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薄芝糖肽对肝癌大鼠的T淋巴细胞亚群和DC细胞的影响研究

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免疫学杂志 2018年第10期34卷 836-842页

作者：何敏侯延丽牛育鸿白宝平岳鹏莹延安大学西安创新学院西安710010

目的探讨薄芝糖肽对肝癌大鼠的T淋巴细胞亚群和DC细胞的影响。方法取43只大鼠,其中3只用于制备癌性腹水,另32只注射癌性腹水建立肝癌模型后随机分为模型组及低、中、高剂量组,其余8只为健康组。3剂量组每天腹腔注射50、100、200 mg/L的... 详细信息

目的探讨薄芝糖肽对肝癌大鼠的T淋巴细胞亚群和DC细胞的影响。方法取43只大鼠,其中3只用于制备癌性腹水,另32只注射癌性腹水建立肝癌模型后随机分为模型组及低、中、高剂量组,其余8只为健康组。3剂量组每天腹腔注射50、100、200 mg/L的薄芝糖肽溶液,健康组及模型组注射等量无菌生理盐水。15 d后检测并对比各组T淋巴细胞亚群CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+水平及DC细胞表面协同刺激分子CD80^+、CD86^+、MHC-Ⅱ阳性表达率、IL-2、IL-10水平,对比各剂量组抑瘤率。结果 CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平及CD80^+、CD86^+、MHC-Ⅱ阳性表达率及血清IL-2含量组间比较,健康组最高、中剂量组其次、低、高剂量组稍低、模型组最低,除低、高剂量组相比差异不显著(P>0.05),其他每2组间比较差异均显著(P0.05),其他每2组间比较差异均显著(P0.05)。结论薄芝糖肽通过调节T淋巴细胞亚群及DC细胞表面标志物表达,增强机体T细胞免疫功能,促进DC细胞成熟,从而增强机体免疫力,达到良好的辅助抗肿瘤效果,其中100 mg/L薄芝糖肽增强机体免疫力、辅助抗肿瘤效果最佳。

关键词：薄芝糖肽肝癌 T淋巴细胞亚群 DC细胞

放射治疗对肺癌患者外周血中DC细胞和相关免疫细胞因子影响的研究

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放射治疗对肺癌患者外周血中DC细胞和相关免疫细胞因子影响的研究

作者：李文鑫承德医学院

学位级别：硕士

目的:探讨放射治疗对肺癌患者免疫功能的影响,分析放疗前后肺癌患者外周血中DC细胞及IFN-r、TNF-a、NKG2D、HMGB-1的动态变化情况,分析DC细胞与IFN-r、TNF-a、NKG2D、HMGB-1之间的相互关系。方法:对承德医学院附属医院肿瘤科2017年6月至... 详细信息

目的:探讨放射治疗对肺癌患者免疫功能的影响,分析放疗前后肺癌患者外周血中DC细胞及IFN-r、TNF-a、NKG2D、HMGB-1的动态变化情况,分析DC细胞与IFN-r、TNF-a、NKG2D、HMGB-1之间的相互关系。方法:对承德医学院附属医院肿瘤科2017年6月至2018年1月经病理学或细胞学诊断的肺癌住院患者进行筛选,选择符合标准的30例肺癌患者,所有患者均应用医科达直线加速器,采用调强放射治疗（IMRT）,Dt60Gy,2Gy\次,5次\周。收集入组患者放疗前1周、放疗后2周、4周、6周空腹静脉血,放入-80℃冰箱保存,采用ELISA检测IFN-r、TNF-a、NKG2D和HMGB-1的浓度,免疫磁珠法检测DC细胞计数、活DC细胞数、dc凋亡细胞数和DC细胞活性。使用SPSS19.0统计软件,计量资料用均数±标准差表示,分析方法采用重复测量设计的方差分析,比较患者放疗不同时间点上所测指标的变化情况;DC细胞与IFN-r、TNF-a、NKG2D、HMGB-1之间进行了person相关性分析。以a=0.05作为检验标准,P≤0.05差异有统计学意义。结果:1放疗前后肺癌患者血清中IFN-r、TNF-a、HMGB1、NKG2D浓度的变化IFN-r的浓度于放疗后2周、4周、6周逐渐升高,F=961.32,P＜0.001;TNF-a、HMGB1、NKG2D的浓度于放疗后2周、4周、6周逐渐下降,F值分别为734.85、480.74、348.75,P值均P＜0.001。2放疗前后肺癌患者血清中DC细胞计数的变化DC细胞计数于放疗后2周、4周、6周逐渐升高,F=8.53,P＜0.001。3放疗前后肺癌患者血清中活DC细胞数的变化活DC细胞数呈先升高后降低趋势,放疗后4周时最高,放疗后6周时下降,放疗后4周与放疗前1周、放疗后6周比较F=6.88,P＜0.05。4放疗前后肺癌患者血清中dc凋亡细胞数的变化dc凋亡细胞数变化无明显规律,放疗后4周时最高,放疗后6周与放疗前1周、放疗后2周、放疗后4周比较F=3.68,P=0.015。5放疗前后肺癌患者血清中DC细胞活性的变化DC细胞活性差异无统计学意义,F=0.839,P=0.476。6 DC细胞与IFN-r、TNF-a、HMGB1、NKG2D相关性Pearson相系数分别为0.005、0.100、-0.204、0.105、-0.198,P值分别为0.979、0.600、0.281、0.580、0.294。结论:1放射治疗可提高肺癌患者血清中INF-r的水平,降低TNF-a、HMGB-1、NKG2D的水平,进而激活细胞免疫功能。2放射治疗可使肺癌患者外周血中的DC细胞水平逐渐升高,促进其肿瘤抗原提呈作用。3放射治疗对肺癌患者外周血中DC细胞的活性无影响,外周血中DC细胞与细胞因子（INF-r、TNF-a、HMGB-1、NKG2D）之间无相关性。

