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HPV16 e5多表位肽免疫原性研究

免疫学杂志 2023年第4期39卷 341-347页

作者：张静李青峰汪琪朱珊丽陈韶张丽芳温州医科大学微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所 325035

目的筛选人乳头瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白多表位肽段,并评估其诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫的免疫原性反应。方法通过Uniprot获得HPV16 E5蛋白的氨基酸序列,采用eXPASY和SYFPeITHI等软件预测HPV16 E5蛋白的表位,筛选出富含B细胞... 详细信息

目的筛选人乳头瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白多表位肽段,并评估其诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫的免疫原性反应。方法通过Uniprot获得HPV16 E5蛋白的氨基酸序列,采用eXPASY和SYFPeITHI等软件预测HPV16 E5蛋白的表位,筛选出富含B细胞和CTL表位的氨基酸肽段——HPV16 E5蛋白N端处aa28-46(LIRPLLLSVSTYTSLIILV),进一步用该多表位肽免疫C57BL/6小鼠,评估其诱导产生特异性体液免疫和细胞免疫的反应。结果该肽段可诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,且抗体滴度随着免疫次数增加而升高,同时可诱导小鼠产生特异性的CTL反应,在效靶比为40∶1时,对靶细胞产生显著的特异性杀伤作用。结论HPV16 E5蛋白多表位肽aa28-46(LIRPLLLSVSTYTSLIILV)具有良好的免疫原性,可为基于HPV16 E5蛋白的疫苗研究提供基础。

关键词： HPV16型 E5蛋白多表位免疫原性

HPV18 E5蛋白稳定表达株的筛选及对细胞增殖和周期的影响

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病毒学报 2015年第5期31卷 530-536页

作者：李凡李劲涛刘楚怡钟儒刚曾毅北京工业大学生命科学与生物工程学院环境与病毒肿瘤学北京市重点实验室北京100124 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京100052

本研究筛选能稳定表达HPV18E5蛋白的细胞株,并检测HPV18E5蛋白对细胞增殖及周期的影响。通过PCR方法扩增得到HPV18e5基因,经酶切和连接构建含His标签的pSecTag-HPV18e5真核表达质粒。运用脂质体介导的方法将重组质粒转染Balb/c3T3细胞,... 详细信息

本研究筛选能稳定表达HPV18E5蛋白的细胞株,并检测HPV18E5蛋白对细胞增殖及周期的影响。通过PCR方法扩增得到HPV18e5基因,经酶切和连接构建含His标签的pSecTag-HPV18e5真核表达质粒。运用脂质体介导的方法将重组质粒转染Balb/c3T3细胞,并用含有博来霉素的培养基筛选阳性细胞株。利用Western blot和免疫酶法鉴定HPV18e5在细胞中的表达。运用CCK-8法、流式细胞术检测HPV18e5对细胞增殖及细胞周期的影响。结果显示pSecTag-HPV18e5真核表达质粒构建成功;重组质粒转染Balb/c3T3细胞后,经400μg/mL博来霉素筛选21d,得到稳定表达HPV18E5蛋白的细胞株;与对照组相比,HPV18e5稳定表达细胞株的细胞增殖能力明显增强,细胞周期中S期的比值明显增加。研究表明HPV18e5对细胞增殖及细胞周期有影响。本结果为进一步深入研究HPV18E5蛋白的生物学特性及致癌作用奠定了基础。

关键词：人乳头瘤病毒18型 E5蛋白细胞增殖细胞周期

人乳头瘤病毒16型E5蛋白在宫颈癌中表达及其作用的研究进展

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现代预防医学 2017年第5期44卷 950-953页

作者：简洁杨嘉洁李婉宜左凤琼四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室四川省成都市树德中学

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤,其发生发展与HPV的感染密切相关。HPV16是宫颈癌患者中感染率最高的亚型,其编码的早期蛋白e5、e6、e7可刺激宫颈上皮细胞转化成肿瘤细胞。e6、e7蛋白在宫颈癌晚期表达,e5可能在早期表达。E5蛋白的是否表达... 详细信息

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤,其发生发展与HPV的感染密切相关。HPV16是宫颈癌患者中感染率最高的亚型,其编码的早期蛋白e5、e6、e7可刺激宫颈上皮细胞转化成肿瘤细胞。e6、e7蛋白在宫颈癌晚期表达,e5可能在早期表达。E5蛋白的是否表达及其致癌机制与多种因子相关。E5蛋白可作用于细胞生长因子受体通路,下调miRNA196a,并通过与HLAⅠ类分子结合协助感染细胞免疫逃逸,从而促进肿瘤的发生。E5蛋白与e6、e7蛋白协同会发挥更强的致宫颈癌作用。本研究对E5蛋白表达与病毒整合的关系及其对宫颈癌的作用进行了综述。

