR检测脊髓细胞标志物(Nestin、NF200、GFAP)和通路因子(epac2、Akt)的表达。结果A组大鼠在术后1-4周BBB评分持续升高,均高于B、C组(P2、3周,A组epac2mRNA表达与C组epac2mRNA表达差异无意义,但高于B组(Pepac2mRNA。A组Akt mRNA表达高于B组(P200、mRNA表达在各期均高于B、C、D组(Pepac2/Akt通路,促使神经干细胞分化和神经细胞增殖,有助于脊髓修复。

关键词：脊髓损伤环磷腺苷 epac2 信号通路大鼠

环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白（epac）在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中表达水平及临床意义

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环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白（EPAC）在晚期非小细胞肺癌（NSCL...

作者：熊元成皖南医学院

学位级别：硕士

目的:随着现代医疗水平日新月异的发展,晚期非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床治疗已日益成熟,多种抗癌方案的组合也被用于控制肿瘤畸形生长,所以寻找到有效的肺癌靶向治疗的有效生物标志物至关重要,本研究主要探... 详细信息

目的:随着现代医疗水平日新月异的发展,晚期非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床治疗已日益成熟,多种抗癌方案的组合也被用于控制肿瘤畸形生长,所以寻找到有效的肺癌靶向治疗的有效生物标志物至关重要,本研究主要探索的是环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,c AMP)直接激活蛋白(Exchange protein directly activated by c AMP,epac)在晚期NSCLC中的表达水平及临床意义,并研究epac作为晚期NSCLC治疗靶点的可行性。方法:收集2021年04月至2022年10月于皖南医学院第一附属医院医院确诊的40例晚期NSCLC患者作为研究对象,并在病理科收集正常肺组织(肿瘤手术患者癌旁正常组织)24例做对照,取得标本将其置于装有RNAlater的无酶EP管中,于4°冰箱里过夜,次日再将其从RNAlater中转移至新的无酶EP管中冷藏于-80°的冰箱里,采用定量RT-PCR法测定每一个标本中epac1、epac2的表达水平,研究epac1和epac2分别在肺肿瘤组织和正常组织的表达水平是否具有差异性;同时再进一步分析epac1和epac2这两种信号通路蛋白的表达水平分别在患者的临床特征中有无明显的差异性;将epac1、epac2肿瘤组织样本中的表达量进行相关性分析。结果:1.肺肿瘤组织中epac1的表达量较正常组织有着明显的降低(P2.肺肿瘤组织中的epac2的表达量较正常组织中的有着显著升高(P=0.035);***1和epac2在肺肿瘤组织中的表达水平与患者的临床特征(性别、年龄、组织病理学类型、TNM分期、中性粒-淋巴细胞比值、原发肿瘤大小、吸烟史、ECOG评分、远处转移)之间均无明显统计学差异(P>0.05);***患者肺肿瘤组织中的这两种epac蛋白的表达水平之间无相关性(R=0.2409,P>0.05);***曲线分析中epac1的曲线下面积(Area under the curve,AUC)=0.9073(Pepac2的AUC=0.6583(P2在晚期NSCLC患者肿瘤组织中表达水平较正常组织显著增高。***1、epac2的表达水平对晚期NSCLC的诊断具有一定参考意义。

关键词：非小细胞肺癌 epac1 epac2

epac对乙醛诱导的大鼠肝星状细胞增殖和激活的作用

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EPAC对乙醛诱导的大鼠肝星状细胞增殖和激活的作用

作者：杨岩安徽医科大学

学位级别：硕士

酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)是由于长期大量饮酒而导致的肝脏损害性病变。酒精性肝纤维化(alcoholic liver fibrosis, ALF)是ALD进展为酒精性肝硬化或肝癌的中间阶段和必经病理过程。在ALF的发生过程中,乙醇可通过其直接... 详细信息

酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)是由于长期大量饮酒而导致的肝脏损害性病变。酒精性肝纤维化(alcoholic liver fibrosis, ALF)是ALD进展为酒精性肝硬化或肝癌的中间阶段和必经病理过程。在ALF的发生过程中,乙醇可通过其直接代谢产物乙醛激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),活化的HSC是肝纤维化过程中细胞外基质(Extra cellular matrix,ECM)的主要来源,也是各种因素所致肝纤维化发生的核心和关键环节。cAMP信号通路是细胞内非常重要的信号传递途径之一,最初认为蛋白激酶A(PKA)是其唯一的下游效应因子。cAMP/PKA通过磷酸化cAMP反应序列结合蛋白(CREB)的Ser-133位点使之活化,然后作用于cAMP反应序列影响基因表达,进而调控细胞的生长、分化。课题组前期研究已经探讨了cAMP/PKA/CREB信号通路在大鼠酒精性肝纤维化模型和乙醛刺激的大鼠肝星状细胞中的作用。epac(exchange protein directly activated by cAMP)是一种由cAMP激活的鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factors,GEFs),又称为cAMP-GEF,是1998年de Rooij等新发现的独立于PKA的cAMP下游效应因子,在许多重要的细胞生理病理进程中都发挥重要的调控作用。这提示了cAMP细胞中的效应可能不只是由以前鉴定的靶蛋白所介导。cAMP通过epac活化Rapl, Rapl是Ras样的小分子G蛋白,通过与epac结合而被活化,epac能增加这类小分子G蛋白对GTP的摄取并使之形成有活性的GTP结合构象。目前为止已发现了两种epac亚型：epac1 (RapGEF3)和epac2 (RapGEF4),由不同的基因编码。那么,epac基因是否在大鼠肝星状细胞中表达呢?如果表达又起到什么样的作用呢?是否和PKA作用相同?因此,本课题的研究内容是在采用乙醛诱导HSC-T6细胞建立离体大鼠酒精性肝纤维化HSC模型的基础上,运用RNA干扰技术和epac激动剂,观察epac1和epac2的表达对α-SMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达的影响,为酒精性肝纤维化的防治提供新的靶点。主要内容概括如下：***在大鼠肝星状细胞中的表达情况实验采用大鼠HSC-T6细胞系为研究对象,用浓度为200μM乙醛处理细胞48 h,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、Western blot分别检测epac1和epac2的mRNA与蛋白的表达水平。结果显示,epac1和epac2在正常HSC均有表达,与正常组比较,经200μM乙醛作用48 h后,HSC模型组epac2表达水平明显增高,而epac1表达水平显著下降。提示epac1和epac2在乙醛诱导的HSC中可能起到不同的作用。2. epac对乙醛刺激的HSC—T6增殖和激活的作用实验设正常对照组(常规培养), 模型组,epac激动剂(8-(4-Chlorophenylthio)-2’-O-methyladenosine 3’,5’-cyclic monophosphate monosodium hydrate, Me-cAMP)组。除正常对照组外其余各组均以200μM乙醛作用48 h,制备大鼠酒精性肝纤维化HSC模型。Me-cAMP组在乙醛作用24 h后再加入Me-cAMP继续共同作用24 h。利用MTT法检测Me-cAMP对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测Me-cAMP对细胞周期的影响。qRT-PCR及Westernblot法分别检测HSC-T6的α-SMA、Ⅰ型和III胶原mRNA和蛋白表达以及Rapl的蛋白表达。与模型组比较,Me-cAMP明显增加了epac1和2的表达,使epac1的表达升高了约三倍,并且使细胞增殖活力明显下降。流式细胞分析表明Me-cAMP使S期和G2/M期细胞数目比例显著下降。qRT-PCR及Western blot实验表明α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ胶原的表达与模型组比较,均呈现出显著下降。当epac被激活之后,epac的下游分子Rap1活性形式Rap1-GTP的蛋白表达也同样上升。以上结果提示,在HSC存在epac/Rap1信号通路,并且epac激活后,乙醛诱导的的HSC-T6的激活和增殖均受到抑制。3、epac siRNA在乙醛刺激的HSC—T6中的作用建立上述HSC模型,设计并合成epac1和epac2小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA),通过脂质体Lipofectamine TM 2000瞬时转染至HSC-T6细胞内,荧光倒置显微镜观察

关键词：乙醛大鼠肝星状细胞 epac1 epac2 Rap1

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epac与神经系统疾病的相关性研究进展

中国实用神经疾病杂志 2018年第9期21卷 1041-1044页

作者：刘静陶欣荣杨辉张荣波安徽理工大学医学院医学前沿实验中心安徽淮南232001

epac是近年来新发现的分子,单独或与PKA联合接受cAMP的作用。epac在体内广泛分布,也导致其功能的多样性。研究发现,epac在精神分裂症、阿尔兹海默综合征、自闭症等神经系统疾病中扮演重要作用。本文从epac的分布、结构和功能以及与神经... 详细信息

epac是近年来新发现的分子,单独或与PKA联合接受cAMP的作用。epac在体内广泛分布,也导致其功能的多样性。研究发现,epac在精神分裂症、阿尔兹海默综合征、自闭症等神经系统疾病中扮演重要作用。本文从epac的分布、结构和功能以及与神经系统疾病的相关性作一综述。

关键词： epac epac1 epac2 精神分裂症阿尔兹海默综合征自闭症