关键词：肺癌放射治疗 DC细胞 TNF-a IFN-r NKG2D HMGB-1 免疫功能

慢性乙型肝炎患者外周血Treg细胞对DC细胞的抑制作用

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中国现代医学杂志 2015年第13期25卷 24-29页

作者：韩际奥马应杰王志凌韩莉王勇郑州人民医院消化内科河南郑州450003 郑州市消化疾病研究所河南郑州450003

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血中Treg细胞的比例,并探讨其对DC细胞的免疫抑制作用。方法抽取慢性乙型肝炎(CHB)患者和正常对照组的外周血,流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的比例以及DC细胞表面CD80和人白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)的... 详细信息

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血中Treg细胞的比例,并探讨其对DC细胞的免疫抑制作用。方法抽取慢性乙型肝炎(CHB)患者和正常对照组的外周血,流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的比例以及DC细胞表面CD80和人白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)的表达;在dc培养的不同时间内加入不同比例CHB患者的Treg细胞,检测dc对淋巴细胞增殖功能的影响;检测dc培养的不同时间内加入不同比例CHB患者的Treg细胞后培养上清中细胞因子白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤转化因子-β(TGF-β)的表达。结果正常人外周血中Treg(CD4+CD25+Foxp3+)细胞的比例为(4.12±1.36)%,CHB患者外周血中Treg细胞的比例为(10.54±3.27)%,CHB患者外周血中的Treg细胞比例明显高于正常组,差异有统计学意义;CHB患者表面分子CD80的表达为(60.12±5.23)%,HLA-DR的表达为(61.21±4.28)%;而正常组的CD80的表达为(84.13±4.33)%,HLA-DR的表达为(86.57±3.82)%,CHB患者DC细胞表面分子CD80和HLA-DR的表达均显著低于正常组,差异有统计学意义;经Treg细胞处理后,DC细胞刺激淋巴细胞的增殖能力下降,淋巴细胞增殖的抑制率较正常组均显著升高;Treg细胞与DC细胞比例为1∶1、1∶10以及1∶100时,IL-10和TGF-β的表达均显著高于正常组,并且随着Treg细胞的比例增高,细胞因子的水平也相应增高,差异有统计学意义。结论 CHB患者外周血中Treg细胞比例增高,可能是通过诱导IL-10和TGF-β的表达抑制DC细胞的免疫功能。

关键词：慢性乙型肝炎 Treg细胞 DC细胞白细胞介素-10 肿瘤转化因子-β

CIK联合DC细胞免疫治疗转移性乳腺癌的临床价值及可行性研究

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中国妇幼保健 2014年第31期29卷 5180-5182页

作者：沈艳丽河南省南阳市中心医院肿瘤二病区 473009

目的:分析CIK联合DC细胞免疫治疗转移性乳腺癌的临床价值及可行性。方法:将150例转移性乳腺癌患者随机分为两组,对照组75例患者采用单纯化疗,应用表阿霉素和紫杉醇化疗方案,并应用激素来控制超敏反应的发生;实验组75例患者除单纯化疗外... 详细信息

