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多巴胺神经元毒素重启细胞周期作用的研究

多巴胺神经元毒素重启细胞周期作用的研究

作者：张振涛华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性及细胞周期的影响目的探讨各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性和细胞周期的影响。方法体外培养PC12细胞,用神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞神经元样分化,... 详细信息

第一部分各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性及细胞周期的影响目的探讨各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性和细胞周期的影响。方法体外培养PC12细胞,用神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞神经元样分化,用不同浓度的多巴胺神经元毒素Lactacystin、MPP+、6-OHDA和鱼藤酮处理细胞,四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测细胞代谢活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布。结果NGF诱导分化后PC12细胞停止生长,大部分处于静止期（G0/G1期）,各种多巴胺神经元毒素处理后,PC12细胞活性呈浓度依赖性和时间依赖性降低,细胞凋亡率呈时间依赖性升高（P ＜ 001）。同时细胞周期中G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多（P ＜ 001）。结论细胞周期重新启动参与多巴胺神经元毒素诱导的细胞凋亡。第二部分各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞周期调节因子的影响目的探讨各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞周期调节因子表达的影响。方法体外培养PC12细胞,用神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞神经元样分化,用不同浓度的多巴胺神经元毒素Lactacystin、MPP+、6-OHDA和鱼藤酮处理细胞,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察细胞周期素（CyclinA、CyclinD1、CyclinB1、CyclinE）和细胞周期素依赖性激酶（CDK2、CDK4、CDC2）mRNA表达的改变。结果各种多巴胺神经元毒素处理后,PC12细胞的细胞周期调节因子CyclinA、CyclinD1和CDC2 mRNA表达水平升高（P ＜ 001）,而CyclinB1、CyclinE、CDK2和CDK4 mRNA水平无明显改变（P ＞ 005）。结论各种多巴胺神经元毒素通过上调CyclinA、CyclinD1和CDC2的表达,促进多巴胺神经元细胞周期重新启动。第三部分 erk1/2通路和RB蛋白在多巴胺神经元细胞周期重启中的作用目的探讨erk1/2通路和RB蛋白在多巴胺神经元细胞周期重启中的作用。方法体外培养PC12细胞,用神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞神经元样分化,用不同浓度的多巴胺神经元毒素Lactacystin、MPP+、6-OHDA和鱼藤酮处理细胞,免疫细胞化学方法和免疫印迹方法观察PC12细胞erk1/2通路活化和RB蛋白磷酸化的变化。结果各种多巴胺神经元毒素处理后,总的erk1/2水平无明显改变（P ＞ 005）,而磷酸化erk1/2水平在4 h后明显升高,一直持续到24 h （P ＜ 001）。同时RB蛋白表达水平下降,而磷酸化RB蛋白水平明显升高（P ＜ 001）。结论erk1/2通路活化和RB蛋白磷酸化参与了多巴胺神经元毒素诱导的细胞周期重新启动和细胞凋亡。

关键词：细胞周期凋亡泛素蛋白酶体系统 PC12细胞帕金森病神经元毒素细胞周期素细胞周期素依赖性激酶 erk1/2通路 RB蛋白

猪lincRNA-CXCL6调控LPS诱导炎症反应的机制研究

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猪lincRNA-CXCL6调控LPS诱导炎症反应的机制研究

作者：邢菲南京农业大学

学位级别：硕士

病原体入侵早期,其相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMP)被细胞膜或细胞质中相应的特异性受体(Pattern recognition receptors,PRRs)识别而启动先天免疫,继而开启机体抵御病原体入侵的第一道防线。信号转导过程中... 详细信息

