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lncRNA MAPKAPK5-AS1通过结合EZH2抑制ADH1A促进肝细胞癌发生发展的机制初探

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lncRNA MAPKAPK5-AS1通过结合EZH2抑制ADH1A促进肝细胞癌发生发展...

作者：薛乐乐石河子大学

学位级别：硕士

目的:探讨长链非编码RNA MAPKAPK5-AS1(long noncodingRNA MAPKAPK5-AS1,lncRNA MAPKAPK5-AS1)招募基因增强子同源物2(Enhancer of zeste homolog 2,EZH2)介导乙醇脱氢酶1(Alcohol dehydrogenase1,ADH1A)发生组蛋白甲基化并促进肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展的作用机制。方法:1.生物信息学分析ADH1A组蛋白甲基化状态,筛选介导ADH1A发生组蛋白甲基化的关键组蛋白甲基化转移酶;采用q RT-PCR法检测EZH2在肝细胞癌组织中的表达,应用免疫组化法检测EZH2在肝细胞癌以及癌旁正常组织中的表达情况;2.应用q RT-PCR法检测EZH2在肝癌细胞(Hep G2、Huh7、PLC/RPF/5、MHCC-97H)、正常肝细胞(L02)中的表达;使用GSK126组蛋白甲基化抑制剂检测在不同浓度下ADH1A的表达变化;3.采用Western Blot法检测在肝细胞癌中敲低和过表达EZH2后ADH1A的蛋白表达水平;4.挽救实验验证ADH1A是否参与了EZH2促进肝细胞癌增殖的调控;5.应用q RT-PCR实验检测lncRNA MPAKPK5-AS1、lncRNA MIR4435-2HG和LINC00680在肝细胞癌中的表达,并分析其表达水平与患者的预后关系;6.联合生物信息学方法和FISH以及免疫荧光技术分析lncRNA MAPAKPK5-AS1和EZH2在肝细胞癌细胞中的共定位结合情况;7.采用Western Blot法检测在肝细胞癌中敲低lncRNA MAPAKP5-AS1后ADH1A的蛋白表达水平;8.挽救实验验证lncRNA MAPKAPK5-AS1通过EZH2调控ADH1A的表达介导肝细胞癌的增殖和迁移能力的调控。结果:1.生物信息学分析显示ADH1A在肝细胞癌中可存在组蛋白甲基化现象,EZH2是介导ADH1A组蛋白甲基化的关键基因。2.肝细胞癌组织中EZH2过表达与ADH1A的mRNA和蛋白表达水平存在显著负相关,且EZH2+/ADH1A表型与患者的不良预后密切相关(P均2和MHCC-97H中,随着组蛋白甲基化抑制剂GSK126浓度的增高,ADH1A的蛋白表达水平也随之增高;敲降EZH2后ADH1A的蛋白表达水平也明显增高,同时H3K27me3表达降低;而过表达EZH2后ADH1A的蛋白表达水平明显降低(P均2和MHCC-97H中敲降EZH2后能明显抑制肝癌细胞的增殖和迁移,挽救实验证明了同时敲低ADH1A和EZH2可以逆转单独敲除EZH2对肝细胞癌迁移的抑制作用(P均EZH2以及ADH1A存在显著相关性(P均EZH2呈显著正相关,与ADH1A呈显著负相关(P均2和MHCC-97H中敲低lncRNA MAPKAPK5-AS1后,ADH1A的蛋白表达显著增加,挽救实验证明了同时敲低ADH1A和lncRNA MAPKAPK5-AS1后可以逆转单独敲除lncRNA MAPKAPK5-AS1对肝细胞癌增殖和迁移的抑制作用(P均EZH2在肝癌细胞中存在共定位现象,并且挽救实验显示lncRNA MAPKAPK5-AS1可以通过EZH2调控ADH1A的表达(P均EZH2调控ADH1A的表达并促进肝细胞癌中肝细胞癌的恶性生物学行为。2.lncRNA MAPKAPK5-AS1和EZH2的过表达预示着肝细胞癌的高侵袭性和肿瘤患者的不良预后。