目的:分析CIK联合DC细胞免疫治疗转移性乳腺癌的临床价值及可行性。方法:将150例转移性乳腺癌患者随机分为两组,对照组75例患者采用单纯化疗,应用表阿霉素和紫杉醇化疗方案,并应用激素来控制超敏反应的发生;实验组75例患者除单纯化疗外,应用CIK联合DC细胞免疫治疗,经过数疗程化疗后比较两组患者的临床疗效及CD3细胞、CD3/CD4细胞、CD3/CD8细胞及NK细胞在化疗前后的变化。结果:实验组患者化疗后CD3细胞为62.53±10.72,明显高于对照组的43.27±11.29;CD3/CD4细胞为42.35±9.17,明显高于对照组的26.81±10.32;CD3/CD8细胞为23.18±6.94,明显低于对照组的31.25±8.37;NK细胞为28.64±7.15,明显高于对照组的14.96±6.82;总有效率为72.0%,明显高于对照组的58.67%,两组差异均有统计学意义(PDC细胞免疫治疗转移性乳腺癌可以明显提高患者的免疫力并提高临床疗效,具有可行性。

关键词： CIK细胞 DC细胞联合乳腺癌

自体dc-CIK细胞联合培美曲塞治疗老年非小细胞肺癌的疗效与安全性

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中国免疫学杂志 2012年第7期28卷 648-651,656页

作者：彭大为李建旺元建华刘英平于伟玲孟娟罗洁海口市人民医院(中南大学湘雅医学院附属海口医院)肿瘤科海口570208

目的:观察晚期老年非小细胞肺癌患者行自体细胞因子诱导的树突细胞(dc)及杀伤细胞(CIK细胞)联合培美曲塞二钠治疗的临床疗效及毒副反应。方法:经病理学或细胞学确诊的老年(65～79岁)晚期ⅢA～Ⅳ期非小细胞肺癌47例,24例联合治疗组患者... 详细信息

目的:观察晚期老年非小细胞肺癌患者行自体细胞因子诱导的树突细胞(dc)及杀伤细胞(CIK细胞)联合培美曲塞二钠治疗的临床疗效及毒副反应。方法:经病理学或细胞学确诊的老年(65～79岁)晚期ⅢA～Ⅳ期非小细胞肺癌47例,24例联合治疗组患者应用自体外周血进行CIK细胞及DC细胞扩增,并应用流式细胞术检测其CIK/dc-CIK表型,然后采取静脉回输方法,进行自体CIK细胞及DC细胞联合培美曲塞二钠500 mg/m2治疗,静脉滴注,第1天;23例单纯化疗组患者接受培美曲塞二钠单药500 mg/m2治疗,静脉滴注,第1天。21天为1个周期,接受2个周期以上化疗,每2个周期评估疗效、不良反应。结果:联合治疗组和单纯化疗组临床获益率(疾病控制率)分别是66.67%和56.52%(P0.05),1年生存率分别是27.6%和25.4%(P>0.05)。两组主要的毒副反应是骨髓抑制和胃肠道反应以及乏力,其中联合治疗组中性粒细胞降低发生率明显低于单纯化疗组(Ⅰ～Ⅱ度:9.05%vs 19.09%,P细胞肺癌疗效均较好,但联合治疗组具有更好的临床获益及更少的不良反应,并且具有更高的生存质量。

关键词：非小细胞肺癌培美曲塞二钠 CIK细胞 DC细胞过继免疫疗法

全葡聚糖颗粒对dc诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响

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免疫学杂志 2020年第6期36卷 504-509页

作者：谢叶文宁永玲潘洁陈洁戚春建南京医科大学附属常州市第二人民医院中心实验室常州213164

目的研究全葡聚糖颗粒(whole glucan particle,WGP)对dc诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMdc)。用MACS磁珠分选法对OT-Ⅱ小鼠的脾脏和淋巴结中C... 详细信息

目的研究全葡聚糖颗粒(whole glucan particle,WGP)对dc诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMdc)。用MACS磁珠分选法对OT-Ⅱ小鼠的脾脏和淋巴结中CD4^+T细胞进行纯化,加入特异性抗原卵清蛋白(OVA),与dc共培养。实验分组为:CON组、WGP组、TGP-β组、WGP+TGF-β组,培养5 d后,利用流式细胞术(FCM)检测各组中CD4^+T细胞增殖和Th17细胞变化情况,ELISA检测各组细胞上清液中IL-17A的含量,Q-PCR检测各组细胞中Th17细胞核转录因子维甲酸孤儿受体-γt(retinoid-related orphan receptor-γt,ROR-γt)mRNA表达水平。结果TGF-β可以促进dc诱导CD4^+T细胞向Th17分化,而经WGP激发后,T细胞显著下调ROR-γt的转录水平,并减少对IL-17A的分泌。结论WGP显著抑制TGF-β诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化。

