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针刺“大椎-身柱”对穴通过dek激活PI3K/AKT通路干预过敏性哮喘大鼠上皮间质转化的研究

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针刺研究 2024年

作者：苗镡允吕玉娥吉美奇尹浩吴涵胡志祥翟春涛李蕾山西中医药大学山西省针灸医院

目的：观察针刺对穴“大椎-身柱”对过敏性哮喘（AA）大鼠dek/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)通路及上皮间质转化相关因子表达的影响，探讨针刺治疗AA的潜在机制。方法：60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、对穴组、地塞米松... 详细信息

目的：观察针刺对穴“大椎-身柱”对过敏性哮喘（AA）大鼠dek/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)通路及上皮间质转化相关因子表达的影响，探讨针刺治疗AA的潜在机制。方法：60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、对穴组、地塞米松组、假针组，每组12只。通过腹腔注射及雾化吸入卵清蛋白（OVA）制备AA模型。对穴组大鼠予针刺对穴“大椎-身柱”，留针20 min，每日1次，连续14 d；地塞米松组大鼠腹腔注射0.5 mg/kg地塞米松溶液，每日1次，连续14 d；假针组针刺非经非穴点，操作同对穴组。干预结束后，HE染色法观察大鼠肺组织病理形态改变；ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素（IL）-4、IL-5及血清免疫球蛋白IgE、IgM水平；Western blot法检测大鼠肺组织中dek、磷酸化（P）磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、钙黏蛋白E(E-cadherin)蛋白相对表达量；免疫荧光染色法检测大鼠肺组织中dek、p-PI3K、p-AKT、E-cadherin阳性表达。结果：与空白组比较，模型组和假针组大鼠肺组织支气管壁增厚，炎性细胞浸润增多；对穴组及地塞米松组支气管壁增厚减少，炎性细胞浸润程度降低。与空白组比较，模型组BALF中IL-4、IL-5及血清IgE、IgM水平显著升高（Pdek、pPI3K、p-AKT蛋白表达量升高（Pdek、p-PI3K和p-AKT阳性表达水平升高（Pdek、p-PI3K、p-AKT蛋白表达量降低（Pdek、p-PI3K阳性表达水平降低（Pdek表达，抑制PI3K/AKT激活，延缓上皮间质转化进程，从而改善大鼠的过敏性哮喘。

关键词：针刺过敏性哮喘上皮间质转化 dek 磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B

dek、Wnt-1、GSK-3β在宫颈鳞状细胞癌中的表达和意义

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医学信息 2024年第3期37卷 114-117页

作者：曹江杨麦青葛莉乔海燕高利利张庆军潍坊市中医院妇产科潍坊市人民医院病理科潍坊市中医院脑病科

目的观察宫颈鳞状细胞癌组织中dek、Wnt-1、GSK-3β的表达变化，探讨dek、Wnt-1、GSK-3β在宫颈鳞状细胞癌中的临床病理意义。方法选取2016年1月-2021年12月于潍坊市中医院确诊宫颈鳞状细胞癌的患者100例，并选取癌旁周围的鳞状上皮... 详细信息

目的观察宫颈鳞状细胞癌组织中dek、Wnt-1、GSK-3β的表达变化，探讨dek、Wnt-1、GSK-3β在宫颈鳞状细胞癌中的临床病理意义。方法选取2016年1月-2021年12月于潍坊市中医院确诊宫颈鳞状细胞癌的患者100例，并选取癌旁周围的鳞状上皮组织当作对照。采用免疫组织化学方法观察组织中dek、Wnt-1、GSK-3β蛋白的表达，并探讨dek、Wnt-1、GSK-3β与临床病理参数的关系，以及dek与Wnt-1、GSK-3β的相关性。结果与正常宫颈鳞状上皮组织比较，dek、Wnt-1在宫颈鳞状细胞癌组织中高表达，GSK-3β低表达；dek、Wnt-1高表达及GSK-3β低表达与肿瘤的低分化、淋巴结转移、高TNM分期有关（Pdek与Wnt-1呈正相关（r=0.304,P=0.001），与GSK-3β呈负相关（r=-0.289,P=0.002）。结论宫颈鳞状细胞癌组织中dek、Wnt-1表达升高，而GSK-3β表达降低，且dek与Wnt-1、GSK-3β密切相关，其表达异常参与了宫颈鳞状细胞癌的发生、发展。