关键词：肝细胞癌 ADH1A lncRNA MAPKAPK5-AS1 EZH2 组蛋白甲基化

Transcriptional repression by androgen receptor: roles in castration-resistant prostate cancer

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Asian Journal of Andrology 2019年第3期21卷 215-223页

作者： Galina Gritsina Wei-Qiang Gao Jindan Yu Division of Hematology/Oncology Department of Medicine Northwestern University Feinberg School of Medicine Chicago IL 60611 USA Med-X Research Institute and School of Biomedical Engineering Shanghai Jiao Tong University Shanghai 200030 China Department of Biochemistry and Molecular Genetics Northwestern University Feinberg School of Medicine Chicago IL 60611 USA Robert H. Lurie Comprehensive Cancer Center Northwestern University Chicago IL 60611 USA

Androgen receptor (AR), a hormonal transcription factor, plays important roles during prostate cancer progression and is a key target for therapeutic interventions. While androgen-deprivation therapies are initially successful in regressing prostate tumors, the disease ultimately comes back as castration-resistant prostate cancer (CRPC) or at the late stage as neuroendocrine prostate cancer (NEPC). CRPC remains largely dependent on hyperactive AR signaling in the milieu of low androgen, while NEPC is negative of AR expression but positive of many AR-repressed genes. Recent technological advances in genome-wide analysis of transcription factor binding sites have revealed an unprecedented set of AR target genes. In addition to its well-known function in activating gene expression, AR is increasingly known to also act as a transcriptional repressor. Here, we review the molecular mechanisms by which AR represses gene expression. We also summarize AR-repressed genes that are aberrantly upregulated in CRPC and NEPC and represent promising targets for therapeutic intervention.

关键词： androgen receptor CRPC EZH2 histone modifications NEPC targeted therapy transcriptional repressor

Epigenetic regulation of prostate cancer

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Genes & Diseases 2020年第4期7卷 606-613页

作者： Ruixin Wang Xiaoqi Liu Department of Biochemistry Purdue UniversityWest LafayetteIN47907USA Department of Toxicology and Cancer Biology University of KentuckyLexingtonKY40536USA Markey Cancer Center University of KentuckyLexingtonKY40536USA

Prostate cancer is(PCa)the second leading cause of cancer death in males in the United State,with 174,650 new cases and 31,620 deaths estimated in 2019.It has been documented that epigenetic deregulation such as histone modification and DNA methylation contributes to PCa initiation and progression.EZH2(enhancer of zeste homolog 2),the catalytic subunit of the Polycomb Repressive Complex(PRC2)responsible for H3K27me3 and gene repression,has been identified as a promising target in PCa.In addition,overexpression of other epigenetic regulators such as DNA methyltransferases(DNMT)is also observed in PCa.These epigenetic regulators undergo extensive post-translational modifications,in particular,phosphorylation.AKT,CDKs,PLK1,PKA,ATR and DNA-PK are the established kinases responsible for phosphorylation of various epigenetic regulators.

关键词： DNMT Epigenetics EZH2 HDAC Phosphorylation Prostate cancer

EZH2/HAS3调控辐射诱导的肺癌细胞迁移和侵袭作用及机制

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EZH2/HAS3调控辐射诱导的肺癌细胞迁移和侵袭作用及机制

作者：刘兆旭吉林大学

学位级别：硕士

研究背景:肺癌是全世界范围内最常见的癌症。放射治疗是肿瘤治疗的主要手段之一,具有至关重要的地位和作用。透明质酸(Hyaluronic acid,HA)作为一种重要的生物大分子,是细胞外基质的主要成分之一,参与许多的生理和病理过程,例如细胞增... 详细信息

