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pH响应型ZIF-8-EGCG/GelMA水凝胶的制备及性能初步评价

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pH响应型ZIF-8-EGCG/GelMA水凝胶的制备及性能初步评价

作者：王冉中南大学

学位级别：硕士

背景:牙周炎是牙周组织的慢性感染性疾病,可引发牙龈炎症及骨组织丧失,进而导致牙齿松动和脱落,严重影响口颌系统的功能。目前传统的牙周治疗对于已经造成牙周缺损的患者来说是无法获得理想的修复和再生的。研究发现,菌斑生物膜是推动... 详细信息

背景:牙周炎是牙周组织的慢性感染性疾病,可引发牙龈炎症及骨组织丧失,进而导致牙齿松动和脱落,严重影响口颌系统的功能。目前传统的牙周治疗对于已经造成牙周缺损的患者来说是无法获得理想的修复和再生的。研究发现,菌斑生物膜是推动牙周炎发展的直接因素,在菌斑微环境的影响下,其局部的p H值呈酸性状态,可达到4.5甚至小于4.5。因此设计一种对菌斑生物膜的低p H值具有响应性的生物材料,是治疗牙周炎的有效方法之一。目的:制备p H响应型ZIF-8-EGCG/Gel MA复合水凝胶,研究其性能和作为牙周炎骨缺损治疗的可行性。方法:1.通过溶剂法合成具有p H响应的沸石咪唑酯金属有机骨架8(Zeolitic imidazolate framework-8,ZIF-8)纳米载体,与表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)构建载药体系。对合成的载药体系使用扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)、透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)、傅里叶可见红外光谱仪(Fourier Transform Infrared Pectrometer,FTIR)、X射线衍射仪(X-ray Diffractometer,XRD)及全自动比表面积及孔隙分析仪(Automated Surface Area and Porosity Analyzer,BET)进行表征验证,最后使用紫外可见分光光度计(UV-1900)检测在低p H条件下响应性释放能力。2.将载药体系与甲基丙烯酸酐化明胶(Gelatin Methylacryloyl,Gel MA)复合,构建载有EGCG的ZIF-8/Gel MA复合水凝胶对弹性模量、溶胀率、吸水率等理化性能进行验证,并使用紫外可见分光光度计(UV-1900)对低p H响应能力进行测定。3.将复合水凝胶与骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)共培养,利用细胞骨架染色及活死染色对其生物活性进行评价。结果:1.通过SEM、TEM、FTIR、XRD、BE验证了ZIF-8-EGCG纳米颗粒成功构建,并证实该载药体系在低p H条件下可以快速释放包封的EGCG。2.不同质量分数的水凝胶具有良好的弹性模量、溶胀率、吸水率等理化性能,同时该复合水凝胶在低p H下具有响应性释放的效果。3.细胞骨架染色结果显示,不同质量分数的复合水凝胶表面生长的细胞形态都较为铺展,均未表现出较为明显的细胞毒性。细胞活死染色结果显示,当ZIF-8、EGCG同时加入水凝胶后其支架的细胞生长状况较好,且数量相对来说较多。结论:我们成功制备了载有EGCG的ZIF-8/Gel MA复合水凝胶。该水凝胶不仅具有良好的理化性能,低p H下响应释放能力而且具有良好的生物活性。图20幅,表11个,参考文献64篇

关键词： EGCG ZIF-8 GelMA水凝胶牙周炎

琼胶寡糖及EGCG对冰藏花鲈鱼片新鲜度及蛋白质生化特性的影响

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水产学报 2021年

作者：相悦孙承锋李来好杨贤庆吴燕燕岑剑伟魏涯李锐赵永强中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部水产品加工重点实验室烟台大学生命科学学院大连工业大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心

花鲈贮运期间易受微生物与内源酶的联合作用，导致新鲜度及蛋白质生化特性改变，影响其食用价值。因此，采用适当的保鲜方式对花鲈贮运流通过程中的品质变化加以调控，以保证其品质安全显得尤为重要。为探究表没食子儿茶素没食子酸酯（E... 详细信息

