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大肠杆菌对藏羊子宫内膜上皮细胞相关炎性因子表达的影响

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核农学报 2021年第2期35卷 280-290页

作者：张兴云王萌潘阳阳胡学权韩金辉余四九徐庚全王立斌甘肃农业大学动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070

为了探究大肠杆菌(Escherichia coli)对藏羊子宫内膜上皮细胞(EECs)相关炎性因子表达的影响,本研究采用组织块贴壁法和酶消化法培养藏羊EECs;用不同感染复数(MOI)进行E.coli感染试验,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及酶联免疫(ELISA)技术... 详细信息

为了探究大肠杆菌(Escherichia coli)对藏羊子宫内膜上皮细胞(EECs)相关炎性因子表达的影响,本研究采用组织块贴壁法和酶消化法培养藏羊EECs;用不同感染复数(MOI)进行E.coli感染试验,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及酶联免疫(ELISA)技术,分析白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎性因子的RNA和蛋白表达水平。结果表明,培养液中加入50 ng·mL^(-1)表皮生长因子(EGF)能成功培养出藏羊EECs,纯度达到98%以上;E.coli感染试验中,当MOI为1∶1时,IL-1β、IL-6和IL-8基因和蛋白的表达量与对照组相比差异不显著,而TNF-α表达量显著升高(P0.05)。结果表明,酶消化法可成功培养藏羊EECs;不同MOI E.coli感染后,藏羊EECs中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等炎性因子的表达量较对照组均显著升高(P<0.05),它们可作为识别子宫内膜炎病理变化程度的指标。本研究结果为预防子宫内膜炎、提高藏羊的生产性能以及生态养殖提供了理论依据。

关键词：藏羊 E.coli 子宫内膜炎 EECs 炎性因子

动物消化道脂类物质感应机制及其EECs调控

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家畜生态学报 2017年第12期38卷 87-89页

作者：吕永智重庆三峡职业学院重庆404155

肠道具有感应功能,能够感应肠腔内的营养物质,通过影响肠道内分泌细胞(EECs)的分泌功能调节营养代谢等生理活动。机体对脂类物质的感应主要通过与游离脂肪酸受体、G-蛋白偶联受体、胆固醇感应蛋白相互作用,影响EECs分泌功能,从而发挥调... 详细信息

肠道具有感应功能,能够感应肠腔内的营养物质,通过影响肠道内分泌细胞(EECs)的分泌功能调节营养代谢等生理活动。机体对脂类物质的感应主要通过与游离脂肪酸受体、G-蛋白偶联受体、胆固醇感应蛋白相互作用,影响EECs分泌功能,从而发挥调节作用。

关键词：脂类物质感应机制 EECs 受体调控

小反刍兽疫病毒诱导宿主细胞内质网应激对病毒复制的影响

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小反刍兽疫病毒诱导宿主细胞内质网应激对病毒复制的影响

作者：郭较娜西北农林科技大学

学位级别：硕士

小反刍兽疫（Peste des petits ruminants,PPR）是由副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus）的小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,主要感染野生动物... 详细信息

小反刍兽疫（Peste des petits ruminants,PPR）是由副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus）的小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,主要感染野生动物在内的小反刍动物。宿主感染PPRV后,临床症状主要表现为发热、坏死性口炎、腹泻、支气管肺炎等,死亡率达50%～80%,给畜牧养殖业造成了巨大的经济损失。内质网是细胞内各种蛋白合成、修饰和分泌的主要场所,也是病毒完成自身生命周期的必需场所。病毒在成熟和复制的过程中都需利用宿主细胞的内质网合成大量的病毒蛋白,造成大量未折叠或错误折叠蛋白的累积,从而引起内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）,进而激活未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）。大多数RNA病毒均能引起内质网应激,而PPRV能否诱导内质网应激未见有研究报道,为了探究PPRV感染宿主细胞后能否诱导内质网应激及内质网应激调控其复制的分子机制,本文主要针对2个方面展开研究,其内容与结果如下:（1）PPRV感染能够诱导山羊子宫内膜上皮细胞（EECs）发生内质网应激。本文通过透射电镜观察EECs内质网的形态结构,发现PPRV（MOI=3）感染后使细胞的内质网腔发生明显的肿胀;EECs感染PPRV后用免疫印迹和q RT-PCR检测发现内质网应激的标志分子GRP78与GRP94在m RNA转录和蛋白的表达水平均明显上升,表明PPRV感染能够诱导EECs发生内质网应激。为了探究PPRV感染诱导内质网应激激活了UPR的哪些信号通路,利用免疫印迹与定量PCR的方法分别对UPR的三条信号通路（PERK、ATF6、IRE1）上的关键因子进行了检测,结果显示PPRV感染EECs后促进PERK与e IF2α蛋白的磷酸化水平和ATF4与CHOP的m RNA的表达水平,表明PERK-e IF2α通路被激活;而ATF6与IRE1通路均未被激活。为了分析各种病毒蛋白对内质网应激的影响,用含有病毒P、C、H、V和N基因的质粒转染宿主细胞后,用Western blot检测发现,HA-C和HA-N蛋白显著诱导了GRP78和GRP94的表达,表明PPRV的C蛋白与N蛋白在诱导EECs内质网应激的过程中发挥重要作用。（2）内质网应激对PPRV复制的影响。为了进一步分析内质网应激和UPR通路在PPRV复制过程中的作用,本文利用TG、4-PBA、GSK2606414以及干扰GRP78、GRP94、PERK的si RNA促进或抑制内质网应激后,对PPRV的病毒滴度以及N蛋白的表达进行了检测。结果表明,内质网应激的诱导剂TG作用24 h时促进PPRV的复制,但在48 h和72 h时抑制PPRV的复制,4-PBA缓解内质网应激后抑制PPRV的复制,表明内质网应激在一定程度上促进PPRV的复制;使用药物GSK或干扰PERK来抑制PERK通路均降低了PPRV的复制。研究还发现,干扰GRP94分子的表达对病毒复制无明显作用,而干扰另一个标志分子GRP78后显著抑制PPRV的复制。综上所述,本研究发现PPRV感染EECs后能够诱导内质网应激的发生,并激活PERK-e IF2α信号通路,C、N蛋白是PPRV诱导EECs内质网应激的关键蛋白;进一步发现内质网应激能够促进PPRV的复制,并且PPRV能够利用PERK通路与GRP78增强其复制。该研究结果为进一步深入探究PPRV致病机制奠定了理论基础。

