定量PCR法和DNA杂交法检测聚乙二醇修饰尿酸酶原液中DNA残留量的比较

作     者：霍晶晶 武小琪 郭勇 姚继鹏 张淳 HUO Jingjing;WU Xiaoqi;GUO Yong;YAO Jipeng;ZHANG Chun

作者机构：临沂大学药学院山东临沂276000 

出 版 物：《中国现代应用药学》 (Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy)

年 卷 期：2022年第39卷第14期

页      面：1868-1873页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100704[医学-药物分析学] 10[医学] 

基　　金：山东省重点研发计划(2018GSF121017) 日照市科技创新专项(2019CXZX1205) 大学生创新创业训练计划项目(X202110452211)。 

主　　题：DNA残留量 定量PCR法 探针杂交法 PEG修饰尿酸酶 

摘      要：目的建立快速准确的聚乙二醇修饰重组尿酸酶(PEGylated uricase,PEG-UHC)原液DNA残留量测定法,为其他多位点PEG修饰蛋白药物的DNA残留量检测提供参考。方法参照中国药典2020年版三部“外源性DNA残留量检测法第一法DNA探针杂交法和第三法定量PCR法,检测PEG-UHC原液DNA残留量;对定量PCR法进行检测限度、线性范围、准确度和精密度等方法学验证;进行3批次PEG-UHC原液DNA残留量测定。结果探针杂交法DNA残留量测定线性范围为1×10^(-4)~0.1 ng·μL^(-1),3批次PEG-UHC原液未见明显显色,DNA残留量均低于每剂10 ng。PCR法检测限度为1×10^(-5) ng·μL^(-1),DNA浓度在1×10^(-4)~100 ng·μL^(-1)内线性关系良好(R^(2)=0.999)。不同浓度的标准DNA在PEG-UHC原液中的回收率范围为92.57%~114.17%,表明PEG偶联物对定量PCR影响较小。3批次PEG-UHC原液中DNA残留量分别为每剂0.143,0.187,0.154 ng,符合国家药品监督管理局限量要求。结论DNA探针杂交法为传统定性检测,耗时较长,准确度较低。定量PCR法操作简便快速、灵敏度高,且可定量分析,适于PEG-UHC等多位点PEG修饰蛋白药物DNA残留量测定。