花鲈贮运期间易受微生物与内源酶的联合作用，导致新鲜度及蛋白质生化特性改变，影响其食用价值。因此，采用适当的保鲜方式对花鲈贮运流通过程中的品质变化加以调控，以保证其品质安全显得尤为重要。为探究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）及琼胶寡糖（AO）对冰藏花鲈鱼片的保鲜效果，该研究对硬度值、色差及新鲜度指标（硫代巴比妥酸值、K值、挥发性盐基氮、菌落总数、感官评分）进行测定，并对蛋白质生化特性（肌原纤维蛋白含量、二级结构、巯基、羰基含量）进行分析。结果表明，对照组在第16天时感官得分低于8，且菌落总数和K值已分别高达(6.78±0.15) lg（CFU/g）与67.37%±1.75%，不可食用，而EGCG组（EG）、琼胶寡糖组（AO）及复合组的样品仍具有较好的硬度、色泽及新鲜度。贮藏至20 d时对照组的TBA值高达(0.81±0.03) mg/kg，而EG组、AO组及复合组的TBA值在贮藏期间均未出现大幅度增加，且始终低于对照组。另外，贮藏至12 d时对照组的羰基含量已显著高于其他保鲜处理组，对照组在贮藏末期的羰基含量上升至(1.63±0.04) nmol/mg，而EG组、AO组及复合组的羰基含量仅为(1.14±0.03)、(1.28±0.08)与(0.99±0.09) nmol/mg。贮藏末期复合组的蛋白含量、?螺旋、巯基均高于对照组和单一保鲜组。研究结果表明，EGCG及琼胶寡糖均能较好的维持鱼片的新鲜度，能显著抑制蛋白质变性与氧化，且二者复合后的保鲜效果优于单一保鲜剂，延长鱼片保质期至20 d以上。该研究为EGCG及琼胶寡糖的保鲜机理提供了理论基础，为开发高效的新型生物保鲜剂提供参考。

关键词：花鲈 EGCG 琼胶寡糖新鲜度蛋白质生化特性

阻断EGCG介导的YAP激活增强EGCG在结直肠癌细胞中抗癌效果

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阻断EGCG介导的YAP激活增强EGCG在结直肠癌细胞中抗癌效果

作者：靳莎莎安徽农业大学

学位级别：硕士

EGCG(Epigallocatechin gallate)即表没食子儿茶素没食子酸酯,是绿茶中的主要活性成分,它可以有效的与结直肠上皮细胞或者结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)细胞相互作用。EGCG预防或抗结直肠癌的作用已在临床前试验中得到了很好的表征。... 详细信息

EGCG(Epigallocatechin gallate)即表没食子儿茶素没食子酸酯,是绿茶中的主要活性成分,它可以有效的与结直肠上皮细胞或者结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)细胞相互作用。EGCG预防或抗结直肠癌的作用已在临床前试验中得到了很好的表征。EGCG的抗肿瘤作用得益于几个方面,一是EGCG能够抑制结直肠癌细胞的增殖,使癌细胞周期停滞或者减慢,从而减缓癌细胞的生长速度;二是EGCG可以促进细胞凋亡,从而引起癌细胞的死亡;三是EGCG能够抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移,从而降低癌细胞对周围组织以及器官的破坏和扩散。然而由于EGCG及其衍生物的快速代谢、低生物利用率和高浓度毒性等因素限制了EGCG的临床疗效。如何提高EGCG的抗肿瘤作用成为了一个悬而未决的问题。我们的研究结果表明在结直肠癌细胞系中,EGCG处理可以抑制Hippo信号通路,代偿性的激活下游YAP蛋白活性以此来拮抗EGCG的治疗效果。而通过抑制YAP活性则可以有效的恢复结直肠癌细胞对EGCG治疗的敏感性。主要的研究结果如下:1.在多种结直肠细胞系中,EGCG处理通过泛素-蛋白酶体所依赖途径下调了LATS1/2蛋白稳态。2.EGCG处理激活了伴侣蛋白HSP90辅因子CHIP的活性,CHIP通过与LATS1/2蛋白互作介导了它们的泛素化和降解。3.EGCG处理促进了LATS1/2下游YAP蛋白的稳定、低磷酸化、核转运并激活YAP蛋白下游靶基因CTGF、CYR61、ANKRD1的转录。4.激活的YAP通过诱导原本生长阻滞的癌细胞重新进入细胞周期来拮抗EGCG的治疗效果。在结直肠癌细胞中抑制YAP的活性将增加EGCG的抗肿瘤效果。