研究背景:肺癌是全世界范围内最常见的癌症。放射治疗是肿瘤治疗的主要手段之一,具有至关重要的地位和作用。透明质酸(Hyaluronic acid,HA)作为一种重要的生物大分子,是细胞外基质的主要成分之一,参与许多的生理和病理过程,例如细胞增殖、细胞迁移和细胞凋亡等。近年来研究表明,HA不仅在正常的生物学过程中起着重要的作用,同时在疾病的发生和发展中也扮演着重要角色,如肿瘤、炎症和心血管疾病等。透明质酸合酶(HAS)负责HA的合成。有研究发现,在多种肿瘤细胞中,HAS的表达水平显著增加。这些HA的改变与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等生物学特征密切相关。HAS家族包括HAS1、HAS2和HAS3,其中HAS1和HAS2主要合成大分子量HA,HAS3合成小分子量HA。有文献报道称,小分子量HA具有促进细胞迁移和侵袭的作用。EZH2(Enhancer of zeste homologue 2)是一种组蛋白甲基转移酶,是Polycomb重组蛋白复合物2(PRC2)的核心成员之一。可通过H3K27me3抑制下游基因表达。有研究发现,EZH2在多种肿瘤组织中高表达,并且与肿瘤细胞的生长、分化和转移等密切相关。最近有研究发现,EZH2参与透明质酸的生物合成和肿瘤的发生发展过程。因此,本研究拟探讨EZH2/HAS3调控辐射诱导的肺癌细胞迁移和侵袭作用及机制,为肺癌的辐射治疗提供新思路和新依据。研究目的:观察辐射条件下A549细胞和H1299细胞敲低HAS3后细胞迁移、侵袭能力及细胞骨架改变情况;验证EZH2与HAS3之间的调控关系。研究方法:1.采用划痕实验,观察A549细胞和H1299细胞辐射前后细胞迁移能力变化;辐射条件下(A549细胞照射10Gy,H1299细胞照射6Gy),观察A549细胞和H1299细胞敲低HAS3后细胞迁移能力变化;观察H1299细胞过表达EZH2后细胞迁移能力变化。2.采用Transwell实验,观察A549细胞和H1299细胞辐射前后细胞侵袭能力变化;观察A549细胞和H1299细胞敲低HAS3后细胞侵袭能力变化;观察H1299细胞过表达EZH2后细胞侵袭能力变化。3.采用鬼笔环肽细胞骨架染色法,观察A549细胞和H1299细胞辐射前后细胞骨架变化;观察A549细胞和H1299细胞敲低HAS3后细胞骨架变化。4.采用瞬时转染实验,在A549细胞和H1299细胞瞬转si HAS3,检测A549细胞和H1299细胞中HAS3 m RNA和蛋白表达水平;在H1299细胞中瞬转EZH2过表达质粒,检测H1299细胞中EZH2 m RNA和蛋白表达水平。5.采用慢病毒转染实验,构建A549-EZH2细胞模型。6.采用RT-q PCR实验,检测A549细胞和H1299细胞瞬转si HAS3后,HAS3m RNA表达水平;检测H1299细胞过表达EZH2后,EZH2和HAS3 m RNA表达水平。7.采用Western Blot实验,检测A549细胞和H1299细胞辐射前后HAS3、EZH2和HAS家族蛋白表达水平;检测A549细胞和H1299细胞瞬转si HAS3后HAS3蛋白表达水平;检测H1299细胞过表达EZH2后,EZH2蛋白表达水平;检测A549-EZH2细胞模型中,H3K27me3蛋白表达水平。8.采用CHIP-PCR实验,检测EZH2介导H3K27me3在HAS3启动子区域富集情况。研究结果:1.辐射条件下肺癌细胞迁移、侵袭能力及细胞骨架改变情况(1)肺癌细胞迁移能力变化划痕实验结果显示:A549细胞照射组相比于假照组,细胞的迁移能力明显提高,10Gy照射后24 h和48 h结果具有统计学意义(P299细胞照射组相比于假照组,细胞迁移能力也明显提高,6Gy照射后24 h结果具有统计学意义(P2)肺癌细胞侵袭能力变化细胞Transwell实验结果显示:A549细胞照射组相比于假照组,小室下层细胞数量明显增多,10Gy照射后24 h结果具有统计学意义(P299细胞照射组相比于假照组,小室下层细胞数量也明显增多,6Gy照射后24 h和48 h结果均具有统计学意义(P299细胞照射组相比于假照组,细胞的微丝结构明显增多。2.辐射条件下肺癌细胞中HAS3表达变化A549细胞和H1299细胞辐射后HAS3蛋白表达水平明显升高。3.辐射条件下肺癌细胞敲低HAS3后细胞迁移、侵袭能力及细胞骨架变化(1)肺癌细胞中敲低HAS3后m RNA及蛋白水平检测A549细胞和H1299细胞瞬转si HAS3,24 h后检测m RNA表达水平。RT-q PCR结果显示,实验组相比于对照组,两种肺癌细胞中HAS3 m RNA表达水平均显著降低(P<0