病原体入侵早期,其相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMP)被细胞膜或细胞质中相应的特异性受体(Pattern recognition receptors,PRRs)识别而启动先天免疫,继而开启机体抵御病原体入侵的第一道防线。信号转导过程中,转录因子NF-κb的活化引起TNF-α等炎性因子的表达,进而诱导机体炎症反应。作为主要效应介质,炎性因子在炎症反应过程中发挥着重要作用。炎性因子的释放是一个复杂而又精准的过程,需要一系列基因表达产物的协同作用及信息交互。炎性因子表达中的异常改变会影响宿主对病原微生物的抵御,进而造成机体内平衡失调。长链非编码RNAs(Long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类序列长度超过200 nt的非编码RNA(Non-coding RNAs,ncRNAs),在各种生理活动中均发挥着重要的调控作用。近年来发现lncRNAs可在表观、转录等多个层次调控炎症因子的精细表达,在先天免疫反应中也发挥着重要作用。前期试验发现,在脂蛋白FSL-1刺激的猪原代巨噬细胞中,利用RNA-seq技术鉴定出95个显著差异表达的lncRNAs(P通过分析,我们选取了上调倍数最大之一lincRNA-CXCL6作为研究对象。同时,我们发现该lncRNA的表达水平在脂多糖(LPS)诱导的猪原代巨噬细胞炎症反应中上调更为显著(P2个外显子;通过BLAST比对发现其定位于猪8号染色体,且位于CXCL8及CXCL6基因之间,属于长基因间lincRNAs(Long intergenic non-coding RNAs,lincRNAs)。通过荧光定量PCR(q PCR)检测LPS调控lincRNA-CXCL6的表达模式,结果发现LPS显著促进了lincRNA-CXCL6(P2)为探究该lincRNA在LPS介导炎症反应中的作用,我们构建lincRNA-CXCL6的pcDNA3.1过表达载体。通过脂质体转染,并利用G418(500μg·m L)筛选出稳转pcDNA3.1-lincRNA-CXCL6和空载体pcDNA3.1的RAW264.7细胞系。利用q PCR检测炎性因子的表达变化发现lincRNA-CXCL6的过表达能显著下调炎性因子IL-1β及IL-6的表达(P264.7细胞系来研究lincRNA-CXCL6在LPS介导的炎症反应中的作用及其机制。LPS刺激pcDNA3.1-lincRNA-CXCL6和pcDNA3.1的稳转RAW264.7细胞系6 h,通过RNA-seq分析lincRNA-CXCL6对LPS刺激后的细胞信号通路的影响。结果显示104个显著上调及165个显著下调的差异基因(P2(erk1/2)信号通路及免疫应答相关。(4)为验证lincRNA-CXCL6通过erk1/2通路调控LPS介导的炎症因子表达的假说,利用蛋白质印迹法(Western Blot),检测erk1/2磷酸化水平的变化,以及验证erk1/2通路调控LPS诱导的炎症因子表达。结果发现,lincRNA-CXCL6过表达降低了LPS诱导的erk1/2的磷酸化水平;另一方面用erk1/2抑制剂U0126处理细胞,erk1/2蛋白磷酸化水平受到抑制,并且也抑制了LPS诱导的IL-1β和CCL17的表达(P通过降低erk1/2磷酸化水平来抑制IL-1β及IL-6的表达,进而抑制巨噬细胞的炎症反应。

关键词：猪长链非编码RNA 脂多糖炎症反应 erk1/2通路

i-PRF对人骨髓间充质干细胞成骨分化影响及其机制

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i-PRF对人骨髓间充质干细胞成骨分化影响及其机制

作者：王佳兰州大学

学位级别：硕士

目的:富血小板纤维蛋白在口腔软硬组织再生中应用广泛,但其机制尚未明了,本实验旨在探究注射型富血小板纤维蛋白（injectable-PRF,i-PRF）对人骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells）生物学行为影响,以及该细胞在成骨分化过... 详细信息