关键词：全葡聚糖颗粒 DC细胞转化生长因子-β Th17细胞

核蛋白PCNP对小鼠DC细胞迁移与增殖能力的影响

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核蛋白PCNP对小鼠DC细胞迁移与增殖能力的影响

作者：郑小丽河南大学

学位级别：硕士

背景PCNP（PEST-Containing Nuclear Protein）是于2002年新发现的一种含有PEST序列的核蛋白,它是泛素连接酶NIRF（Np95/ICBP90-like RING Figer Protein）的底物。NIRF包含类泛素化区域（a ubiquitin-like domain）,YDG/SRA区域（a YDG/SRA domain）,PHD区域（a PHD domain）和指环状区域（a RING domain）等四个区域,研究发现NIRF在正常细胞增殖期间呈现高表达,而在G0/G1期间呈现低表达。核蛋白PCNP包含的PEST序列中含有丰富的脯氨酸（P）、谷氨酸（E）、丝氨酸（S）和苏氨酸（T）,是短寿命蛋白。而含有PEST序列的功能蛋白质通常是通过水解途径调控,且大多数是通过泛素介导途径降解。NIRF本身具有泛素连接酶的特征,且其自身具有自动泛素酶的活性。泛素依赖性蛋白的降解可以调节依靠泛素化途径的多种细胞周期的过程,目前研究证实,这些过程包括细胞的周期进程、蛋白质的运输、DNA的损伤和变异。NIRF泛素连接酶与被降解蛋白质的特异性底物PCNP结合,进而影响泛素化反应的功能与效率。例如核蛋白PCNP在293T细胞和COS-7细胞中是很容易被泛素化,在体内或体外NIRF都能够把PCNP泛素化。这说明NIRF与PCNP信号轴可能通过对细胞周期的调控而对细胞增殖发挥一定的调节作用。同时研究表明,在很多肿瘤细胞基因中NIRF在9p23-24.1段基因出现的频繁明显高于正常细胞,推测PCNP和NIRF可能也与肿瘤发生有一定的关系。树突状细胞（Dendritic Cells dc）是目前确定的唯一能激活初始T细胞的专职抗原递呈细胞,能高效地摄取加工、处理、递呈抗原,dc数量极少,仅占单核细胞的1%,未成熟迁移能力强。微量的LPS就能刺激dc合成与释放细胞因子（TNF-α）。本课题组前期研究发现,小鼠脾脏中CD8α+DC细胞中PCNP的m RNA水平高表达。前期结果显示沉默PCNP能抑制dc增殖。目前在DC细胞中对PCNP的研究尚未报道。本课题初步探讨了核蛋白PCNP在dcs中的作用及其分子机制。目的1、探索PCNP过表达和沉默对DC细胞生物学功能的影响。2、探讨LPS和蛋白酶体抑制剂“MG-132”对PCNP过表达和沉默后的DC细胞生物学功能的影响。方法1、dc2.4细胞对照（未处理）组:用流式细胞仪,检测dc-PCNP-Flag、dc-sh-PCNP及其相应对照组稳定株的表面分子MHC II及共刺激分子CD80、CD86的表达。用Transwell小室和细胞划痕实验,研究PCNP过表达与沉默后对DC细胞迁移的影响。用平板克隆实验,研究PCNP沉默和过表达后对DC细胞克隆形成能力的影响。2、实验组:在dc2.4细胞中分别加入LPS和蛋白酶体抑制剂（MG-132）;检测对DC细胞形态、迁移、克隆形成能力的影响。结果1、成功建立PCNP-Flag及PCNP-EGFP过表达稳定株。2、成功筛选得到过表达稳定株dc-Flag（对照组）、dc-PCNP-Flag、dc-EGFP（对照组）、dc-PCNP-EGFP;沉默稳定株dc-RNAi-NC（Negative Control NC）和dc-sh-PCNP稳定株。3、dc-PCNP-Flag稳定株与对照组相比,细胞形态无明显变化;dc-sh-PCNP稳定株与对照组相比,细胞形态也无明显变化。4、经流式检测,dc-PCNP-Flag稳定株与对照组相比,其表面分子MHC II和共刺激分子CD80、CD86的表达量均无统计学意义;而dc-sh-PCNP稳定株与对照组相比,其表面共刺激分子CD80、CD86的表达量也均无统计学意义;其各自的表面分子MHC II均无明显变化。5、经细胞迁移实验（细胞划痕和Transwell小室实验）发现PCNP过表达组（dc-PCNP-Flag）dc2.4稳定株与对照组细胞相比,其迁移能力下降（P﹤0.05）,而PCNP沉默组（dc-sh-PCNP）稳定株与对照组相比,其迁移能力增强（P﹤0.01）。6、平板克隆实验,证明PCNP沉默后在DC细胞中抑制克隆形成能力（P﹤0.05）,而PCNP过表达后能促进DC细胞的克隆形成能力（P﹤0.01）。7、加入LPS后,DC细胞PCNP的沉默组与过表达组均促进dc的迁移能力,而两组间相比无差异（P﹥0.05）;加入MG-132后,DC细胞PCNP的沉默组与过表达组均抑制dc的迁移能力,而两组间相比也无差异（P﹥0.05）;而LPS和MG-132对DC细胞的迁移能力的作用相反（P﹤0.01）。8、加入LPS后,DC细胞PCNP的沉默组与过表达组均促进dc的克隆形成能力,而两组间相比无差异（P﹥0.05）;加入MG-132后,在DC细胞PCNP沉默组与过表达组均抑制dc的克隆形成能力,而两组间相比也