关键词：宫颈鳞状细胞癌 dek Wnt-1 GSK-3β

宫颈癌组织中dek与MMP-7、N-cadherin的表达及临床意义

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医学信息 2024年第2期37卷 95-98页

作者：曹江杨麦青葛莉乔海燕高利利张庆军潍坊市中医院妇产科潍坊市人民医院病理科潍坊市中医院脑病科

目的观察宫颈癌组织中dek与MMP-7、N-cadherin的表达情况，并探讨其在宫颈癌的临床意义。方法收集2016年1月-2021年12月在潍坊市中医院手术切除，并经病理确诊为宫颈鳞状细胞癌组织80例，选取癌旁正常宫颈组织标本50例，采用免疫组化... 详细信息

目的观察宫颈癌组织中dek与MMP-7、N-cadherin的表达情况，并探讨其在宫颈癌的临床意义。方法收集2016年1月-2021年12月在潍坊市中医院手术切除，并经病理确诊为宫颈鳞状细胞癌组织80例，选取癌旁正常宫颈组织标本50例，采用免疫组化法检测两组中dek与MMP-7、N-caherin蛋白的表达情况，分析三者与宫颈癌临床病理特征的关系，并进一步分析三种蛋白在宫颈癌中表达的相关性。结果 dek、MMP-7、N-cadherin在宫颈癌组织中的表达高于癌旁正常宫颈组织（Pdek与MMP-7、N-caherin的高表达与宫颈癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关（P0.05）。宫颈癌中dek的表达分别与MMP-7(r=0.269,P=0.008)、N-caherin(r=0.295,P=0.004)的表达呈正相关。结论 dek与宫颈癌的发生有关，且与宫颈癌的组织分化及浸润转移有关，其在宫颈癌中的作用机制可能与MMP-7、N-caherin有关。

关键词：宫颈癌 dek MMP-7 N-cadherin

靶向dek适配体DTA-64可通过阻断TGF-β1信号通路抑制支气管哮喘小鼠气道上皮细胞的上皮间质转化

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第2期38卷 103-109页

作者：宋艺兰王知广姜京植朴艺花李莉徐畅朴红梅李良昌延光海吉林省过敏性常见疾病免疫与靶向研究重点实验室吉林延吉133002 延边大学医学院解剖学教研室吉林延吉133002 延边大学附属医院博士后工作站吉林延吉133000 延边大学附属医院呼吸内科吉林延吉133000 延边大学附属医院重症医学科吉林延吉133000

目的本研究旨在探讨靶向dek适配体64(DTA-64)对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道炎症和EMT的抑制作用。方法选取雌性BALB/c小鼠32只(8周龄),随机分为PBS组、 OVA模型组、 DTA-64组(1μg/只)和对照适配体组,每组8只。肺组织HE染色检测... 详细信息