关键词： EGCG Hippo信号通路 LATS1/2 YAP

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EGCG纳米铜的制备及其抑菌作用研究

EGCG纳米铜的制备及其抑菌作用研究

作者：俞蓉欣安徽农业大学

学位级别：硕士

细菌感染是全球十大死亡原因之一。自上世纪40年代抗生素被开发以来,抗生素的使用对人类的健康做出了巨大贡献,然而过度的使用加快了细菌耐药性的进化,导致耐药性菌的数量和种类不断增加、耐药性也逐渐增强,对人类的健康造成了严重威胁... 详细信息

细菌感染是全球十大死亡原因之一。自上世纪40年代抗生素被开发以来,抗生素的使用对人类的健康做出了巨大贡献,然而过度的使用加快了细菌耐药性的进化,导致耐药性菌的数量和种类不断增加、耐药性也逐渐增强,对人类的健康造成了严重威胁。区别于传统有机小分子类抗生素,纳米技术的发展为构建新型抗菌剂解决细菌耐药性问题提供了可能,利用纳米技术将金属、聚合物、天然化合物等物质一起制备的纳米抗菌剂表现出较高的抑菌活性,但仍存在合成复杂、试剂有害、材料安全性低等问题。因此,绿色快速制备具有生物安全性高、抑菌活性强的纳米抑菌材料是目前研究的热点也是难点。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶叶中主要的功能性成分之一,具有抗氧化、抗菌、抗病毒、调节免疫力以及预防心脑血管疾病等多种生物功能。EGCG含有多个酚羟基,是其发挥生物功能的内在基础,但因此也易失去活性,导致生物利用度低,极大地限制了其在各领域中的应用。因此,提高EGGC生物利用度有助于充分发挥其在各方面的生物活性,促进EGCG在各领域的应用。新兴的纳米技术有望提高EGCG的生物利用度,随着纳米技术在各领域中的广泛应用,研究重点不再局限于EGCG单体,而是将EGCG与其他物质联合构建制备成生物医用纳米材料,使其具有高生物利用度、高抗菌活性以及低毒副等优势。因此,EGCG纳米化策略为解决EGCG生物利用度低和耐药性细菌感染问题提供了新的方向。金属与EGCG所共同制备的金属-EGCG纳米材料表现出双重优势。金属-EGCG-纳米体系中,纳米金属具有随机靶向能力,被认为是潜在的“纳米抗生素”,可通过多种抑菌机制达到抑菌目的。因此将金属和EGCG进行有机结合制备成纳米材料不仅绿色安全还可以发挥高效协同抗菌作用。相比于其他金属,铜具有低成本、易获得等优点,更是人体所必需的一种微量元素。由于铜具有广谱抗菌活性、良好生物安全性和多种生理功能等特点,所以常被用于制备纳米抗菌剂。纳米铜作为最有效的抗菌料之一,对多种致病菌均具有拮抗能力,且不易引起细菌耐药性的产生。二乙基二硫代氨基甲酸钠(DEDTC,戒酒硫主要活性产物)的抑癌活性已经得到细胞、体内和临床等多方面研究的证实,但其抑菌活性的研究少之又少,存在大量空白。研究表明DEDTC和铜联用可以提高抑癌活性,但是否具有抗菌活性仍有待研究。综上,本研究利用EGCG、DEDTC和CuSO水溶液,成功合成了稳定且良好分散性的纳米颗粒EDCu,进一步对其进行化学表征、安全性评价和抑菌效应评估。结果表明EDCu具有良好的生物安全性,对革兰氏阳性菌表现出强抑菌活性,且能有效抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的生物膜形成,促进小鼠皮肤伤口的愈合,最后,从结构破坏、内含物泄漏、产生活性氧等方面阐述了EDCu的抑菌机制。本研究主要取得的研究成果如下:(1)成功制备了EDCu纳米颗粒。本研究使用一步绿色合成法,将EGCG、DEDTC和铜离子在常温常压下自组装成EDCu,整个过程只需要几秒钟。EDCu粒径在5 nm左右,并具有良好稳定性,在4℃环境下存放90天,EDCu的外观颜色和紫外吸收并无明显变化。(2)评估了EDCu良好的生物安全性。EDCu对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)不产生细胞毒性,HUVEC细胞在高浓度EDCu处理后(5μM)的形态和数目无明显变化,并且不会引起小鼠红细胞产生溶血现象。此外,EDCu在低浓度下(0.2-1μM),可以促进HUVEC细胞的迁移。(3)明确了EDCu显著的抗菌活性。体外实验表明EDCu在极低浓度(2.5μM)下,可降低表皮葡萄球菌(SE)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和金黄色葡萄球菌(SA)的存活率至40%以下,同时可以抑制MRSA生物膜的生长;在体内实验中,EDCu可促进小鼠伤口愈合,第七天EDCu-2组(40μM)小鼠皮肤的愈合率达到85%。(4)解析了EDCu的抑菌机制。EDCu可以通过破坏细菌结构,导致细菌中核酸和蛋白质等内含物释放;进入细菌体内后,刺激体内活性氧(ROS)的爆发,进而攻击其他生物大分子,导致细菌死亡。