关键词：电离辐射肺腺癌 EZH2 HAS3

组蛋白甲基化酶EZH2在支气管哮喘免疫病理中的作用及机制初探

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组蛋白甲基化酶EZH2在支气管哮喘免疫病理中的作用及机制初探

作者：张伟利苏州大学

学位级别：硕士

背景:支气管哮喘(简称哮喘)是儿童最常见的气道慢性炎症性疾病,其发病率逐年增高,严重影响儿童的身心健康,疾病医疗负担沉重。目前关于哮喘机制的研究主要集中于Th细胞的免疫失衡,包括Th1/Th2和Th17/Treg的比例失衡上面。近年来,关于Th... 详细信息

背景:支气管哮喘(简称哮喘)是儿童最常见的气道慢性炎症性疾病,其发病率逐年增高,严重影响儿童的身心健康,疾病医疗负担沉重。目前关于哮喘机制的研究主要集中于Th细胞的免疫失衡,包括Th1/Th2和Th17/Treg的比例失衡上面。近年来,关于Th9细胞参与哮喘免疫的报道也很多。哮喘是多基因遗传易感性疾病,但是对于同卵双胞胎患者的研究发现,虽然基因相同,但是哮喘的发病情况有很大的差别。因此,遗传免疫学机制不能完全解释其全部的机制。儿童哮喘的表观遗传学研究确定了与气道和免疫细胞过敏性炎症相关的特定甲基化特征,表明甲基化在哮喘发病机制中的调节作用。组蛋白的甲基化可以调控某些基因的转录,作为组蛋白甲基化酶EZH2能催化H3K27me3的生成,从而调控免疫细胞的功能。有研究表明,EZH2敲除可导致Th1、Th2细胞分化增强,并且能促进分化的Th1转化为Th2细胞,以及相应的细胞因子,如IL-4、IL-5、IL-13分泌增强,加重哮喘的炎症反应。而另有研究发现EZH2的抑制剂能显著抑制嗜酸性粒细胞的浸润和杯状细胞增生,抑制肺泡灌洗液中IL-4分泌,从而缓解过敏性哮喘的呼吸道炎症。因此,EZH2对哮喘的作用结果不统一,促使我们对此进行进一步研究。第一部分分析哮喘患者外周血中的Th细胞比例以及EZH2和H3K27me3表达水平目的:检测哮喘患者外周血Th细胞比例以及Zeste增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)和H3K27me3表达水平,探讨其与哮喘之间的关系。方法:收集哮喘急性期组和健康对照组患儿外周血标本,提取淋巴细胞进行流式分析,检测相关Th细胞比例,以及相关分子的表达情况。结果:流式分析提示,与健康对照组比较,哮喘急性期组患儿外周血中CD4+IL-4+Th2细胞数量明显增多(PEZH2含量无明显改变,但是H3K27me3含量明显增多(PEZH2酶活性增强,伴随Th2细胞在单位体积外周血中的绝对值增高,同时Th2细胞内H3K27me3产量无显著改变,说明EZH2酶活性增强可能促进了 Th2细胞的分化。Th2细胞的数量增多或者活性增强,导致TH2细胞因子的免疫活性亢进,导致Th1/Th2免疫失衡,引起哮喘患者体内炎症反应过度,引起后续一系列的免疫反应,如嗜酸性粒细胞在肺部的聚集、IgE分泌增多、肺组织炎症细胞浸润,气道上皮细胞黏液分泌增多,气道高反应状态等,最终导致哮喘的发生或促进哮喘的发生发展。