J亚群禽白血病病毒env基因主要功能区和EGFP基因在SSff9细胞中的融合表达

作     者：李拓凡 多婷 梁雄燕 顾玉芳 杨玉莹 LI Tuofan;DUO Ting;LIANG Xiongyan;GU Yufang;YANG Yuying

作者机构：长江大学动物科学学院湖北荆州434025 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2015年第37卷第11期

页      面：23-26页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31060342) 

主　　题：ALV-J env基因 EGFP 融合表达 

摘      要：为获得具备良好抗原性和生物活性的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)env基因主要功能区的表达产物,采用特异性引物分别从保存的p MD18T-envHB2010质粒、PIRES2-EGFP中扩增ALV-J env基因主要功能区和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,酶切、连接后插入p Fast Bac Daul载体,构建杆状病毒转移载体p Fast Bac Daul-env-EGFP,将其转化DH10Bac感受态细胞制备重组杆粒Bacmid-env-EGFP,转染Sf9细胞进行真核表达。结果显示,转染了重组杆粒的Sf9细胞在倒置荧光显微镜下呈现亮绿荧光;以ALV-J单克隆抗体JE9进行Western blot检测,转染重组杆粒的Sf9细胞检测出约85 ku的条带。结果表明,目的基因在Sf9细胞中得到了良好的表达,为进一步研究ALV-J提供基础试验材料。