关键词： EGCG Cu 纳米材料抗菌生物膜

EGCG非共价复合处理及超高压处理对Dioscrin理化性质及功能特性的影响

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EGCG非共价复合处理及超高压处理对Dioscrin理化性质及功能特性的...

作者：马铮辽宁大学

学位级别：硕士

中国作为山药的主要产地国之一,每年会有大量的山药产出。山药中含有大量的营养成分,如碳水化合物、蛋白质、以及少量维生素等。其中Dioscrin作为山药的主要储藏蛋白,占山药蛋白总量的80%以上。并且Dioscrin中含有的氨基酸种类十分丰富... 详细信息

中国作为山药的主要产地国之一,每年会有大量的山药产出。山药中含有大量的营养成分,如碳水化合物、蛋白质、以及少量维生素等。其中Dioscrin作为山药的主要储藏蛋白,占山药蛋白总量的80%以上。并且Dioscrin中含有的氨基酸种类十分丰富。虽然我国食品工业在近些年中蓬勃发展,在兼顾食品口感的同时也大大提高了食品的品质与营养性。但是,许多食品营养成分、食品功能特性在食品加工过程中被破坏或抑制。因此,为了使山药储藏蛋白Dioscrin在食品加工过程中保持更多的功能特性,减少食品加工对其功能特性的限制,所以我们探讨不同的加工环境中Dioscrin的理化性质以及功能特性的改变情况。研究结果如下:1.理化性质:在含有EGCG的中性环境中(EGCG与Dioscrin的物质的量的比分别为1:1、1:3、1:5、1:7)加入Dioscrin会使得小分子EGCG和Dioscrin发生非共价结合,形成EGCG-Dioscrin复合物。EGCG-Dioscrin复合物与对照组相比拥有更小的粒径,且更高的负电荷,溶液稳定性更强。随着EGCG浓度的不断提高,其Dioscrin所含有的游离巯基数目(SH)出现先减少在增加的趋势,但是始终显著低于对照组。Dioscrin的表面疏水性(H)随着EGCG浓度的不断增加持续降低。(2)对于功能特性来说,EGCG-Diocrin的乳化性随着EGCG浓度的提高持续增加而乳化稳定性随着EGCG浓度的提高出现先增大再减小趋势,在1:3时达到最大,且始终高于对照组。复合物的凝胶硬度随着EGCG浓度的增加持续增加,而凝胶弹性随着EGCG浓度的不断增加,出现先增加在降低的的趋势,分别在比例为1:3与1:5达到最大。(3)通过分子动力学模拟的预测,发现结合后的Dioscrin二级结构中的α-螺旋含量提高,这与我们CD光谱所测结果类似。并且分子动力学模拟我们发现,形成非共价复合物后,相比于对照组,体系拥有更低的能量。2.在一定压力的条件下(100MPa-10min、300MPa-10min、500MPa-10min)处理Dioscrin蛋白,我们发现,在给予蛋白100MPa的情况下,其粒径增加,但是压力达到300MPa到500MPa时候,粒径再降低。并且紫外以及荧光和荧光的结果都显示无论是紫外吸收强度还是荧光强度都是再100MPa下达到最大,随后发生降低。而Zeta-电位随着压力的不断增加,持续增大。而表面疏水(H)随着压力的持续增大,出现先增大再减小趋势,原因在于低压力的条件下,蛋白质的结构展开,疏水基团暴露,表面疏水性增强,而压力过大时,导致蛋白质的聚合,进而疏水性基团被掩盖,疏水性降低。而巯基随着压力的持续增加而持续降低。通过分子对力学模拟对上述结果进行验证,从RMSD、RMSF、RG、SASA等结果来看,模拟与实体实验基本吻合。3.根据前两章实验结果,选取Control、EGCG、HP(100MPa)、HP-EGCG作为对蛋白的四种处理方式,通过研究四种不同处理下的理化性质发现,对于紫外的结果,高压处理与EGCG非共价复合处理二者都会使得紫外吸收增加,并且两种处理方式间有着一定叠加效果。而对于荧光强度,两种处理方式会起到一定的拮抗效果,并且通过粒径电位等数据来看,HP-EGCG处理后的Dioscrin所形成溶液更加稳定。并且通过动力学模拟中RMSD、RMSF等数据对其实体实验结果进行验证,并且通过分子动力学模拟对蛋白表面积做出合理预测。