目的:富血小板纤维蛋白在口腔软硬组织再生中应用广泛,但其机制尚未明了,本实验旨在探究注射型富血小板纤维蛋白（injectable-PRF,i-PRF）对人骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells）生物学行为影响,以及该细胞在成骨分化过程中作用及其机制。材料与方法:通过全骨髓贴壁法,根据间充质干细胞特性获得细胞后,通过流式细胞仪检测细胞表面分子以及干细胞多向分化能力对细胞进行鉴定。获得人肘前臂静脉血后通过700rpm室温离心3分钟后获得i-PRF。通过扫描电子显微镜（Scanning electron microscope,SEM）和人生长因子阵列膜检测其显微结构和分子组成。并将获得的i-PRF置于完全培养基后获得含有10%、20%和40%的i-PRF。将对照组与各个实验组刺激细胞后通过CCK-8（Cell counting kit-8）、细胞迁移实验、活/死细胞染色确定后续实验浓度。使用含有10%、20%的i-PRF在含有或不含有诱导液的条件下与BMSCs体外培养并通过碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性检测、茜素红染色以及通过RT-q PCR检测成骨相关基因表达。本实验并通过RT-q PCR和Western Bolt探究i-PRF在促进BMSCs成骨分化过程中分子机制。结果:BMSCs表面CD90及CD44阳性率达到97.65%和96.37%,CD34和CD45的阳性率为3.57%和2.35%。并通过成骨分化诱导21天、成脂诱导28天后成骨及成脂诱导阳性。扫描电镜下观察i-PRF为高密度的三维网状结构,含有大量的白细胞和血小板嵌入其复杂的纤维蛋白结构中,并通过人生长因子阵列膜半定量检测i-PRF中所含生长因子类别,其中不仅大量含有EGF,IGF,PDGF等已知因子,还有M-CSF-R,以及β-NGF等尚未报道过的因子。CCK-8结果显示:第3天开始,各组出现差别,直至第7天,含有10%及20%的i-PRF对比空白组细胞增殖率高。但含有40%的i-PRF在第7天细胞增殖则进入了静止期,在所有实验组中以20%的i-PRF在3、5、7天促进细胞增殖作用效果最为显著。并通过活/死细胞染色发现,i-PRF生物相容性良好,所有实验组均无死细胞并且其中通过染色证明10%和20%i-PRF组细胞增殖效果最为明显。以及通过细胞迁移实验进一步证实10%和20%浓度的i-PRF组在促进细胞迁移作用效果最佳。在成骨诱导过程中通过ALP活性和茜素红染色发现,20%浓度的i-PRF可诱导BMSCs成骨分化并显著促进分化。RT-q PCR结果显示,成骨相关基因Runx2,COL1,OCN,OPN在7天培养后,10%和20%i-PRF显著促进Runx2和COL1的表达,但在OCN、OPN的表达上,实验组20%i-PRF可促进其表达但并无显著意义。最终通过RT-q PCR和Western Bolt探究其成骨分化机制中,经过i-PRF处理过的细胞发现,p-erk1/2以及p-PLCγ1经过i-PRF刺激后,比对照组其表达量分别增加47.2%和66%,并且成骨相关蛋白Runx2的表达也有所增加,并高达72.7%。与加入抑制剂U0126相比,可见到Runx2、p-erk1/2以及p-PLCγ1的表达与相应对照组相比均被抑制。RT-q PCR检测也发现相同结果,erk1/2以及基因PLCγ1经过i-PRF刺激后,基因表达量增加,与加入抑制剂U0126相比,可见到erk1/2、Runx2以及PLCγ1的表达被抑制。结论:i-PRF可诱导BMSCs成骨分化,可能通过活化erk1/2通路正向调控BMSCs的成骨分化并促进PLCγ1的表达。

关键词： i-PRF 骨髓间充质干细胞成骨分化 erk1/2通路 PLCγ1通路

血管内皮生长因子受体1在高糖所致足细胞胰岛素抵抗和损伤中的研究

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血管内皮生长因子受体1在高糖所致足细胞胰岛素抵抗和损伤中的研究

作者：张洋华中科技大学

学位级别：硕士

目的:探讨血管内皮生长因子受体1(Vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR1)在高糖所致足细胞胰岛素抵抗和损伤中的作用及机制。方法:1.以癌旁正常肾组织为对照,免疫组织化学法检测糖尿病肾病患者肾组织活检标本肾小球VEG... 详细信息

