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重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测

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中国生物制品学杂志 2018年第6期31卷 667-670页

作者：侯慧丽王艺诺汤晓闯梁明征马杉姗韩成权北京市裸质粒基因治疗药物工程技术研究中心北京100085 北京诺思兰德生物技术股份有限公司北京100085

目的建立特异的重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用磁珠分离法提取样品中残留的CHO细胞dna,再利用Taqman探针法对样品和标准dna进行Q-PCR检测,根据标准曲线进行DNA残留量分析。对建立的... 详细信息

目的建立特异的重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用磁珠分离法提取样品中残留的CHO细胞dna,再利用Taqman探针法对样品和标准dna进行Q-PCR检测,根据标准曲线进行DNA残留量分析。对建立的方法进行专属性、准确性、重复性及中间精密度验证,并对重组人凝血因子Ⅷ原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果该方法 dna浓度在0.003~300 pg/μL范围内,线性关系良好,R2为0.999,灵敏度可达0.003 pg/μL;对大肠埃希菌dna无特异性扩增曲线,专属性良好;检测高、中、低浓度dna加标量样品的回收率分别为82.68%、71.75%和72.67%,准确性良好;重复性检测的RSD为7.02%,中间精密度检测的RSD为9.31%,重复性及精密度良好。用该方法检测的3批重组人凝血因子Ⅷ原液的DNA残留量均远低于100 pg/剂量。结论成功建立了特异的CHO细胞DNA残留量的检测方法,该方法专属性好,准确性及精密度高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。

关键词：人凝血因子Ⅷ CHO细胞 DNA残留量荧光定量PCR

地高辛探针检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的研究

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生物技术 2014年第5期24卷 80-83页

作者：汪洁卢雪梅黄演婷金小宝朱家勇广东药学院药用生物活性物质研究所广东广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的:建立检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的方法,根据此法检测3批重组肝靶向干扰素每人份剂量宿主DNA残留量。方法:以重组肝靶向干扰素工程菌基因组dna为模板,并制备探针,用此标记探针对3批重组产品进行DNA残留量检测。结果:3批次... 详细信息

目的:建立检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的方法,根据此法检测3批重组肝靶向干扰素每人份剂量宿主DNA残留量。方法:以重组肝靶向干扰素工程菌基因组dna为模板,并制备探针,用此标记探针对3批重组产品进行DNA残留量检测。结果:3批次重组肝靶向干扰素原液每人份剂量宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:地高辛标记探针斑点杂交检测DNA残留量具有特异性强,灵敏度高,重现性好,操作简单,能快速高效检定重组肝靶向干扰素原液并对其制备过程进行质量监控。

关键词：地高辛重组肝靶向干扰素斑点杂交 DNA残留量

康柏西普制品中CHO细胞DNA残留量的检测

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中国生物制品学杂志 2013年第7期26卷 1023-1026页

作者：牛冬云连炜何静邬智刚柯潇成都康弘生物科技有限公司四川成都610036

目的建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR（Q-PCR）检测方法。方法采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组dna,制备dna标准品;确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确... 详细信息

目的建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR（Q-PCR）检测方法。方法采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组dna,制备dna标准品;确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确性及精密性;用建立的方法对1003b02、1008b05、1012b09、1104b04、1108b13、1112b24批康柏西普原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果建立的标准曲线Ct值与模板dna浓度的对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.99以上;检测HUVEC、HEK293细胞的DNA残留量均无特异性扩增曲线;检测高、中、低浓度的dna标准品（105、103、101pg/ml）的平均回收率均在Q-PCR方法可接受的回收率范围（50%~200%）内,批间变异系数分别为9.3%、21.8%、26.8%;检测100pg/ml浓度的dna标准品的平均回收率为111.6%,变异系数为20.4%;康柏西普原液的DNA残留量远低于100 pg/剂量。结论已成功建立特异的CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,该方法专属性好,准确性及精密性高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。

关键词： CHO细胞 DNA残留量荧光定量PCR

地高辛标记探针检测重组人p43蛋白宿主DNA残留量的研究

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药物分析杂志 2011年第2期31卷 356-359页

作者：黄相红胡立德梁文璐谭小钉刘大涛上海信谊药厂有限公司药物研究所上海201206 复旦大学生命科学学院上海200433

目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组dna为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残留量... 详细信息

目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组dna为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法灵敏度高,特异性强,重复性好,操作安全简便,可用于重组人p43制备过程中的原液检定及质量监控。

关键词： DNA残留量地高辛重组人p43蛋白斑点杂交

Pichia酵母宿主细胞DNA残留量检测方法的建立

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河北师范大学学报（自然科学版） 2012年第1期36卷 80-83页

作者：刘晓志高健赵伟刘艳玲王志明贾茜华北制药集团新药研究开发有限责任公司河北石家庄050015 抗体药物研制国家重点实验室河北石家庄050015

为检测重组人血白蛋白中外源性DNA残留量,以宿主酵母工程菌基因组dna为模板,使用地高辛标记探针进行点杂交.结果证明:该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作安全简便,可用于重组人血白蛋白的检测.