关键词：山药 Dioscrin EGCG 超高压处理分子动力学模拟

动态结合EGCG可注射双交联水凝胶的构建与性能研究

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动态结合EGCG可注射双交联水凝胶的构建与性能研究

作者：何知超华南理工大学

学位级别：硕士

氧化应激和炎症与许多慢性疾病有关,如糖尿病和糖尿病并发症、高血压和心血管疾病、神经退行性疾病、骨关节炎和椎间盘退行性疾病。大量研究证明了多酚在这些疾病中的治疗作用及其背后的分子机制。多酚是一类由两个或多个酚结构单元组... 详细信息

氧化应激和炎症与许多慢性疾病有关,如糖尿病和糖尿病并发症、高血压和心血管疾病、神经退行性疾病、骨关节炎和椎间盘退行性疾病。大量研究证明了多酚在这些疾病中的治疗作用及其背后的分子机制。多酚是一类由两个或多个酚结构单元组成的化合物,广泛分布于植物和海洋生物中。它们表现出强大的抗氧化、抗炎、抗菌和生物粘附特性。此外,多酚还可用作天然和生物相容的交联剂,以增强支架的机械性能。鉴于这些优点,多酚在组织工程领域备受关注,并且组织工程支架为多酚的递送提供了一种有效的方式。在组织工程中使用的众多材料类别中,可注射水凝胶已成为最突出和用途最广泛的材料之一。因此,本论文制备了动态结合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的可注射双交联水凝胶,并探究其作为髓核组织工程支架的可行性。首先,我们制备了苯硼酸和双键改性的透明质酸、双键改性的明胶。将EGCG与前两者简单共混即可在生理条件下形成基于苯硼酸酯(硼酸-二醇)动态共价键的多功能单交联水凝胶,随后通过光交联引发自由基聚合得到双交联水凝胶。本研究对制备的HA/Gel@EGCG单交联水凝胶和双交联水凝胶的性能进行了表征,结果表明:HA/Gel@EGCG单交联水凝胶具有良好的可注射、自愈合和形状适应性,注射到缺损部位可以匹配不同形状的组织缺损。EGCG的引入赋予HA/Gel@EGCG双交联水凝胶更强的粘附性能,有利于与原位组织整合避免异位。HA/Gel@EGCG2双交联水凝胶与报道的人类髓核无侧限压缩线性区域模量相近,并且能够抵抗循环载荷以模拟长期受到力学刺激的髓核组织;具有较低的平衡溶胀率,可以避免过度溶胀增加局部压力造成的伤害。HA/Gel@EGCG双交联水凝胶具有p H响应性,在酸性p H下加速释放EGCG,能够响应退变髓核组织的酸性环境。HA/Gel@EGCG2双交联水凝胶具有良好的自由基清除能力,对于DPPH自由基半小时可清除81.9%,对于PTIO自由基4小时可清除71.8%。并且高EGCG含量的HA/Gel@EGCG2水凝胶各方面性能都要优于低EGCG含量的HA/Gel@EGCG1水凝胶。随后,探究了水凝胶对人髓核细胞的影响。通过CCK-8细胞增殖检测和活/死染色验证了HA/Gel@EGCG2水凝胶具有良好的细胞相容性,种在水凝胶上的细胞能够正常增殖并铺展;通过DCFH-DA染色验证了HA/Gel@EGCG2水凝胶能够有效清除细胞内ROS;通过活/死染色验证了HA/Gel@EGCG2水凝胶能够保护细胞在氧化应激环境下的活性;通过RT-PCR验证了HA/Gel@EGCG2水凝胶能够阻止IL-1β诱导细胞中的促炎信号传导和基质分解代谢。总的来说,HA/Gel@EGCG2水凝胶具有良好的细胞相容性并能够有效发挥抗氧化抗炎作用,这主要是基于EGCG的生物活性。最后,制备了一种基于EGCG的纳米粒子,纳米粒子具有规整的形貌和良好的分散稳定性。以EGCG-NPs的形式提高了EGCG在体系中的负载量,并能够形成可注射单交联水凝胶,解决了EGCG在此体系中的负载量受苯硼酸含量限制的问题。并探究了EGCG-NPs在重新组装过程中对二甲双胍的负载,有望用于糖尿病患者的退行性疾病治疗。综上所述,本论文以苯硼酸和双键改性的透明质酸、双键改性的明胶作为基础材料,EGCG作为功能性药物,基于苯硼酸酯动态共价键的设计赋予水凝胶多功能性,并通过双交联的形式提高水凝胶的机械性能和稳定性。这些水凝胶可作为髓核组织工程支架用于退变髓核的治疗。