目的本研究旨在探讨靶向dek适配体64(DTA-64)对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道炎症和EMT的抑制作用。方法选取雌性BALB/c小鼠32只(8周龄),随机分为PBS组、 OVA模型组、 DTA-64组(1μg/只)和对照适配体组,每组8只。肺组织HE染色检测气道周围炎性细胞浸润,免疫组织化学染色检测气道周围dek表达;ELISA检测血清IgE以及支气管肺泡灌洗液(BALF)的2型辅助T(Th2)细胞因子白细胞介素4(IL-4)、 IL-5、 IL-13以及Th1细胞因子γ干扰素(IFN-γ)水平。Western blot法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、兔抗锌指转录因子(Snail+Slug)、波形蛋白(vimentin)和上皮钙黏素(E-cadherin)相关蛋白以及转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的蛋白表达;流式细胞术检测肺单细胞悬液中α-SMA,探讨DTA-64对哮喘EMT和气道重塑中的作用机制。结果 dek蛋白在哮喘模型小鼠肺组织高表达,在DTA-64组中低表达;DTA-64能够降低气道周围嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的浸润,下调血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、 IL-5、 IL-13水平,上调IFN-γ水平;DTA-64还能降低肺组织vimentin、α-SMA、 Snail+Slug表达,上调上皮标志物E-cadherin表达;DTA-64能抑制TGF-β1及其下游经典通路Smad2/3、 Smad4表达,以及非经典通路ERK1/2、 p38 MAPK、 JNK和PI3K/AKT/mTOR的磷酸化水平。结论 DTA-64可能通过阻断TGF-β1/Smad、 MAPK、 PI3K信号通路抑制OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症和EMT的进程,从而抑制哮喘气道重塑。

关键词： dek 上皮间质转化气道重塑支气管哮喘卵清蛋白(OVA)

Progress in studies on the dek protein and its involvement in cellular apoptosis

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Science China(Life Sciences) 2009年第7期52卷 637-642页

作者： HUA Ying,HU HongGang & PENG XiangLei College of Life Sciences and Bioengineering,School of Science,Beijing Jiaotong University,Beijing 100044,China College of Life Sciences and Bioengineering School of Science Beijing Jiaotong University Beijing China

dek protein is an ubiquitous phosphorylated nuclear protein.Specific binding of dek to DNA could change the topology of DNA and then affect the gene activity of the underlying DNA sequences.It is speculated that there might be some potential relationship between the stress reaction of cells and dek proteins.The phosphorylation status of dek protein is altered during death-receptor-mediated cell apoptosis.Both phosphorylation and poly(ADP-ribosyl)ation could promote the release of dek from apoptotic nuclei to extracellular environment,and in this case dek becomes a potential autoantigen of some autoimmune diseases.The available evidence powerfully suggests that dek protein is closely relevant to apoptosis.The overexpression of dek protein has dual function in cell apoptosis,in terms of inhibiting or triggering cell apoptosis.

关键词： dek cell apoptosis phosphorylation poly(ADP-ribosyl)ation p53 caspase

靶向dek适配体对急性肺损伤的保护作用研究

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免疫学杂志 2022年第10期38卷 862-868,875页

作者：宋艺兰白巧云韩雪马小斐王丹丹朴红梅李良昌延光海吉林省过敏性常见疾病免疫与靶向研究重点实验室延吉133002 延边大学医学院解剖学教研室延吉133002 延边大学医学院附属医院呼吸内科延吉133002

目的本研究旨在探讨靶向dek适配体DTA-64在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)中的保护作用。方法将雌性Balb/c小鼠,随机分为4组,PBS组、LPS诱导的ALI模型组、LPS+对照适配体组和LPS+DTA 64干预组,每组8只。通过HE染色观察肺组织病... 详细信息