关键词：人乳头瘤病毒16 宫颈癌 E5蛋白病毒整合

牛乳头瘤病毒13型海南株的全基因组克隆及E5蛋白的真核表达

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牛乳头瘤病毒13型海南株的全基因组克隆及E5蛋白的真核表达

作者：史巧芸海南大学

学位级别：硕士

牛乳头状瘤(Bovine papillomatosis, BP)是由牛乳头瘤病毒(Bovine papilloma-virus, BPV)引起肿瘤发生的慢性增生性疾病。本病无明显的季节性和地区性,为奶牛最常见的肿瘤疾病,多发于体表、粘膜及某些器官。牛乳头状瘤易复发,进而发展... 详细信息

牛乳头状瘤(Bovine papillomatosis, BP)是由牛乳头瘤病毒(Bovine papilloma-virus, BPV)引起肿瘤发生的慢性增生性疾病。本病无明显的季节性和地区性,为奶牛最常见的肿瘤疾病,多发于体表、粘膜及某些器官。牛乳头状瘤易复发,进而发展为癌症,导致动物死亡,最终造成肉类、奶业和皮革类行业严重的经济损失,而目前尚无有效疫苗来预防牛乳头瘤病的发生。E5蛋白是BPV的主要肿瘤蛋白,通过干扰细胞生长抑制和细胞周期调控来发挥作用,与生长因子受体相互作用,激活细胞增殖。BPV E5蛋白参与细胞转化,且在病毒感染初始以及整个过程中都有表达,改变正常细胞对生长因子的应答,阻碍细胞表面主要组织相容性复合物的表达。鉴于这种种作用,e5具有被用来研发DNA疫苗的重大意义。因此,对于BPV相关功能蛋白的研究可为今后BPV疫苗的开发奠定基础。另外,随着人类性病中尖锐湿疣发病率的急速上升和宫颈癌、肛门癌等疾病的增多,HPV感染越来越引起人们的关注。BPV可以作为研究HPV感染,HPV与宿主以及与环境因素之间的相互作用关系的体内模型,能够为人乳头瘤病的检测与治疗提供理论依据。本实验克隆了牛乳头瘤病毒13型海南株的全基因组,并构建peGFP-N1-e5重组真核表达载体,在HeK293细胞中表达。利用荧光观察、FCM (Flow Cytometry Method)检测和Western blot鉴定来验证重组蛋白的表达,为牛乳头瘤病的预防性和治疗性疫苗的研发奠定了前期基础。以下为本实验的研究方法和主要结果：1.牛乳头瘤病毒基因分型与全基因组的克隆本研究以来自海口某农场黄牛的牛乳头瘤病料组织为材料,提取病毒DNA。根据乳头瘤病毒衣壳蛋白L1基因的保守序列设计的简并引物FAP59/FAP64进行PCR检测,经过测序和序列比对对该BPV进行了基因分型。结果显示,患病黄牛所感染的BPV类型为BPV-13,命名为BPV-13-HN。设计BPV-13-HN基因型特异性引物,通过扩增、测序、拼接、对比后获得BPV13-HN全基因组序列。实验病毒株基因组全长7961bp,包括8个开放阅读框(open reading frame, ORF),分别为早期基因区e1、e2、e4、e5、e6、e7和晚期基因区L1、L2。 2. BPV-13-HNE5蛋白在HeK293细胞中的表达用PCR扩增e5基因,以peGFP-Nl为真核表达载体构建重组表达质粒,转染进入HeK293细胞。进行荧光显微观察,流式细胞仪检测和Western Blot鉴定。结果表明：本实验成功构建了重组真核表达质粒,可成功表达E5蛋白,为下一步稳定表达e5的细胞系的构建做好初步准备,为E5蛋白的研究及相关疫苗的开发奠定基础。

关键词：牛乳头瘤病毒全基因组克隆 E5蛋白真核表达

人乳头瘤病毒16型E5蛋白的生物学活性研究进展

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疑难病杂志 2015年第10期14卷 1084-1087页

作者：杨慧伦张宗峰哈尔滨医科大学附属二院妇科肿瘤科 150001

宫颈癌发病率位于女性肿瘤的第3位,全球每年有约27万女性死于宫颈癌。人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）持续感染是宫颈癌的主要危险因素,90%以上的宫颈癌伴有高危型HPV感染。HPV是一种乳头瘤空泡病毒,为球形DNA病毒,能引起皮... 详细信息

宫颈癌发病率位于女性肿瘤的第3位,全球每年有约27万女性死于宫颈癌。人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）持续感染是宫颈癌的主要危险因素,90%以上的宫颈癌伴有高危型HPV感染。HPV是一种乳头瘤空泡病毒,为球形DNA病毒,能引起皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出130多种HPV,根据其致癌危险性不同可分为低危型（low-risk human papilloma virus,LR-HPV）和高危型（high-risk human papilloma virus，HR-HPV）两大类。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E5蛋白生物学活性宫颈癌