第二部分EZH2抑制剂GSK126缓解OVA哮喘小鼠肺组织免疫病理的作用研究目的:探讨抑制EZH2抑制剂GSK126对OVA哮喘小鼠肺组织免疫病理的影响。方法:1.将6-8周的雌性BALB/C小鼠随机分成3组:健康对照(Control,Ctrl)组、OVA组和GSK126组,每组10只。2.构建OVA哮喘模型:第0天和第7天给予腹腔注射OVA溶液100ul/只致敏小鼠;第17、18、19、20天进行OVA雾化激发;第21天行肺功能检测,之后收集肺组织进行后续检测。OVA组和GSK126组分别与每次激发前给予DMSO或GSK126溶液腹腔注射。健康对照组以PBS代替OVA,不予其他处理。3.在OVA最后一次激发24 h后,使用小鼠无创肺功能仪测定各组小鼠对不同浓度乙酰甲胆碱激发后表现出的气道高反应性。对肺组织进行HE染色和PAS染色,评估气道周围炎症细胞浸润及黏液分泌情况。流式细胞术分析肺组织细胞相关蛋白表达差异,并进行多因子检测,分析EZH2抑制剂GSK126对哮喘免疫病理的作用。结果:1.较之OVA组小鼠,GSK126组小鼠行为学评分显著降低(P2.GSK126组小鼠肺组织细胞内IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及TNF-α显著降低,IL-22 显著升高,而 IL-2、IL-6、IL-10、IL-9、IL-17A 及IL-17F 均无明显变化。结论:EZH2对免疫机制的调控比较复杂,牵涉到众多的免疫细胞的参与,包括Th1、Th2、Th17、Treg,以及Th22等,甚至T淋巴细胞之外的细胞。但是,总的结论是EZH2酶抑制剂GSK126可以通过抑制IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及TNF-α,以及促进IL-22的分泌而有效的缓解了哮喘小鼠气道的炎症反应。其中的具体机制需要大量的研究工作去一步一步验证。本实验将对Th2和Th9,以及MDSC等部分内容进行探索。第三部分探讨EZH2潜在作用的靶细胞目的:探讨在哮喘中EZH2调控哮喘免疫病理可能作用的靶细胞。方法:取健康小鼠的脾脏,分离纯化CD4+na?ve T细胞,分别在Th0、Th2、Th9细胞诱导条件下培养,并给予不同浓度的G

关键词：哮喘组蛋白甲基化酶 EZH2 Th2 GSK126 哮喘模型 Th2 细胞 MDSC

EZH2在支气管上皮细胞炎症反应中的作用及机制研究

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EZH2在支气管上皮细胞炎症反应中的作用及机制研究

作者：杨贤苗江苏大学

学位级别：硕士

研究背景和目的支气管哮喘是一种由遗传因素和环境因素共同作用的异质性疾病。气道上皮在受到过敏原、空气污染物以及病原微生物等刺激时,上皮的屏障功能的破坏是气道炎症的重要机制。zeste增强子人类同源物2(EZH2)可发挥抑制基因表达... 详细信息