目的本研究旨在探讨靶向dek适配体DTA-64在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)中的保护作用。方法将雌性Balb/c小鼠,随机分为4组,PBS组、LPS诱导的ALI模型组、LPS+对照适配体组和LPS+DTA 64干预组,每组8只。通过HE染色观察肺组织病理改变;ELISA和流式细胞术检测血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)的TNF-α,IL-1β表达;采用Western blot法检测GSK-3β/β-catenin和HIF1-α/MMP-9信号通路表达,探讨DTA-64在急性肺损伤中的作用机制。结果dek蛋白在ALI模型鼠肺组织中表达增强,在DTA-64治疗组中表达降低;DTA-64能够降低肺组织中炎性细胞浸润,下调肺组织损伤病理评分和肺湿/干质量比、炎性细胞数量以及MPO在肺组织中的表达和活性;DTA-64还能降低血清、BALF和纵膈淋巴结中TNF-α和IL-1β水平;DTA-64下调磷酸化GSK-3β表达、β-catenin、CyclinD1、C-Jun、C-Myc、HIF1-α、VEGF、MMP-9和MMP-2表达。结论DTA-64可能通过GSK-3β/β-catenin和HIF1-α/MMP-9信号通路抑制LPS诱导的ALI小鼠肺部炎症细胞聚集和病理损伤。这有望成为临床治疗ALI的新的靶点。

关键词： dek 适配体 DTA-64 急性肺损伤

The potential role of dek over-expression in the radiation response of head and neck cancer

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Radiation Medicine and Protection 2021年第1期2卷 28-32页

作者： Hui Xiao Bismarck Odei Steven K.Clinton Darrion L.Mitchell Department of Radiation Oncology The Ohio State UniversityOH43210USA The Ohio State University Comprehensive Cancer Center The Ohio State UniversityOH43210USA Division of Medical Oncology Department of Internal MedicineThe Ohio State UniversityOH43221USA

Objective:To determine if dek over-expression is associated with radiation resistance in HPV positive head and neck cancer cells.Methods:Control and dek over-expressing keratinocytes and an HPV positive head and neck cancer cell line respectively were irradiated with 2–10 Gy and the impact on cell survival,γ-H2AX(a marker of DNA damage)and RAD51(homologous recombination)were analyzed via clonogenic assays,and immunofluorescence measurements respectively.Results:Upon exposure to increasing doses of radiation,dek over-expression in keratinocytes at 2,4(Pdek over-expressing cell lines relative to their respective control cells at all times points(Pdek over-expression contributes to radio-resistance in HPV positive head and neck cancer cells,potentially by improving repair of DNA double strand breaks through homologous recombination.The molecular mechanisms and relevance to in vivo responses needs further investigation.

关键词： HPV Oropharynx Radiation dek

基于分子动力学模拟的类风湿性关节炎相关蛋白的适配体研究与设计

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基于分子动力学模拟的类风湿性关节炎相关蛋白的适配体研究与设计

作者：代丽君郑州大学

学位级别：硕士

类风湿性关节炎是一种以滑膜炎症为主要特征的自身免疫疾病,发病机制十分复杂,由多种炎症因子和信号通路介导,涉及靶点较多,如染色质相关蛋白(dek)和肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)等。而核酸适配体药物具有高特异性、高亲和力等优点,在治疗... 详细信息