关键词：地高辛探针 DNA残留量重组人血白蛋白

地高辛标记dna探针杂交法检测Vero细胞DNA残留量的适用性验证及应用

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微生物学免疫学进展 2016年第2期44卷 40-44页

作者：孙小慧刘晓凡赵雅静马超刘鹏冯德杰李薇魏然王革兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的对地高辛标记dna探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记dna探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫... 详细信息

目的对地高辛标记dna探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记dna探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的DNA残留量。结果地高辛标记探针的标记效率为0.1 pg。验证结果显示探针与非同源dna无杂交;最低检测限度为1 pg;探针在-20℃放置7个月后,检测灵敏度仍可达到1 pg;3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中残留dna含量均符合《中国药典》规定质量控制标准。结论地高辛标记dna探针杂交法特异性、灵敏度好,结果稳定,适用于人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。

关键词：地高辛 dna探针斑点杂交 Vero细胞 DNA残留量

荧光染色法测定生物制品中DNA残留量的研究

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海峡药学 2016年第6期28卷 66-68页

作者：王秋红郑绍红厦门特宝生物工程股份有限公司厦门361028

目的对荧光染色法测定生物制品中的DNA残留量进行初步的研究和分析,确定该方法用于dna质量控制的可行性。方法依据《中国药典》2010年版三部附录ⅨB《外源性DNA残留量测定法》之荧光染色法。结果该方法的线性、重复性、回收率均能满足... 详细信息

目的对荧光染色法测定生物制品中的DNA残留量进行初步的研究和分析,确定该方法用于dna质量控制的可行性。方法依据《中国药典》2010年版三部附录ⅨB《外源性DNA残留量测定法》之荧光染色法。结果该方法的线性、重复性、回收率均能满足生物制品中DNA残留量检测的要求,如果用作生物制品行业适用的检测方法,应制备统一的dna标准品。结论该方法具有简便、快速、可定量分析等优点,可基本满足生物制品行业对DNA残留量质量控制的要求。

关键词：荧光染色法 PicoGreen试剂 DNA残留量

地高辛标记探针检测重组RMBAYL多肽DNA残留量的研究

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药物生物技术 2009年第6期16卷 540-544页

作者：马义洪岸谢秋玲暨南大学生物工程研究所广东广州510632

为了建立标记探针检测基因重组RMBAYL多肽DNA残留量的方法,以基因重组技术和固相柱纯化技术制备重组PACAP衍生多肽RMBAYL,以工程菌总dna为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。实验结果表明,3批重组RMBAYL半成品中每人... 详细信息

为了建立标记探针检测基因重组RMBAYL多肽DNA残留量的方法,以基因重组技术和固相柱纯化技术制备重组PACAP衍生多肽RMBAYL,以工程菌总dna为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。实验结果表明,3批重组RMBAYL半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于100 Pg。研究的实验方案可实现重组PACAP衍生多肽RMBAYL的高效表达和纯化,地高辛标记探针技术检测外源性dna灵敏度高、稳定性强,可用于RMBAYL等重组PACAP衍生多肽制备过程中的质量监控及半成品的快速、高效检定。

关键词：地高辛 DNA残留量基因重组 PACAP衍生多肽

地高辛标记探针检测重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白宿主DNA残留量的研究

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中国医药生物技术 2014年第1期9卷 66-68页

作者：蔡晓娜王鹏贺晓强刘立平陈海容郭晋霞范开重庆理工大学药学与生物工程学院 400054 中国人民解放军第八十二医院内分泌中心江苏淮安223001 重庆富进生物医药有限公司 400054

重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善... 详细信息

重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善微循环，是一种有前景的心脑血管疾病治疗创新药物，

关键词：白细胞抑制因子嵌合蛋白 DNA残留量水蛭肽地高辛标记探针检测重组宿主