目的:探讨血管内皮生长因子受体1(Vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR1)在高糖所致足细胞胰岛素抵抗和损伤中的作用及机制。方法:1.以癌旁正常肾组织为对照,免疫组织化学法检测糖尿病肾病患者肾组织活检标本肾小球VEGFR1蛋白表达改变;*** blot方法分别检测链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病肾病小鼠肾皮质及体外高糖培养条件永生化人足细胞VEGFR1蛋白表达较对照组改变;3.体外培养人足细胞系,以葡萄糖摄取实验观察VEGFR1抑制剂GNQWFI(200μg/L)干预对胰岛素刺激下足细胞葡萄糖摄取的影响,免疫荧光及Western blot检测GNQWFI干预对足细胞膜蛋白葡萄萄糖转运蛋白4(Glucose transporter type-4,GLUT-4)表达分布的影响,Western blot检测足细胞胰岛素受体底物1(Insulin receptor substrate-1,IRS-1)磷酸化活性蛋白表达改变;4.以慢病毒为载体,体外转染si-RNA敲低足细胞VEGFR1蛋白表达,Western blot方法检验转染效率;5.体外培养人足细胞系,分别以si RNA转染敲低VEGFR1蛋白表达或GNQWFI干预抑制VEGFR1蛋白活性,Western blot方法检测高糖(HG 30mmol/L)刺激24小时后,足细胞细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,erk)1/2通路磷酸化活性蛋白,及足细胞损伤标志物desmin蛋白表达水平较对照组的改变;6.饲养8周龄野生型雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分为3组:正常对照组(Ctrl组),糖尿病肾病模型组(DN组),糖尿病肾病VEGFR1抑制剂干预组(DN+GNQWFI组);每组各10只。一次性腹腔注射STZ(135mg/kg)建立糖尿病肾病小鼠模型。DN+GNQWFI组小鼠每天皮下注射GNQWFI(200μg/L)1次连续15天。12周后代谢笼留取各组小鼠24小时尿液,检测24小时尿蛋白、尿白蛋白;取小鼠静脉血测血清肌酐、血尿素氮含量;取部分肾皮质以Western blot方法检测erk1/2、p38磷酸化蛋白及desmin蛋白表达水平。结果:1.糖尿病肾病患者肾小球VEGFR1较正常肾组织表达水平增高;2.糖尿病肾病模型小鼠肾皮质VEGFR1表达水平较对照组明显升高,高糖刺激条件永生化人足细胞后,VEGFR1表达明显上调;3.抑制VEGFR1可减少足细胞葡糖摄取及细胞膜表面GLUT-4蛋白表达,降低足细胞IRS-1活性蛋白表达;4.与Scramble si RNA组相比,VEGFR1 si-RNA转染可有效敲低足细胞VEGFR1蛋白表达;5.高糖刺激可导致足细胞胰岛素关键信号通路erk1/2及p38活性磷酸化蛋白表达上调;敲低VEGFR1蛋白表达或抑制其活性可部分缓解高糖刺激所致足细胞胰岛素信号通路蛋白表达改变;6.与正常对照组相比,糖尿病肾病组小鼠肾皮质erk1/2及p38活性磷酸化蛋白表达明显增高,VEGFR1抑制剂干预组p-erk1/2、p-p38及desmin蛋白表达较糖尿病肾病组明显降低。结论:足细胞VEGFR1表达上调可能是高糖诱导足细胞胰岛素抵抗的重要机制之一,抑制VEGFR1能部分缓解高糖诱导的足细胞损伤。VEGFR1可能通过参与激活erk1/2信号通路,参与胰岛素信号传导,影响胰岛素诱导葡萄糖摄取及GLUT-4转位,从而介导足细胞胰岛素抵抗和损伤。

关键词：血管内皮生长因子受体1 erk1/2通路胰岛素抵抗足细胞损伤

槲皮素对肾上腺素促进三阴乳腺癌细胞的增殖、迁移的影响及其相关机制的研究

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槲皮素对肾上腺素促进三阴乳腺癌细胞的增殖、迁移的影响及其相关...

