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CRISPR/Cas9-mediated knockout of e4 gene promotes maturation in soybean

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Oil Crop Science 2024年第3期9卷 170-176页

作者： Shuiqing Wu Li Chen Mengwei Guo Yupeng Cai Yang Gao Shan Yuan Shi Sun Yuxian Zhang Wensheng Hou Tianfu Han College of Agriculture Heilongjiang Bayi Agricultural UniversityDaqing163316China Ministry of Agriculture Key Laboratory of Soybean Biology(Beijing) Institute of Crop SciencesChinese Academy of Agricultural SciencesBeijing100081China College of Agriculture Northeast Agricultural UniversityHarbin150030China State Key Laboratory of Crop Germplasm Innovation and Molecular Breeding Syngenta Biotechnology(China)Co.LtdBeijing100081China

Soybean is a broadly popular and extensively cultivated crop,however,many high-yield and high-quality varieties require specific growth conditions,restricting their widespread *** appropriate light conditions and photoperiod must be attained for these varieties to thrive in new *** this study,we employed CRISPR/Cas9 to design two sgRNAs aimed at knocking out the maturity-related gene e4 in a major American soybean variety called''Jack'',which belongs to maturity group MGII.e4 gene is primarily involved in the photoperiodic flowering and maturity in soybean,making it an ideal candidate for genetic *** successfully obtained 1 homozygous e4-SG1 mutant type with 1-bp insertion,and 4 homozygous e4-SG2 mutants type with 2-bp deletion,7-bp deletion,61-bp deletion,and 1-bp insertion,*** homozygous e4 mutant plants contained early termination codons devoid of transgenic ***,no potential offtarget sites of the e4 gene were detected.A comparative analysis revealed that,unlike the wild-type,the maturity time of homozygous e4 mutants was early under both short-day and long-day *** mutants offer novel germplasm resources that may be used to modify the photoperiod sensitivity and maturity of soybean,enhancing its adaptability to high-latitude regions.

关键词： Soybean e4 CRISPR/Cas9 Maturity

The Relation between Apolipoprotein e4 Genotype and Vascular Dementia

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Advances in Aging Research 2014年第3期3卷 208-215页

作者： Tomader Taha Abdel Rahman Safia Mohamed Shehata Clinical Pathology Department Ain Shams University Hospitals Cairo Egypt Geriatrics Medicine Department Faculty of Medicine Ain Shams University Cairo Egypt

Most studies investigating genetics of dementia have focused on Alzheimer’s disease, but little is known about the genetics of vascular dementia (VD). The aim of this study was to identify the association between Apolipoprotein e4 (Apo e4) genotype and VD in cerebrally infarcted patients. The study was conducted on 100 patients with cerebral infarction: 50 had VD (cases) and 50 didn’t have dementia (controls). Diagnosis of VD was based on Mini-Mental State examination, Cambridge Cognitive examination (CAMCOG), the Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders 4th edition criteria for the diagnosis of VD (DSM-IV), Hachinski Ischemic Score, and computed tomography of the brain (CT brain). Apo e4 allele was assessed through DNA genotyping. The study showed that hypertension (p = 0.027, OR = 4.71), diabetes mellitus (p = 0.003, OR = 6.05) and Apo e4 allele (p = 0.017, OR = 13.39) were the independent risk factors of VD among studied participants. The study concluded that cerebrally infarcted patients with Apo e4 genotype are at high risk of developing VD.

关键词： Apolipoprotein e4 Cerebral Infarction Genetics Vascular Dementia

尿半胱氨酸白三烯e4诊断支气管肺发育不良的临床评价

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中华儿科杂志 2016年第9期54卷 703-707页

作者：金蕊卢红艳罗妍妍许云仙胡毓华陈筱青南京医科大学第一附属医院儿科 210029 江苏大学附属医院儿科

目的探讨新生儿尿液半胱氨酸白三烯e4（CysLTe4）水平与支气管肺发育不良（BPD）的关系.方法收集2014年11月至2015年10月南京医科大学第一附属医院收治的新生儿158例,出院后根据出院诊断将其分为3组：无肺部疾病的足月儿61例（足月组... 详细信息

目的探讨新生儿尿液半胱氨酸白三烯e4（CysLTe4）水平与支气管肺发育不良（BPD）的关系.方法收集2014年11月至2015年10月南京医科大学第一附属医院收治的新生儿158例,出院后根据出院诊断将其分为3组：无肺部疾病的足月儿61例（足月组）,不伴有BPD早产儿52例（早产组）,早产儿BPD 45例（BPD组）.采用酶联免疫吸附试验（eLISA）方法检测新生儿生后3d内尿液CysLTe4水平.比较3组患儿生后早期的尿CysLTe4水平,分析尿CysLTe4水平的诊断效能及与胎龄、体重的相关性.采用相关性分析、方差分析及χ^2检验等进行统计分析.结果 BPD组患儿生后3d内尿CysLTe4水平（191.0 ±29.3） ng/L,与早产组[（164.1±22.7） ng/L]和足月组[（151.6±41.9） ng/L]患儿比较差异有统计学意义（F=18.70,P＜0.05）.胎龄、出生体重与新生儿生后3d尿CysLTe4水平成负相关,Pearson相关系数分别为-0.33和-0.38,P＜0.01.截断值为187.7 ng/L时诊断效能最大,约登指数0.59,灵敏度77.8％,特异度81.4％.受试者工作特征曲线（ROC）下面积0.78,95％ CI：0.70 ～0.86（P ＜0.01）.结论 BPD患儿生后早期尿CysLTe4即显著上升,尿CysLTe4是有早期诊断意义的生物学指标.