关键词： EGCG 苯硼酸多功能双交联髓核组织工程

EGCG-Cu对水中大肠杆菌的杀灭性能研究

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应用化工 2021年第5期50卷 1227-1230页

作者：冉强三金纪玥冯萃敏郭子玉李敬一陈梓怡北京建筑大学城市雨水系统与水环境教育部重点实验室北京100044 北京建筑大学水环境国家级实验教学示范中心北京100044 北京市自来水集团有限公司北京100031 北京市市政工程设计研究总院有限公司北京100082

采用水热法由EGCG和硫酸铜溶液制备EGCG-Cu络合物,研究其对水中大肠杆菌的杀灭性能。结果表明,EGCG-Cu的杀菌性能优于EGCG,为达到相同的杀菌效果,EGCG-Cu的投加量远低于EGCG;EGCG-Cu杀菌性能随浓度增加而增强,EGCG-Cu投加浓度50 mg/L时... 详细信息

采用水热法由EGCG和硫酸铜溶液制备EGCG-Cu络合物,研究其对水中大肠杆菌的杀灭性能。结果表明,EGCG-Cu的杀菌性能优于EGCG,为达到相同的杀菌效果,EGCG-Cu的投加量远低于EGCG;EGCG-Cu杀菌性能随浓度增加而增强,EGCG-Cu投加浓度50 mg/L时,大肠杆菌的生长受到严重抑制,对数生长阶段几乎消失;EGCG-Cu浓度越高,接触时间越长,各时刻大肠杆菌溶液中蛋白质的含量越高;EGCG和EGCG-Cu不会影响大肠杆菌基因组的降解,EGCG-Cu消毒机理主要体现在对大肠杆菌细胞膜的破坏,而不是直接作用在其基因组。

关键词： EGCG-Cu EGCG 大肠杆菌消毒

EGCG的添加对大豆蛋白壳聚糖复合膜的影响

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EGCG的添加对大豆蛋白壳聚糖复合膜的影响

作者：孙书境东北农业大学

学位级别：硕士

近年来,以动植物蛋白为主要原料制备的生物可降解膜因其资源丰富、成膜能力强、生物可降解性好、营养价值高而越来越受到人们的重视,并在食品包装行业中得到越来越多的应用。其中大豆分离蛋白(SPI)和壳聚糖(CS)制备的复合薄膜就是这种... 详细信息