作者：张家宁锦州医科大学

学位级别：硕士

目的评估槲皮素(Quercetin,Que)对肾上腺素(Adrenaline,A)促进三阴乳腺癌细胞增殖、迁移的影响并探究其相关机制。方法1、Western blot法检测正常乳腺上皮MCF-10A细胞、三阴乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中β2肾上腺素受体表达情况... 详细信息

目的评估槲皮素(Quercetin,Que)对肾上腺素(Adrenaline,A)促进三阴乳腺癌细胞增殖、迁移的影响并探究其相关机制。方法1、Western blot法检测正常乳腺上皮MCF-10A细胞、三阴乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中β2肾上腺素受体表达情况。2、MTT法检测A、Que对细胞增殖的影响,选择合适浓度的上述药物应用于后续实验。3、用A、A+Que、A+Que+erk激动剂TBHQ(预处理1小时)分别处理MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞24小时,同时设置不加任何处理因素的对照组,进行以下相关检测:(1)MTT法检测细胞增殖情况。(2)划痕实验评估细胞迁移情况。(3)Western blot法检测:erk1/2信号转导通路相关蛋白(erk1/2和perk1/2)及其下游与细胞增殖相关的蛋白(c-Myc和PCNA)、与细胞黏附和迁移相关的蛋白(MMP-2、MMP-9以及E-cadherin)的表达情况。结果1、与正常乳腺上皮MCF-10A细胞相比,三阴乳腺癌MDA-MB-231和MDAMB-468细胞中β2肾上腺素受体的表达明显增加(Perk1/2与erk1/2相对蛋白表达量的比值明显减少(Perk1/2与erk1/2相对蛋白表达量的比值明显增加(P通过调控erk1/2信号通路抑制A介导的三阴乳腺癌细胞的增殖、迁移。

关键词：槲皮素三阴乳腺癌 β2肾上腺素受体肾上腺素 erk1/2通路

机械牵拉联合重组人促红细胞生成素对大鼠骨髓间充质干细胞的影响

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机械牵拉联合重组人促红细胞生成素对大鼠骨髓间充质干细胞的影响

作者：何勇槟南方医科大学

学位级别：硕士

研究目的1、探讨不同浓度的重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的影响,并找出成骨效应/剂量比最大的浓度（最适浓度）用于后续实验;2、探讨机械牵拉联合rhEPO对大鼠BMSCs的影响;3、探讨细胞外调节... 详细信息

研究目的1、探讨不同浓度的重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的影响,并找出成骨效应/剂量比最大的浓度（最适浓度）用于后续实验;2、探讨机械牵拉联合rhEPO对大鼠BMSCs的影响;3、探讨细胞外调节蛋白激酶（erk1/2）通路在机械牵拉联合rhEPO促进大鼠BMSCs成骨分化过程中的作用。研究方法1、采用全骨髓培养法提取、分离并培养大鼠BMSCs,经流式细胞仪鉴定后,选取第三代（P3）细胞进行本次研究。用含0.5%胎牛血清（FBS）的低糖培养基（L-DMEM）为培养液,以不同浓度5 IU/ml、10 IU/ml、20 IU/ml和40 IU/ml的rhEPO与BMSCs共培养为实验组,以不加rhEPO的BMSCs为对照组,培养7d后,利用CCK-8检测BMSCs的增殖情况,ALP活性法检测BMSCs的成骨分化情况。实验后确定最佳浓度rhEPO（20 IU/ml）用于后续研究。2、同样选取P3细胞,根据处理方式的不同将细胞分成4组,分别为对照组（CON,不做处理）、机械牵拉（STR,牵拉频率为1Hz、应变率为10%、4h/次、2次/d）组、最佳浓度rhEPO（E20）组以及机械牵拉联合最佳浓度rhEPO（STR+E20）组,处理7d后,利用CCK-8检测BMSCs的增殖情况,CFA检测细胞的集落生成情况,流式细胞仪检测BMSCs的细胞周期情况,Transwell实验检测细胞的迁移情况,ALP染色、活性法检测BMSCs的成骨分化情况,qPCR 检测 Ets-1、C-myc、Ccndl、C-fos、ALP、OCN、COL 和 Runx2 的基因表达情况。3、同样选取P3细胞,根据处理方式的不同将细胞分成4组,分别为CON、STR、E20以及STR+E20组,处理7d后,利用Western blot检测erk1/2和磷酸化erk1/2（p-erk1/2）的表达水平。在阻滞剂实验中,根据处理方式的不同将细胞分成4组,分别为对照组（CON）、STR+E20组、对照阻滞组、STR+E20阻滞组。用成骨诱导培养液来培养细胞,阻滞组中额外用erk阻滞剂（U0126,10 μM）处理细胞,处理7d后,ALP活性法检测BMSCs的成骨分化情况。研究结果1、P3大鼠BMSCs形态均一、以成纤维细胞样贴壁生长;流式细胞仪鉴定BMSCs免疫表型,结果表明BMSCs高表达CD79和CD90,低表达CD11b和CD45,符合公认的BMSCs免疫表型。2、不同浓度的rhEPO作用于大鼠BMSCs,其CCK-8所测OD值均变大,ALP活性增加,当rhEPO浓度为20 IU/ml时,变化最明显。3、单纯STR、单纯E20和STR+E20作用于大鼠BMSCs,其OD值均变大、集落数增多、迁移数增多、ALP染色变深、ALP活性增加、基因明显上调,并且STR+E20组细胞其各种变化最明显。4、单纯STR、单纯E20和STR+E20作用于大鼠BMSCs,其p-erk1/2相对表达水平均升高,并且STR+E20组变化最明显。用阻滞剂持续处理细胞,对照阻滞组和STR+E20阻滞组细胞的ALP活性均明显下降。结论1、不同浓度的rhEPO均能促进大鼠BMSCs的增殖和成骨分化,并且rhEPO对细胞的影响具有浓度-反应关系,当浓度为20 IU/ml时对细胞的增殖和成骨分化的效应最明显;因此最佳rhEPO浓度为20 IU/ml。2、机械牵拉联合rhEPO能促进大鼠BMSCs的增殖、迁移和成骨分化。3、erk1/2通路参与机械牵拉联rhEPO促进大鼠BMSCs成骨分化的过程,且当该通路被阻滞剂阻滞时,上述成骨分化效应明显被减弱。