关键词：白三烯e4 支气管肺发育不良婴儿,新生 Leukotriene e4

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e4声动力治疗小鼠S180肉瘤的实验研究

肿瘤防治研究 2010年第1期37卷 39-41页

作者：李陆振黎静张为民王晓怀李志强宣敏郝建冬罗一帆广州军区广州总医院肿瘤科 510010 广州中医药大学华南师范大学化学与环境学院

目的本文研究超声激活声敏剂e4对在体小鼠S180肉瘤的杀伤作用。方法荷瘤小鼠腹腔注射e4(40mg/kg),6小时后用频率为1.0MHz超声波照射肿瘤区域180s,超声强度分3组:0.4W/cm2,0.8W/cm2,1.6W/cm2。以空白对照组,单纯超声组(超声强度为1.6W/cm... 详细信息

目的本文研究超声激活声敏剂e4对在体小鼠S180肉瘤的杀伤作用。方法荷瘤小鼠腹腔注射e4(40mg/kg),6小时后用频率为1.0MHz超声波照射肿瘤区域180s,超声强度分3组:0.4W/cm2,0.8W/cm2,1.6W/cm2。以空白对照组,单纯超声组(超声强度为1.6W/cm2),单纯声敏剂组为对照组,每两天测量肿瘤大小,12天后剥离肉瘤并称重比较。结果e4在小鼠体内经超声激活后可明显抑制肿瘤生长。在超声强度为0.4W/cm2～0.8W/cm2范围时,e4对肿瘤的抑制作用随声强的增加疗效亦增加。结论e4声动力治疗对小鼠S180肉瘤有明显杀伤或抑制作用,在一定范围内其作用大小与超声强度正相关。声动力疗法有望成为临床治疗肿瘤的新方法。

关键词： Chlorine e4 超声波 S180肉瘤小鼠声动力治疗

新型深海来源蛋白酯酶e4的纯化、结晶和X射线衍射分析

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复旦学报（自然科学版） 2019年第1期58卷 58-63,71页

作者：申彦芳杨慧霍颖异胡娟许学伟李继喜复旦大学生命科学学院上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 国家海洋局第二海洋研究所海洋生态系统和生物地球化学重点实验室浙江杭州310012

酯酶和脂酶是水解短链酯类和长链甘油三酯的两类水解酶,在制药和食品工业酯(脂)键的合成和分解过程中发挥着关键的作用.我们前期已鉴定深海细菌Croceicoccus marinus e4A9T来源的新型蛋白酯酶e4,该酶属于酯酶SGNH亚家族,具有潜在的水解... 详细信息

酯酶和脂酶是水解短链酯类和长链甘油三酯的两类水解酶,在制药和食品工业酯(脂)键的合成和分解过程中发挥着关键的作用.我们前期已鉴定深海细菌Croceicoccus marinus e4A9T来源的新型蛋白酯酶e4,该酶属于酯酶SGNH亚家族,具有潜在的水解溶血磷脂键的作用,但其催化机制尚不清楚,因此我们对蛋白e4进行了纯化、结晶和初步的X射线衍射分析.e4在大肠杆菌中高效表达,动态光散射(DLS)分析显示其主要以四体的形态均匀分布在溶液中.我们对e4进行了晶体初筛和优化,最终优化培养出棒状晶体且衍射分辨率达2.2.X射线衍射结果表明e4属于P43212空间群,晶胞参数为a=88.863,b=88.863,c=318.914,α=90°,β=90°,γ=90°.此外,酶学活力测定结果表明,它能够水解具有不同酰基链长度的酯类(C2～C10),尤其倾向于水解己酸酯(C6)和辛酸酯(C8).

关键词：酯酶 e4 纯化动态光散射 X-射线衍射

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大豆e3、e4单克隆抗体制备及初步应用

大豆E3、E4单克隆抗体制备及初步应用

作者：陈林楠广州大学

学位级别：硕士

大豆作为优质植物蛋白来源,是国人饮食不可或缺的一部分,在国家粮食安全体系中占有重要地位。近年来,我国大豆需求快速增加,然而单产较国外仍处于较低水平,陷入依赖进口的“卡脖子”窘境,大豆种业形势严峻。扩大国产大豆种植面积,提高... 详细信息