近年来,以动植物蛋白为主要原料制备的生物可降解膜因其资源丰富、成膜能力强、生物可降解性好、营养价值高而越来越受到人们的重视,并在食品包装行业中得到越来越多的应用。其中大豆分离蛋白(SPI)和壳聚糖(CS)制备的复合薄膜就是这种理想的可降解膜,但现有研究显示,SPI/CS复合膜存在膜结构不均匀、机械强度不足、水稳定性较差、抗氧化和抑菌能力较弱的问题。(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)因其优秀的抗氧化活性、抗病毒等生物活性常用与蛋白质相互作用从而增强蛋白质的功能特性。因此,本研究选择在SPI/CS复合膜的基础上加入EGCG对其进行改善,同时研究不同浓度的EGCG添加量对于复合膜理化性能和功能特性的影响。研究结果如下:(1)SPI/CS/EGCG复合膜的制备:以大豆分离蛋白和壳聚糖作为基底材料,添加不同浓度的EGCG,以丙三醇作为交联剂,采用共混法制备复合膜;(2)SPI/CS/EGCG复合膜制膜液的理化性质研究。粒径和电位结果显示,加入0–8%的EGCG时,能够有效改善制膜液的粒径均匀程度和溶液稳定性,但添加过量的EGCG会导致无法继续与组分结合而出现聚集现象。荧光光谱结果显示,随着EGCG添加浓度的增加荧光强度出现降低趋势,是因为EGCG的加入与SPI/CS之间形成的氢键,使蛋白质结构更加紧缩,蛋白质分子内的发色团被掩埋,导致荧光强度降低。流变结果显示,制膜液的黏度随EGCG的添加呈现增大现象,且制膜液表现出弱凝胶现象,流变特性更趋向于固体。(3)SPI/CS/EGCG复合膜的理化性质研究。加入EGCG后复合膜的颜色加深,红外光谱显示EGCG的加入与SPI/CS之间形成较强的氢键相互作用。电镜图片显示添加0–8%的EGCG能够使复合膜表面更加平滑均匀,并且结构致密程度提高,这种紧密结构使水蒸气透过率出现下降趋势。对机械强度的测定显示添加EGCG能够改善复合膜的拉伸强度和断裂伸长率。水接触角、溶解度和溶胀度的实验结果显示,在加入EGCG后,复合膜的疏水性提高,水稳定性增强。(4)SPI/CS/EGCG复合膜的功能特性研究。复合膜的热分析显示,随着EGCG的添加浓度增加,复合膜发生热降解的初始温度提高且失重率减少,表明其热稳定性能得到提升。抗氧化性的研究结果显示,复合膜对DPPH和ABTS自由基清除能力提高,说明加入EGCG改善了复合膜的抗氧化性能。在抑菌试验中,结果显示抑菌圈直径随EGCG浓度增加而增大,菌落数随EGCG加入而减少,说明EGCG能有效提高复合膜的抑菌性。

关键词：大豆分离蛋白 EGCG 壳聚糖复合膜抗氧化性抑菌性

探究EGCG对人鼻咽癌CNE2/DDP细胞株顺铂耐药的逆转作用及其相关机制

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探究EGCG对人鼻咽癌CNE2/DDP细胞株顺铂耐药的逆转作用及其相关机...

作者：彭嘉璐南华大学

学位级别：硕士

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人鼻咽癌化疗耐药的逆转耐药作用,并通过细胞实验,研究其逆转耐药的相关机制,为克服鼻咽癌化疗耐药,提高鼻咽癌疗效,提供实验数据及理论基础。材料与方法:首先通过倒置显微镜观察CNE2和CNE2/... 详细信息