关键词：机械牵拉重组人促红细胞生成素大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化 erk1/2通路

丹参酮ⅡA对缺氧条件下心肌前体细胞存活和归巢能力的影响及其相关机制的研究

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丹参酮ⅡA对缺氧条件下心肌前体细胞存活和归巢能力的影响及其相...

作者：赵琳锦州医科大学

学位级别：硕士

目的评估丹参酮ⅡA干预对缺氧条件下心肌前体细胞存活和归巢能力的影响并探讨其相关机制,期望为丹参酮ⅡA在心肌再生中的应用提供有价值的理论和实验依据。方法1、用不同浓度的氯化钴(50、100、150、200、250、300μmol/L)处理大鼠胚胎... 详细信息

目的评估丹参酮ⅡA干预对缺氧条件下心肌前体细胞存活和归巢能力的影响并探讨其相关机制,期望为丹参酮ⅡA在心肌再生中的应用提供有价值的理论和实验依据。方法1、用不同浓度的氯化钴(50、100、150、200、250、300μmol/L)处理大鼠胚胎心肌H9c2细胞48h,用MTS法评估氯化钴对H9c2细胞增殖的影响,流式细胞法分析氯化钴对H9c2细胞凋亡的影响,根据检测结果选择合适浓度的氯化钴进行后续各项实验。2、分别以氯化钴、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡA+氯化钴、丹参酮ⅡA+氯化钴+AG126(erk1/2通路抑制剂)处理H9c2细胞48h,同时设置不加药的对照组,进行以下相关检测:(1)MTS法检测H9c2细胞增殖情况;(2)流式细胞法分析H9c2细胞凋亡情况;(3)划痕法评估H9c2细胞向损伤区域迁移情况;(4)Western blot法检测H9c2细胞中erk1/2通路相关蛋白(erk1/2、p-erk1/2、HIF-1α、cleaved caspase-3、MMP-9)的表达。结果1、当浓度不低于200μmol/L时,氯化钴既能剂量依赖性地抑制H9c2细胞的增殖(P2细胞的凋亡(P250μmol/L氯化钴构建H9c2细胞缺氧损伤模型进行后续实验。2、与氯化钴组比较,丹参酮ⅡA+氯化钴处理的H9c2细胞增殖加快(Perk1/2表达无明显变化(P>0.05),p-erk1/2、HIF-1α、MMP-9表达明显增多(P126处理的H9c2细胞增殖减慢(Perk1/2表达无明显变化(P>0.05),p-erk1/2、HIF-1α、MMP-9表达明显减少(Perk1/2通路有关。

