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超声击破微泡介导egfp转染类风湿性关节炎大鼠关节滑膜组织的实验研究

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中华超声影像学杂志 2012年第2期21卷 182-183页

作者：景香香刘洁杨炳昂符少清刘秉彦莫泽来李作田海南省人民医院超声科海口570311 海南省人民医院急诊骨科海口570311

关节疾病的基凶治疗足当今国内外研究的热门课题。超声击破微泡造影剂介导作为一种新型的堪因转染方法．在心脏、腑、角膜及肿瘤组织中得到实验证实。本实验旨在探讨该方法在类风湿性荚竹炎（rheumatoidarthritis，RA）滑膜组织中实现... 详细信息

关节疾病的基凶治疗足当今国内外研究的热门课题。超声击破微泡造影剂介导作为一种新型的堪因转染方法．在心脏、腑、角膜及肿瘤组织中得到实验证实。本实验旨在探讨该方法在类风湿性荚竹炎（rheumatoidarthritis，RA）滑膜组织中实现基冈转染的可能性。

关键词：关节滑膜组织微泡造影剂实验研究类风湿性关节炎大鼠转染 egfp 介导

重组伪狂犬病病毒rPRV/egfp/rgp活疫苗免疫幼犬的最小免疫剂量及攻毒保护试验

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黑龙江畜牧兽医 2008年第8期 92-94页

作者：袁子国张秀香王晓虎徐慧娟张守峰刘云方扈荣良吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 黑龙江出入境检验检疫局黑龙江哈尔滨150001

目前,研究发现已有多种外源基因在伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)中表达,这些外源基因主要是一些猪的传染病病原的抗原基因(猪瘟病毒的E1、E2和猪细小病毒)和筛选标记基因(β-半乳糖苷酶和绿色荧光蛋白等),而对于异种动物致病性... 详细信息

目前,研究发现已有多种外源基因在伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)中表达,这些外源基因主要是一些猪的传染病病原的抗原基因(猪瘟病毒的E1、E2和猪细小病毒)和筛选标记基因(β-半乳糖苷酶和绿色荧光蛋白等),而对于异种动物致病性抗原[如狂犬病病毒(RV)等]基因的研究尚未见报道.

关键词：重组伪狂犬病病毒保护试验最小免疫剂量疫苗免疫 egfp β-半乳糖苷酶攻毒幼犬

J亚群禽白血病病毒env基因主要功能区和egfp基因在SSff9细胞中的融合表达

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中国家禽 2015年第11期37卷 23-26页

作者：李拓凡多婷梁雄燕顾玉芳杨玉莹长江大学动物科学学院湖北荆州434025

为获得具备良好抗原性和生物活性的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)env基因主要功能区的表达产物,采用特异性引物分别从保存的p MD18T-envHB2010质粒、PIRES2-egfp中扩增ALV-J env基因主要功能区和增强型绿色荧光蛋白(egfp)基因,酶切、连接后... 详细信息

为获得具备良好抗原性和生物活性的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)env基因主要功能区的表达产物,采用特异性引物分别从保存的p MD18T-envHB2010质粒、PIRES2-egfp中扩增ALV-J env基因主要功能区和增强型绿色荧光蛋白(egfp)基因,酶切、连接后插入p Fast Bac Daul载体,构建杆状病毒转移载体p Fast Bac Daul-env-egfp,将其转化DH10Bac感受态细胞制备重组杆粒Bacmid-env-egfp,转染Sf9细胞进行真核表达。结果显示,转染了重组杆粒的Sf9细胞在倒置荧光显微镜下呈现亮绿荧光;以ALV-J单克隆抗体JE9进行Western blot检测,转染重组杆粒的Sf9细胞检测出约85 ku的条带。结果表明,目的基因在Sf9细胞中得到了良好的表达,为进一步研究ALV-J提供基础试验材料。

关键词： ALV-J env基因 egfp 融合表达

锤头状核酶抑制Raji细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原的表达

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中华器官移植杂志 2005年第3期26卷 160-163页