关键词：小反刍兽疫病毒 EECs 内质网应激未折叠蛋白反应病毒复制

miR-184通过STC2-IGF1调控奶山羊子宫内膜上皮细胞凋亡的研究

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miR-184通过STC2-IGF1调控奶山羊子宫内膜上皮细胞凋亡的研究

作者：车思成西北农林科技大学

学位级别：硕士

非编码小RNA（miRNAs）在哺乳动物体内各个组织表达并调控机体各项生理活动,子宫中其含量也非常丰富。研究显示miR-184可以调控细胞的凋亡与增殖,但其对奶山羊子宫内膜上皮细胞（EECs）的作用机制研究甚少。本课题组前期在奶山羊子宫内... 详细信息

非编码小RNA（miRNAs）在哺乳动物体内各个组织表达并调控机体各项生理活动,子宫中其含量也非常丰富。研究显示miR-184可以调控细胞的凋亡与增殖,但其对奶山羊子宫内膜上皮细胞（EECs）的作用机制研究甚少。本课题组前期在奶山羊子宫内膜容受期（RE）容受前期（PE）的miRNA高通量测序结果表明miR-184与RE富集程度较之PE上升31倍（P＜0.01）。本研究通过生物信息学分析预测并筛选出STC2是miR-184的靶基因,并且STC2在胚胎着床期间发挥关键的调控作用。然而STC2在奶山羊EECs中的分子调控机理尚不清楚。本研究以奶山羊子宫内膜上皮细胞（EECs）为研究对象,通过stem-loop RT-qPCR和RT-qPCR检测miR-184与STC2在RE与PE中的表达量。构建野生型（WT）与突变型（Mut）psi CHECK2-STC2-3′UTR载体,并利用RNA干扰、RT-qPCR、Western blot、CCK8、流式细胞术、EDU等试验技术,研究miR-184通过STC2-IGF1对奶山羊EECs的调控作用。主要研究结果如下:1.miR-184在RE中的表达丰度升高,而STC2 mRNA的表达丰度降低本研究采用stem-loop RT-qPCR和RT-qPCR验证miR-184和STC2 mRNA在奶山羊RE与PE的相对表达量,结果显示RE中的miR-184表达丰度相较于PE升高（P＜0.01）,而STC2mRNA表达丰度降低（P＜0.01）。2.STC2是miR-184的靶基因本研究成功构建了野生型（WT）与突变型（Mut）psi CHECK2-STC2-3′UTR载体,对miR-184与野生型或突变型psi CHECK2-STC2-3′UTR载体质粒共转处理组检测两种荧光强度。双荧光检测结果显示miR-184使野生型的海肾荧光值同萤火虫荧光值的比值降低,但对突变型的无显著性影响,这一结果初步表明STC2是miR-184的靶基因。另外,Western blot检测发现miR-184使STC2在蛋白水平上的表达量显著（P＜0.05）下降,miR-184可靶向下调STC2在EECs中的表达量。3.miR-184通过STC2-IGF1轴抑制EECs增殖,并诱导其凋亡。在EECs中,Western blot试验结果表明miR-184能够抑制RAS/ERK通路的活性,并在蛋白水平下调了BCL2/BAX的比值,同时通过CCK8、流式细胞分析、EDU等试验检测表明miR-184诱导EECs凋亡,抑制EECs增殖。进一步研究发现,STC2显著（P＜0.05）的激活了RAS/ERK通路上蛋白的磷酸化水平,并使BCL2/BAX的比值显著（P＜0.05）的升高。同时,CCK8、EDU和流式细胞分析等试验结果显示STC2抑制EECs凋亡,并促进了EECs增殖。研究发现STC2可上调IGF1在EECs中的蛋白水平,而siSTC2下调了IGF1的表达量;IGF1能激活RAS/ERK信号通路,并上调BCL2/BAX的比值;这表明STC2可通过IGF1介导的RAS/ERK信号通路促进EECs增殖。综上所述,miR-184通过STC2-IGF1轴经RAS/ERK信号通路抑制EECs增殖,并诱导其凋亡。

关键词：西农萨能奶山羊 EECs 凋亡 miR-184 STC2 IGF1

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MIT本科课程体系及对软件工程课程的启示

计算机教育 2014年第21期 122-126页

作者：苏统华范国祥高峰刘绍辉路军哈尔滨工业大学软件学院黑龙江哈尔滨150001 摩托罗拉加拿大分公司

详述麻省理工学院(MIT)的电子工程与计算机(EECs)系本科课程体系,通过2位学生的真实选课实例对课程体系的实践予以说明;分析软件工程方向课程间的关联,总结EECs系课程体系对工科类院校的启示。

关键词： MIT EECs 课程体系软件工程工科院校

Effect of c-erbB2 antisense oligodeoxynucleotide on implantation of mice blastocyst in vitro

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Effect of c-erbB2 antisense oligodeoxynucleotide on implanta...