关键词： PCNP DC细胞 MG-132 LPS 克隆形成能力

肝动脉化疗栓塞术联合dc-CIK细胞治疗老年原发性肝癌的疗效

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中国老年学杂志 2013年第24期33卷 6276-6277页

作者：王哲南阳市中心医院肝脏外科河南南阳473000

原发性肝癌（HCC）是全球常见的消化系统恶性肿瘤之一，我国HCC的比例占全球约55％。手术切除是治疗肝癌的首选手段，但由于发病隐匿，早诊早治困难，大多患者就诊时已为中晚期，失去了手术切除的机会，手术切除率仅为10％-30％。我院... 详细信息

原发性肝癌（HCC）是全球常见的消化系统恶性肿瘤之一，我国HCC的比例占全球约55％。手术切除是治疗肝癌的首选手段，但由于发病隐匿，早诊早治困难，大多患者就诊时已为中晚期，失去了手术切除的机会，手术切除率仅为10％-30％。我院采用肝动脉化疗栓塞术联合dc—CIK自体免疫细胞治疗HCC，取得了良好的疗效。

关键词：肝动脉化疗栓塞 DC细胞 CIK细胞原发性肝癌

CIK细胞联合DC细胞过继性免疫治疗结直肠癌化疗患者免疫功能的影响

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中国现代医学杂志 2013年第10期23卷 32-35页

作者：郭杰崔海朴素宙金永民孙红花杨广民沈雄虎吉林大学第二医院肿瘤中心吉林长春130041 延边大学附属医院肿瘤内科吉林延吉133000 吉林省人民医院肿瘤生物治疗中心吉林长春130021

目的探讨CIK细胞联合DC细胞过继性免疫治疗结直肠化疗患者免疫功能的影响。方法选取2011年1月~2012年1月该院收治的58例结直肠癌患者作为研究组。另选50例同期在我院进行健康体检人群作为对照组,研究组患者均采用化疗联合CIK细胞与dc细... 详细信息

目的探讨CIK细胞联合DC细胞过继性免疫治疗结直肠化疗患者免疫功能的影响。方法选取2011年1月~2012年1月该院收治的58例结直肠癌患者作为研究组。另选50例同期在我院进行健康体检人群作为对照组,研究组患者均采用化疗联合CIK细胞与DC细胞回输的治疗方法。比较分析两组CD3＋、CD4＋、CD8＋及CD4＋/CD8＋等T细胞亚群指标的变化情况。结果与对照组比较,研究组患者治疗前CD3、CD4＋及CD4＋/CD8＋等T细胞亚群指标均明显减低,CD8＋明显提高（均P〈0.05）。与研究组患者治疗前相比,治疗后CD3、CD4＋及CD4＋/CD8＋等T细胞亚群指标均明显提高,CD8＋明显降（均P〈0.05）。6例（10.34%）患者在细胞皮下回输过程中发生体温升高现象。在一定细胞因子的诱导下,外周血单核细胞可以培养出纯度较高的DC细胞。随着CIK细胞培养时间的延长,双阳性细胞的百分率不断上升。结论采用CIK细胞联合DC细胞过继性免疫治疗结直肠化疗患者,能够有效的提高患者的免疫功能指标,且不良反应小。

关键词：结直肠癌 CIK细胞 DC细胞过继性免疫治疗化疗