研究背景和目的支气管哮喘是一种由遗传因素和环境因素共同作用的异质性疾病。气道上皮在受到过敏原、空气污染物以及病原微生物等刺激时,上皮的屏障功能的破坏是气道炎症的重要机制。zeste增强子人类同源物2(EZH2)可发挥抑制基因表达的作用,参与炎症、自身免疫、恶性肿瘤的进展,但在哮喘的发病机制中的研究甚少。本研究旨在脂多糖(LPS)构建的BEAS-2B细胞炎症反应模型中探究EZH2在LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症反应中发挥的生物学作用及可能的机制。研究方法1.LPS诱导BEAS-2B细胞的炎症模型构建1.1用0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml的LPS刺激BEAS-2B细胞12 h后,CCK-8法检测细胞活力变化。1.2 BEAS-2B细胞经LPS(10μg/ml)刺激12 h,q RT-PCR检测IL-6、IL-8、TNF-α、mi R-139-5p、Notch1 m RNA表达。Western blot检测Notch1、EZH2、H3K27me3蛋白表达。2.干扰EZH2对BEAS-2B细胞炎症的影响在BEAS-2B细胞中转染si-EZH2及其阴性对照24 h后用LPS刺激12 h,通过q RT-PCR和Western blot法检测各处理组细胞炎症因子IL-6、IL-8、TNF-αm RNA及蛋白表达水平。3.干扰EZH2抑制BEAS-2B细胞炎症反应的分子机制在BEAS-2B细胞中转染si-NC、si-EZH2、mimic-NC、inhibitor-NC、mi R-139-5p mimic、mi R-139-5p inhibitor、si-EZH2+mi R-139-5p inhibitor 24 h后用LPS刺激12 h,采用q RT-PCR法检测mi R-139-5p、Notch1的m RNA表达水平,随后通过Western blot法检测Notch1蛋白表达水平。研究结果1.LPS可以诱导构建细胞炎症模型1.1 LPS(0.1μg/ml及其以上浓度)能抑制细胞活力,且浓度越高,抑制作用越强。选择10μg/ml LPS进行后续实验。1.2 LPS处理组细胞中的IL-6、IL-8、TNF-α、Notch1 m RNA相对表达量以及EZH2、H3K27me3、Notch1蛋白表达水平较对照组上调,mi R-139-5p m RNA表达较对照组下调。2.干扰EZH2可减轻BEAS-2B细胞的炎症反应转染si-EZH2组的细胞中IL-6、IL-8、TNF-α表达水平下调,同时H3K27me3蛋白表达水平也下调。3.EZH2可通过调控EZH2-mi R-139-5p-Notch1轴参与BEAS-2B细胞炎症反应。3.1转染si-EZH2或mi R-139-5p mimic后,IL-6、IL-8、TNF-α的表达下调。转染mi R-139-5p inhibitor后,IL-6、IL-8、TNF-α的表达上调。转染si-EZH2+mi R-139-5p inhibitor后,能够部分挽救si-EZH2组下调的IL-6、IL-8、TNF-α的表达。3.2转染mi R-139-5p mimic后,Notch1 m RNA和蛋白表达水平降低,相反转染mi R-139-5p inhibitor后,Notch1表达水平升高。与对照组相比,转染si-EZH2能够降低细胞中Notch1表达水平,转染si-EZH2+mi R-139-5p inhibitor后能够部分挽救si-EZH2对Notch1表达的抑制作用。研究结论在LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症模型中,干扰EZH2通过上调mi R-139-5p从而抑制其靶基因Notch1表达减轻LPS诱导的细胞炎症反应。

关键词：支气管哮喘支气管上皮细胞 EZH2 miR-139-5p Notch1

Inhibition of pancreatic EZH2 restores progenitor insulin in T1D donor

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Signal Transduction and Targeted Therapy 2022年第8期7卷 3045-3053页