大豆作为优质植物蛋白来源,是国人饮食不可或缺的一部分,在国家粮食安全体系中占有重要地位。近年来,我国大豆需求快速增加,然而单产较国外仍处于较低水平,陷入依赖进口的“卡脖子”窘境,大豆种业形势严峻。扩大国产大豆种植面积,提高国产大豆单产水平,培育优质国产大豆是缓解大豆危机的关键。光周期调控大豆适应性和单株产量。在大豆独特的光周期分子调控路径里,e3、e4作为大豆的主要红光和远红光光感受器,在光周期开花调控中发挥重要作用。本研究通过制备得到大豆e3、e4抗体,从蛋白水平上探究e3、e4行使的功能,揭示蛋白水平上的大豆光周期分子调控网络。本研究分为三部分内容,第一部分是大豆e3、e4抗原的制备,第二部分是大豆e3、e4抗体的制备,第三部分是大豆e3、e4抗体的筛选与应用,研究结果如下:1.大豆e3、e4抗原的制备通过引物设计,PCR扩增出目的基因,将测序正确的目的片段与载体经双酶切后,连接转化DH5α大肠杆菌,成功构建peT-30a(+)-e3(末端300aa)-HIS、peT-30a(+)-e4(末端300aa)-HIS原核表达载体。将质粒转入BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,获得符合预期大小的e3、e4抗原重组蛋白,大小为43 KDa,两种蛋白均以包涵体形式表达。小量蛋白表达诱导条件为:0.5 mM IPTG,37℃,200 rpm,诱导2 h,大量蛋白表达诱导条件为:0.5 mM IPTG,16℃诱导过夜。收集大量表达的菌体超声破碎,经10 mM Tris-HCl(pH=8.0)、8 M尿素、10%甘油蛋白缓冲体系洗涤溶解,最终纯化出目的蛋白。2.大豆e3、e4抗体的制备将纯化好的抗原蛋白皮下免疫SPF级BALB/c雌性小鼠,经三次皮下免疫通过PeG介导小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,采用eLISA方法筛选得到阳性杂交瘤细胞株并进行亚类鉴定,最后得到9株大豆e3阳性杂交瘤细胞株,5株大豆e4阳性杂交瘤细胞株。经Western Blot检测结果显示,单抗e3-24、e3-26能特异性识别大豆体内e3,单抗e4-12、e4-13能特异性识别大豆体内e4及Gmphy A1。3.大豆e3、e4抗体的筛选与应用利用筛选得到的大豆e3和e4抗体,对当前e3和e4存在的一些科学问题进行实验设计,获得以下结论:首先e3较e4在红光下稳定并且e4对红光格外敏感,由此我们可以解释为什么e3在高低红光/远红光下调控大豆光周期敏感性,而e4仅调控低红光/远红光条件下大豆光周期敏感性。其次,ZT0是e3和e4蛋白一天富集最多的时刻。最后,e3和e4在12天及12天前的长短日照条件下蛋白量的差异为e3e4突变体植株在长短日照条件下表型不一致的现象提供生化证据。

关键词：大豆 e3 e4 单克隆抗体

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e4砖建筑概念及在西欧的发展概况

砖瓦 2017年第12期 38-44页

作者：湛轩业西安墙体材料研究设计院陕西西安710061

阐述了e4砖建筑概念并列举了西欧一些e4砖建筑实例,指出烧结砖具备的优良特性决定了它在未来建筑中依然具有重要地位。

关键词： e4 砖建筑西欧发展

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e4砖建筑概念及在西欧的发展概况

砖瓦世界 2018年第2期 48-55页

作者：湛轩业

1 e4砖建筑概念e4砖建筑的概念是由世界上最大的现代烧结砖瓦产品制造集团——奥地利的维也纳山(Wienerberger)集团公司首先提出的。维也纳山集团公司在2009年度的《可持续发展报告》中正式对外公布了这一可持续发展建筑的新理念。e4砖... 详细信息

1 e4砖建筑概念e4砖建筑的概念是由世界上最大的现代烧结砖瓦产品制造集团——奥地利的维也纳山(Wienerberger)集团公司首先提出的。维也纳山集团公司在2009年度的《可持续发展报告》中正式对外公布了这一可持续发展建筑的新理念。e4砖建筑是指可持续发展建筑必须具备的四项属性,分别用词首为"e"的四个关键性英文单词来表示,即:能源(energy)、生态(ecology)、经济(economy)和情感

关键词：烧结砌块建筑概念烧结砖瓦 e4 保温隔热性能维也纳建筑住宅可持续发展建筑

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e4儿童生活馆劲吹国际风

纺织服装周刊 2013年第9期 61-页

作者：白晓

近年来,国际童装品牌纷纷加大在中国市场的拓展力度,在即将开幕的CHIC2013上,西班牙知名品牌Mayoral,美国著名童装品牌OSHKOSH B’GOSH、ZUTANO、J is for Jeep,荷兰著名童装品牌ROOKI KIDS和法国知名品牌eissy Kids等国际知名品牌高密... 详细信息

近年来,国际童装品牌纷纷加大在中国市场的拓展力度,在即将开幕的CHIC2013上,西班牙知名品牌Mayoral,美国著名童装品牌OSHKOSH B’GOSH、ZUTANO、J is for Jeep,荷兰著名童装品牌ROOKI KIDS和法国知名品牌eissy Kids等国际知名品牌高密度云集,即将掀起童装“国际风”.

关键词：童装品牌生活馆 e4 CHIC 儿童