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人乳头瘤病毒16型E5蛋白功能的研究进展

微生物与感染 2013年第2期8卷 119-123页

作者：史菁菁张喜凤谷鸿喜商庆龙哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081

人乳头瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白具有特殊的生物学活性,在宫颈癌发生过程中起重要作用。HPV16E5蛋白具有转化活性,并可增强e6和e7蛋白的致癌活性。E5蛋白的转化活性主要通过上皮生长因子受体(eGFR)信号上调发挥作用。近年来还发现,HPV16e... 详细信息

人乳头瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白具有特殊的生物学活性,在宫颈癌发生过程中起重要作用。HPV16E5蛋白具有转化活性,并可增强e6和e7蛋白的致癌活性。E5蛋白的转化活性主要通过上皮生长因子受体(eGFR)信号上调发挥作用。近年来还发现,HPV16E5蛋白是影响免疫系统和炎症通路的关键因子,可能成为宫颈癌治疗的一个靶标。本文就HPV16E5蛋白当前的研究进展进行综述。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E5蛋白致癌免疫

人乳头瘤病毒16型e5基因克隆、原核表达及产物鉴定

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国际遗传学杂志 2008年第4期31卷 254-257页

作者：商庆龙王燕陈思佳李承刚魏兰兰郝美丽李立群谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室

目的克隆 HPV16 e5基因,构建原核重组工程菌并诱导表达,对表达产物 HPV16E5蛋白进行鉴定。方法提取宫颈癌组织 DNA 作为模板,用 PCR 方法扩增 HPV16 e5基因,经 BamH I和 HindⅢ双酶切后,插入相同酶切的 peT21b 载体质粒,转化 DH5α,筛... 详细信息

目的克隆 HPV16 e5基因,构建原核重组工程菌并诱导表达,对表达产物 HPV16E5蛋白进行鉴定。方法提取宫颈癌组织 DNA 作为模板,用 PCR 方法扩增 HPV16 e5基因,经 BamH I和 HindⅢ双酶切后,插入相同酶切的 peT21b 载体质粒,转化 DH5α,筛选阳性克隆。经酶切和测序鉴定后转化大肠埃希菌 BL21(De3),建立重组工程菌株 peT21b-HPV16e5/BL21(De3)。经 IPTG 诱导表达,SDS-PAGe 和 Western 印迹检测表达产物。结果 HPV16 e5基因扩增片段0.27kb。测定序列与 HPV16原型株 e5基因比较,出现4处核苷酸变异,分别为3979、4042、4077和4089位,引起144L和165V 氨基酸改变。重组质粒经酶切和序列测定证实构建正确。SDS-PAGe 分析重组菌在16 kDa处出现蛋白条带。该蛋白条带可被组氨酸标签单克隆抗体特异性识别。结论成功克隆 HPV16e5基因,并构建原核表达质粒,E5蛋白在 BL21(De3)中表达。本实验为进一步研究 e5生物学活性、转化活性和肿瘤杀伤免疫作用奠定了实验基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E5蛋白原核表达克隆

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人乳头瘤病毒e5的研究进展

中国妇幼健康研究 2006年第3期17卷 236-239页

作者：蒙雅萍李倪西安市卫生学校陕西西安710054

人乳头瘤病毒e5是一种转化作用的癌蛋白,是细胞膜或内膜整合蛋白。人乳头瘤病毒e5在感染的细胞中表达,主要在感染细胞克隆早期的繁殖、扩张中起重要作用。它干预生长因子受体,干扰周期蛋白和周期蛋白激酶,促进病毒癌基因转化,抑制抑癌... 详细信息

人乳头瘤病毒e5是一种转化作用的癌蛋白,是细胞膜或内膜整合蛋白。人乳头瘤病毒e5在感染的细胞中表达,主要在感染细胞克隆早期的繁殖、扩张中起重要作用。它干预生长因子受体,干扰周期蛋白和周期蛋白激酶,促进病毒癌基因转化,抑制抑癌基因表达,激活启动子促进病毒繁殖,并通过多种机制促使损伤细胞,通过细胞周期,使宿主细胞增殖、分化延缓、恶性化。近年的研究揭示了不同类型人乳头瘤病毒癌蛋白的功能差异,为人乳头瘤病毒诱导细胞永生化和致癌分子机制的研究提供了依据。该文将从e5对信号转导途径的影响,对细胞周期的影响,与癌基因和抑癌基因的相互作用,反式激活作用和变异几方面综述e5的研究进展。

关键词：人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒16型e5 E5蛋白克隆