作者： Keith Al-Hasani Ishant Khurana Lina Mariana Thomas Loudovaris Scott Maxwell K.N.Harikrishnan Jun Okabe Mark ECooper Assam El-Osta Department of Diabetes Central Clinical SchoolMonash UniversityMelbourneVictoria 3004Australia Epigenetics in Human Health and Disease Laboratory Central Clinical SchoolMonash UniversityMelbourneVictoria 3004Australia Immunology and Diabetes Unit St Vincent’s Institute of Medical ResearchFitzroyVictoriaAustralia Department of Clinical Pathology The University of MelbourneParkvilleVictoriaAustralia Department of Medicine and Therapeutics The Chinese University of Hong KongSha TinHong Kong SAR Hong Kong Institute of Diabetes and Obesity Prince of Wales HospitalThe Chinese University of Hong Kong3/F Lui Che Woo Clinical Sciences Building30-32 Ngan Shing StreetSha TinHong Kong SAR Li Ka Shing Institute of Health Sciences The Chinese University of Hong KongSha TinHong Kong SAR Faculty of Health Department of TechnologyBiomedical Laboratory ScienceUniversity College CopenhagenCopenhagenDenmark

Type 1 diabetes(T1D)is an autoimmune disease that selectively destroys insulin-producingβ-cells in the pancreas.An unmet need in diabetes management,current therapy is focussed on transplantation.While the reprogramming of progenitor cells into functional insulin-producingβ-cells has also been proposed this remains controversial and poorly understood.The challenge is determining why default transcriptional suppression is refractory to exocrine reactivation.After the death of a 13-year-old girl with established insulin-dependent T1D,pancreatic cells were harvested in an effort to restore and understand exocrine competence.The pancreas showed classic silencing ofβ-cell progenitor genes with barely detectable insulin(Ins)transcript.GSK126,a highly selective inhibitor of EZH2 methyltransferase activity influenced H3K27me3 chromatin content and transcriptional control resulting in the expression of coreβ-cell markers and ductal progenitor genes.GSK126 also reinstated Ins gene expression despite absoluteβ-cell destruction.These studies show the refractory nature of chromatin characterises exocrine suppression influencingβ-cell plasticity.Additional regeneration studies are warranted to determine if the approach of this n-of-1 study generalises to a broader T1D population.

关键词： EZH2 progenitor donor

B细胞内特异性敲除EZH2在小鼠心脏移植排斥反应中的机制研究

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B细胞内特异性敲除Ezh2在小鼠心脏移植排斥反应中的机制研究

作者：李成昊华中科技大学

学位级别：硕士

背景:中国心力衰竭患者超过1000万余,重度心衰患者占7%,而心脏移植是终末期心衰患者最有效的治疗手段。近20年中国心脏移植得到快速发展,心脏移植手术量超过600例/年。移植后排斥反应是影响心脏移植预后的主要因素。随着免疫抑制剂的开... 详细信息