作者：郭荣邹萍金中奎陆华中范华骅高峰崔磊曹谊林张敏华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所上海市血液中心血液工程研究室上海第二医科大学组织工程重点实验室

目的　探讨抗主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子的锤头状核酶对Raji细胞表面经典MHCⅡ类抗原表达的抑制作用。方法　设计并克隆针对MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)第134、218、464位点的3 个核酶片段(Rz134、Rz218、Rz464... 详细信息

目的　探讨抗主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子的锤头状核酶对Raji细胞表面经典MHCⅡ类抗原表达的抑制作用。方法　设计并克隆针对MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)第134、218、464位点的3 个核酶片段(Rz134、Rz218、Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM T载体,进行细胞外切割活性筛选。将切割作用明显的Rz464 亚克隆入真核表达载体pIRES2 egfp,成为pIRES2 egfp Rz464(pRz464),将pRz464稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测Raji细胞表面MHCⅡ类抗原(HLA DR、DP、DQ)的表达,并用逆转录聚合酶链反应分析Raji细胞CⅡTA mRNA的表达。结果　转染pRz464 的Raji细胞表面HLA DR、DP、DQ抗原表达抑制率分别为95.93 %、94.14 %及98.32 %,同时其CⅡTA mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论　Rz464可抑制Raji细胞表面MHCⅡ类抗原的表达。

关键词： Raji细胞表达 CⅡTA 锤头状核酶 MHCⅡ类抗原主要组织相容性复合物 DQ egfp T载体 RNA

基于CRISPR/Cas9的月季TCP9基因融合表达载体构建

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分子植物育种 2019年第24期17卷 8120-8124页

作者：李聪杨莹莹王美军陈己任湖南农业大学园艺园林学院

CRISPR/Cas9基因编辑系统是植物基因功能研究的重要工具,月季TCP9基因可以调控花器官的发育,应用CRISPR/Cas9技术构建敲除月季TCP9基因的表达载体,可以为月季TCP9基因的调控机制提供更多信息。根据TCP9基因的保守序列,设计了一对互补引... 详细信息

CRISPR/Cas9基因编辑系统是植物基因功能研究的重要工具,月季TCP9基因可以调控花器官的发育,应用CRISPR/Cas9技术构建敲除月季TCP9基因的表达载体,可以为月季TCP9基因的调控机制提供更多信息。根据TCP9基因的保守序列,设计了一对互补引物,用T4连接酶连接到质粒载体pKSE402 (该载体含有egfp)中;通过测序确定所构建载体的正确性,通过冻融法将含有TCP9基因的重组质粒转入农杆菌(EHA105)中。以农杆菌为模板PCR扩增以及egfp瞬时表达证明月季TCP9基因敲除表达载体已构建成功。本研究表明了含有TCP9基因的表达载体能在植物中高效表达,为进一步研究提供了一定的科学依据。

关键词： egfp 农杆菌表达载体月季拟南芥

Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第3期26卷 285-287,290页

作者：何志强王胜军薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国邵启祥许化溪江苏大学检验医学研究所免疫学研究室江苏镇江212013 江苏大学附属人民医院检验科江苏镇江212001

目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-egfp真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定... 详细信息

目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-egfp真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,用脂质体转染DC2.4;应用G418筛选出耐药克隆,有限稀释法进行单克隆。通过观察egfp的表达选定单克隆细胞株,再用流式细胞术分析、Real-time PCR和Western blot进行鉴定。结果:构建了PIRES2-mHlx-egfp真核表达载体,并成功建立mHlx修饰和egfp修饰的细胞系(DC2.4/mHlx和DC2.4/egfp)。结论:成功建立稳定高表达mHlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx,为深入探讨mHlx功能构建了平台,为Hlx修饰后的树突状细胞作为工具细胞的应用奠定了基础。

关键词： mHlx DC2.4 egfp

苏禽黄鸡CVH基因真核表达载体构建及亚细胞定位

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中国畜牧杂志 2014年第9期50卷 82-87页

作者：朱睿张振韬左其生刘志永韦光辉李东连超张亚妮李碧春扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