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人鼻咽癌化疗耐药的逆转耐药作用,并通过细胞实验,研究其逆转耐药的相关机制,为克服鼻咽癌化疗耐药,提高鼻咽癌疗效,提供实验数据及理论基础。材料与方法:首先通过倒置显微镜观察CNE2和CNE2/DDP的细胞形态差别,然后验证CNE2/DDP细胞的耐药性:用不同阶梯浓度的顺铂(DDP)处理CNE2、CNE2/DDP细胞,CCK8法检测其增殖抑制率,从而得到各自的IC50,再通过计算得到CNE2/DDP细胞的耐药指数,进一步为了证明EGCG的逆转耐药作用,我们首先运用CCK8法检测不同浓度EGCG下的增殖抑制率,绘制抑制率折线图,当抑制率小于5%时,可相当于该药物对此细胞的抑制作用几乎可以忽略不计,因此可排除该药物本身作用的影响,所以我们选用抑制率小于5%的最大浓度作为后续的实验浓度,实验设立了三组:1.对照组、2.顺铂组、3.顺铂+EGCG组,运用CCK8法计算各组的增殖抑制率,从而计算每组的IC50,最后计算EGCG对CNE2/DDP顺铂耐药株的逆转耐药倍数,采用实时荧光定量PCR(Real time PCR)检测三组中P-gp m RNA的相对表达量,采用Western blot(蛋白免疫印迹法)法检测三组中P-gp、caspase3及cleaved-caspase3的表达,通过对比各组P-gp m RNA相对表达量情况及各组P-gp、caspase3及cleaved-caspase3蛋白表达情况,探讨EGCG作用于CNE2/DDP细胞,逆转化疗耐药性的相关机制。结果:1.倒置显微镜下可见CNE2形态规则,呈铺路石样,紧密而规整,但CNE2/DDP细胞普遍大于CNE2细胞,且排列混乱,不规则,视野较为浑浊,因CNE2/DDP细胞胞质中可见大量颗粒状物质,因其生长较慢,同样时间培养下CNE2/DDP细胞排列稀疏,且CNE2/DDP细胞中多核巨细胞易见。2.利用不同浓度的顺铂(1.4μg/m L、2.8μg/m L、5.6μg/m L、11.2μg/m L)分别作用于CNE2细胞48h后,CCK8计算对CNE2细胞的增殖抑制率分别为:37.27%、46.01%、61.51%、90.54%;利用不同浓度的顺铂(1.4μg/m L、2.8μg/m L、5.6μg/m L、11.2μg/m L)分别作用于CNE2/DDP细胞48h后,CCK8计算对CNE2/DDP细胞的增殖抑制率分别为:12.17%、16.54%、22.04%、50.94%。用SPSS23.0计算CNE2细胞的IC50为2.74μg/m L,CNE2/DDP细胞的IC50则为13.233μg/m L。CNE2/DDP细胞的耐药指数RI=IC50(CNE2/DDP)/IC50(CNE2)=4.83。结果均具有统计学意义(PEGCG增殖抑制率绘制折线图,从而选择5%以下增殖抑制率的浓度作为后续的实验浓度,EGCG作用于CNE2/DDP细胞,48h后,CCK8法测各浓度的增殖抑制率分别为:10μg/m L:1.27%;20μg/m L:5.14%;40μg/m L:13.36%;80μg/m L:27.56%;160μg/m L:43.47%。浓度为10μg/ml的EGCG作用后细胞增殖抑制率小于5%,故将其设置为后续实验浓度。4.不同浓度顺铂与10μg/ml的EGCG联合作用于CNE2/DDP细胞,48h后,CCK8法计算细胞增殖抑制率分别为:24.55%、24.02%、36.67%、57.46%;通过计算IC50为8.861μg/ml。耐药逆转倍数RI==IC50(顺铂组)/IC50(顺铂+EGCG)=1.49,差异具有统计学意义(PEGCG组与顺铂组相比,P-gp m RNA表达显著下调,结果均具有统计学意义(P0.05)。顺铂+EGCG组与顺铂组相比,P-gp蛋白表达明显下调,且差异具有统计学意义(PEGCG组与对照组和顺铂组相比,caspase3蛋白表达显著上调,均具有统计学意义(PEGCG组与对照组和顺铂组相比,cleaved-caspase3蛋白表达明显上调,差异均具有统计学意义(PEGCG的作用靶点可能是p-gp,或是凋亡蛋白caspase3。结论:EGCG能逆转人鼻咽癌CNE2/DDP细胞对顺铂的耐药,其机制可能与降低细胞中P-gp的m RNA及蛋白的表达,增加caspase3、cleaved-c

关键词：鼻咽癌表没食子没食子酸酯 EGCG 逆转耐药顺铂 P-gp caspase-3 Cleaved Caspase-3