背景:中国心力衰竭患者超过1000万余,重度心衰患者占7%,而心脏移植是终末期心衰患者最有效的治疗手段。近20年中国心脏移植得到快速发展,心脏移植手术量超过600例/年。移植后排斥反应是影响心脏移植预后的主要因素。随着免疫抑制剂的开发,移植后急性排斥反应基本得到解决,但慢性排斥反应仍是移植患者远期生存的严峻挑战。EZH2(enhancer of zeste 2 polycomb repressive complex 2)是多梳抑制复合物2(polycomb repressive complex 2,PRC2)的催化亚单位,在B细胞功能中发挥重要功能,而B细胞在慢性移植排斥反应作用中起重要作用,因此调控B细胞EZH2在心脏移植排斥反应中的作用及机制尚不明确。目的:1.研究特异性敲除B细胞内EZH2对小鼠心脏移植后急慢性排斥的影响。2.研究特异性敲除B细胞内EZH2对移植排斥反应中其他免疫细胞是否存在影响。方法:1.以不同匹配关系分组构建小鼠异位心脏移植模型:Control组,供体为BALB/C小鼠,受体为EZH2fl/flCD19-Cre-小鼠;实验组(EZH2-/-组),供体为BALB/c,受体为EZH2fl/flCD19-Cre+小鼠。2.移植术后7天,流式细胞术检测两组小鼠脾脏细胞内生发中心B细胞、浆细胞和TFH细胞以及骨髓内浆细胞比例变化。同时取移植后7天移植物,进行免疫组化和免疫荧光染色,检测移植物中免疫细胞浸润及血管纤维化。3.移植后第0,3天,向受体小鼠腹腔注射250ug CTLA4-Ig诱导形成小鼠心脏移植慢性排斥模型。于术后0,3,7,14,21,28及35天取受体小鼠尾静脉血留血清,与BALB/C小鼠胸腺细胞孵育30分钟,流式细胞术检测Ig G1+MFI。在术后35天,取移植物及受体脾脏骨髓,移植物行免疫组化染色及免疫荧光染色,脾脏及骨髓流式细胞术检测脾脏细胞内生发中心B细胞、浆细胞和TFH细胞以及骨髓内浆细胞比例变化。同时检测脾脏内TH1和TH17细胞比例变化。结果:1.特异性敲除B细胞内EZH2后,小鼠脾脏生发中心B细胞和浆细胞及骨髓内浆细胞比例明显下降。2.特异性敲除B细胞内EZH2后,并不能延长移植物在急性排斥反应的存活时间。敲除EZH2抑制急性排斥反应中B细胞反应,但并没有减轻急性排斥反应中移植物免疫细胞浸润和纤维化。3.特异性敲除B细胞内EZH2后,移植物在慢性排斥反应中能保持长期存活(>100天),EZH2fl/fl CD19-Cre+小鼠脾脏及骨髓内生发中心B细胞和浆细胞比例明显下降,供体特异性抗体分泌明显减少。同时异种T细胞反应减轻。慢性排斥反应中移植物免疫细胞浸润及血管纤维化明显减轻。结论:1.敲除B细胞中EZH2不能减轻心脏移植急性排斥反应,敲除EZH2能降低急排中GC B细胞和浆细胞比例,不影响急排中T细胞反应。2.特异性敲除B细胞内EZH2,减少了特异性抗原生发中心B细胞和浆细胞生成,抑制了特异性B细胞介导的体液免疫。同时减少了慢性排斥反应中的T细胞免疫反应。3.特异性敲除B细胞,减少了生发中心B细胞和浆细胞生成,不能减轻心脏移植急性排斥反应。在慢性排斥反应中,移植物能够长期存活。说明B细胞主要参与慢性排斥反应的发生进行,敲除EZH2能够减轻移植物慢性排斥,是新的心脏移植慢性排斥治疗靶点。

关键词：心脏移植移植排斥反应 B细胞 EZH2

DZNep inhibits the proliferation of colon cancer HCT116 cells by inducing senescence and apoptosis

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2015年第3期5卷 188-193页

作者： Mingquan Sha Genxiang Mao Guofu Wang Yufeng Chen Xiaojian Wu Zhen Wang Institute of Medicinal Biotechnology Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College Zhejiang Provincial Key Laboratory of Geriatrics & Geriatrics Institute of Zhejiang Province Zhejiang Hospital Department of Colorectal Surgery The Sixth Affiliated HospitalSun Yat-sen University

EZH2 is over-expressed in human colon cancer and is closely associated with tumor proliferation,metastasis and poor prognosis.Targeting and inhibiting EZH2 may be an effective therapeutic strategy for colon cancer.3-Deazaneplanocin A(DZNep),as an EZH2 inhibitor,can suppress cancer cell growth.However,the anti-cancer role of DZNep in colon cancer cells has been rarely studied.In this study,we demonstrate that DZNep can inhibit the growth and survival of colon cancer HCT116 cells by inducing cellular senescence and apoptosis.The study provides a novel view of anti-cancer mechanisms of DZNep in human colon cancer cells.

关键词： EZH2 Human colon cancer HCT116 cells DZNep Anti-cancer mechanisms