本研究通过PCR技术克隆苏禽黄鸡CVH基因的CDS区,分别构建真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pegfp-C1-CVH,并用pcDNA3.1-CVH载体免疫小鼠制备多克隆抗体。pcDNA3.1-CVH和pegfp-C1-CVH分别转染COS-7细胞,进行间接免疫荧光实验和CVH-egfp融合蛋白亚细胞定位,并通过RT-PCR、Western blot进一步检测蛋白的表达。结果表明:克隆出CVH基因的完整CDS,构建了真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pegfp-C1-CVH,成功制备了多克隆抗体,转染后观察CVH基因表达产物定位于细胞质中,RT-PCR和Western bolt分别检测到1 989 bp特异条带和100 ku的融合蛋白。真核表达载体制备的多克隆抗体特异性良好,效价为1∶200,CVH基因蛋白在细胞质中表达,为进一步探讨CVH基因的生物学特性建立基础。

关键词： CVH基因亚细胞定位 egfp 间接免疫荧光多克隆抗体黄鸡

CD4拮抗类肽分子和非肽类小分子化合物筛选的细胞模型的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 765-768页

作者：肖鹤李松沈倍奋黎燕军事医学科学院基础研究所分子免疫室北京100850

目的　建立基于CD4分子和MHCⅡ类分子相互作用的细胞黏附模型。方法　RT PCR扩增人源性CD4胞浆缺陷型基因 ,克隆入绿色荧光表达载体pegfp N1中。将pegfp N1/CD4转染HEK2 93细胞 ,G4 18筛选稳定克隆。利用Westernblot方法及激光共聚焦显... 详细信息

目的　建立基于CD4分子和MHCⅡ类分子相互作用的细胞黏附模型。方法　RT PCR扩增人源性CD4胞浆缺陷型基因 ,克隆入绿色荧光表达载体pegfp N1中。将pegfp N1/CD4转染HEK2 93细胞 ,G4 18筛选稳定克隆。利用Westernblot方法及激光共聚焦显微技术检测和观察细胞中CD4分子的表达及定位。结果　RT PCR、Westernblot法分别从mRNA及蛋白水平检测到细胞中CD4分子的整合及表达 ;激光共聚焦显微镜观察到CD4分子于细胞核外周尤其是胞膜分布。HEK2 93/CD4稳定细胞克隆与Raji细胞孵育 1h后 ,可见玫瑰花环的形成 (rosetteformation) ,而CD4抗体能够明显抑制这种玫瑰花环的形成。结论　HEK2 93/CD4 Raji细胞黏附模型的建立 ,为CD4拮抗类肽分子和非肽类小分子化合物的筛选提供了一个可应用的技术平台。

关键词： CD4分子 Raji细胞小分子化合物拮抗肽类细胞模型观察 egfp 克隆表达载体

四环素调控表达系统调节egfp和HBV前核心蛋白在哺乳动物细胞中表达

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自然科学进展 2002年第11期12卷 1209-1212页

作者：朱晓东姚丰田波中国科学院微生物研究所 Laboratory of Tissue Repair and Gene Transfer Brigham and Women's HospitalHarvard Medical SchoolBostonMA 02115USA

构建新型四环素调控的增强绿色荧光蛋白(egfp)基因和乙肝病毒(HBV)前核心蛋白基因的表达载体,利用脂质体转染哺乳动物细胞,流式细胞术检测结果说明:应用此系统四环素可使egfp在CHO细胞中的表达提高18倍,在SSMC-7721细胞与HEK293细胞中... 详细信息

构建新型四环素调控的增强绿色荧光蛋白(egfp)基因和乙肝病毒(HBV)前核心蛋白基因的表达载体,利用脂质体转染哺乳动物细胞,流式细胞术检测结果说明:应用此系统四环素可使egfp在CHO细胞中的表达提高18倍,在SSMC-7721细胞与HEK293细胞中的表达分别提高5倍和接近2倍,并且,四环素可有效地诱导HBV的前核心蛋白基因在肝癌细胞系中的表达。

关键词： egfp HBV 前核心蛋白哺乳动物基因治疗四环素诱导表达系统增强绿色荧光蛋白乙肝病毒反式显性负调蛋白基因表达