关键词：丹参酮ⅡA 缺血性心脏病心肌前体细胞心肌再生 erk1/2通路

α_(1)-肾上腺素能受体对大鼠室性心律失常的调节作用

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山西医科大学学报 2021年第8期52卷 978-983页

作者：刘通王利史静怡闫泱锦程康冀永春西安市第三医院心血管内科西北大学附属医院心血管内科西安710018

目的探究α_(1)-肾上腺素能受体(α_(1)-AR)对去甲肾上腺素(NE)所诱导的大鼠室性心律失常的调节作用。方法将30只大鼠随机分为对照组、去甲肾上腺素组(NE组)和α_(1)-AR拮抗剂处理组(NE+P组),每组10只。NE组大鼠采用静脉注射NE诱导建立... 详细信息

目的探究α_(1)-肾上腺素能受体(α_(1)-AR)对去甲肾上腺素(NE)所诱导的大鼠室性心律失常的调节作用。方法将30只大鼠随机分为对照组、去甲肾上腺素组(NE组)和α_(1)-AR拮抗剂处理组(NE+P组),每组10只。NE组大鼠采用静脉注射NE诱导建立大鼠室性心律失常模型,NE+P组大鼠在注射NE造模15 min前,给予α_(1)-AR拮抗剂处理。采用Powerlab生物信号处理系统记录大鼠心率的心电图(ECG)信号,鼠尾血压计检测大鼠血压。在注射NE后1 h和24 h时,分别取各组大鼠颈静脉处血液,采用酶标法检测大鼠血浆中去甲肾上腺素含量。在注射NE后1 h时,分离各组大鼠心脏组织,采用RT-PCR法检测α_(1)-AR基因的表达量,蛋白质免疫印迹法检测p-erk1/2蛋白表达量。结果与对照组比较,在注射NE后1 h和24 h时,NE组大鼠血浆中的NE水平均显著升高,大鼠的室性心律失常发生次数明显增加(P1)。RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,NE组大鼠心肌组织中α_(1)-AR基因的相对表达量显著上调(P1)。Western blotting结果显示,与对照组比较,NE组大鼠心肌组织中p-erk1/2蛋白的表达水平显著上调;相较于NE组,NE+P组大鼠中p-erk1/2蛋白表达水平显著下调(P1)。与NE组比较,NE+P组大鼠室性心律失常有所减缓,NE+P组大鼠的收缩压和舒张压均呈明显降低(P1)。结论α_(1)-AR通过激活erk1/2信号途径,从而对NE诱导的大鼠室性心律失常起到调节作用。

关键词：去甲肾上腺素室性心律失常 erk1/2通路 α_(1)-肾上腺素能受体

细胞外信号调节激酶1/2信号通路与神经细胞凋亡研究

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现代医药卫生 2015年第6期31卷 867-869页

作者：唐敏张智博南华大学研究生学院湖南衡阳421001 长沙市第一医院神经内科湖南410005

丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）是三级酶联反应途径,由MAPK激酶激酶（MKKK）、MAPK激酶（MKK）、MAPK组成一条连续的激活途径。其中细胞外信号调节激酶1/2（erk1/2）是MAPKs信号通路中一条经典且重要的途径。在5个erk家族成员中,erk1与erk... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）是三级酶联反应途径,由MAPK激酶激酶（MKKK）、MAPK激酶（MKK）、MAPK组成一条连续的激活途径。其中细胞外信号调节激酶1/2（erk1/2）是MAPKs信号通路中一条经典且重要的途径。在5个erk家族成员中,erk1与erk2的作用较其他要更广泛,对二者的研究也更充分。

关键词：丝裂原活化蛋白激酶3 神经元/细胞学细胞凋亡 erk1/2通路信号通路神经细胞综述