类风湿性关节炎是一种以滑膜炎症为主要特征的自身免疫疾病,发病机制十分复杂,由多种炎症因子和信号通路介导,涉及靶点较多,如染色质相关蛋白(dek)和肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)等。而核酸适配体药物具有高特异性、高亲和力等优点,在治疗类风湿性关节炎方面发挥了独特优势。本研究基于现有的核酸适配体,以dek和TNFR1为靶点,利用分子动力学模拟技术,从微观原子水平探索了不同靶蛋白与其适配体的相互作用机制,确定了参与相互作用的重要氨基酸,考察了各适配体的结构变化,并基于结构和机制研究,对适配体进行设计与改造,发现了稳定性与亲和力均有较大提升的突变体。dek靶向适配体(DTA)具有较强的抗炎能力,但较差的体内稳定性限制了其临床应用。研究发现,这一局限性可通过甲氧基修饰得到明显改善。因此,本研究首先通过结构预测,由一级序列获得甲氧基修饰前后适配体(DTA和DTA＿OMe)的三级结构。然后利用分子对接技术,得到各适配体与dek的N端(dek＿N)和C端蛋白(dek＿C)的复合物模型。最后建立DNA甲氧基化力场参数,利用Amber18软件执行分子动力学模拟,并通过变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物膜干涉技术对模拟结果进行验证。计算和实验结果表明,DTA经甲氧基修饰后,稳定性得到明显提高,但对dek＿N和dek＿C的亲和力却有所下降。为了解决该问题,本研究通过氢键网络分析,对形成特异性氢键的碱基进行虚拟突变,发现将DTA＿OMe上的29位碱基由胞嘧啶突变为胸腺嘧啶后,可明显提高DTA＿OMe对dek＿N的亲和力与稳定性。针对TNFR1靶蛋白,选取本课题组前期筛选获得的Apt1-67和Apt2-55适配体。同样通过结构预测由一级序列获得其三级结构,然后使用HDOCK进行分子对接,并利用分子动力学模拟技术研究不同适配体与靶蛋白的相互作用机制,为TNFR1特异性抑制剂的设计提供理论基础。研究发现,在动力学模拟过程中,由于Apt1-67的结构波动较大,进而诱导TNFR1的结构发生变化,使蛋白的整体紧密度下降。且Apt1-67的5’端缠绕于TNFR1的CRD1上,使该结构域的氨基酸运动幅度减小。此外,通过能量分解发现,Arg57、Lys63、Lys81、Lys119是Apt1-67和Apt2-55与靶蛋白结合时的重要氨基酸。最后,通过评估各适配体在亲和力与特异性上的差异,发现Apt1-67对TNFR1亲和力更高,而Apt2-55与该蛋白形成的特异性氢键更多,选择性更强。本研究将传统的适配体筛选方法与分子动力学模拟相结合,从探索结合机制出发,揭示了dek和TNFR1与其适配体的作用位点,为设计特异性强,稳定性高的核酸适配体提供了理论基础。

关键词：分子动力学模拟适配体设计 dek TNFR1 相互作用机制甲氧基修饰

dek基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其对肝癌细胞生物学行为的影响

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中华肝脏病杂志 2020年第10期28卷 868-875页

作者：李术华侯宇陈哲吴韦铷吴传新孙航重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学附属第二医院感染科400010 陆军军医大学第一附属医院重庆400010 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科 400010

目的构建dek基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,并探讨其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法采用RNAi技术,根据dek基因的干扰序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到酶切后的小干扰RNA表达载体pLKO.1上,构建重组慢病毒载体pLKO.... 详细信息

目的构建dek基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,并探讨其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法采用RNAi技术,根据dek基因的干扰序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到酶切后的小干扰RNA表达载体pLKO.1上,构建重组慢病毒载体pLKO.1-sh hdek,经293T细胞包装,收集病毒上清液,感染细胞。采用实时逆转录PCR(RT-PCR)和免疫蛋白印迹法(Western blot)检测人肝癌细胞Bel-7402、Huh-7、SMMC-7721和HepG2中dek的表达及感染慢病毒的各组细胞中dek的敲低效率。分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)增殖实验、流式细胞术、划痕实验检测细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡及迁移能力。两组间均数比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。结果酶切鉴定和DNA测序结果证实,重组慢病毒载体pLKO.1-sh hdek1及pLKO.1-sh hdek3构建成功。RT-PCR和Western blot结果显示,肝癌细胞Bel-7402和Huh7中dek的表达较高,pLKO.1-sh hdek3能更有效地抑制dek基因的表达(Pdek3重组慢病毒感染肝癌细胞Bel-7402和Huh7进行后续的功能实验。CCK8细胞增殖实验结果显示肝癌细胞Bel-7402和Huh7感染重组慢病毒后,细胞增殖能力与空白对照及阴性对照相比减弱(Pdek的表达,能够抑制细胞增殖及迁移能力,并诱导凋亡,为进一步研究dek基因在肝癌中的作用奠定基础。

关键词：细胞增殖细胞凋亡细胞迁移 dek RNA干扰慢病毒载体