过敏性鼻炎小鼠Tfh细胞外泌体通过miR-142-5p/CDK5/STAT3通路促进DC细胞成熟

作     者：滕震霄 

作者单位：山东大学 

学位级别：硕士

导师姓名：夏明

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100213[医学-耳鼻咽喉科学] 10[医学] 

主      题：过敏性鼻炎 滤泡辅助性T细胞 DC细胞 外泌体 miR-142-5p 

摘      要：研究背景树突状细胞(DCs)在过敏原抗原呈递中起重要作用。许多研究表明,滤泡辅助性T细胞(Tfhs)与过敏性鼻炎(AR)有关。然而,Tfhs和DCs在AR发病机制中的相互作用仍不清楚。研究目的探索AR小鼠来源Tfhs对DCs成熟的调控机制。研究方法1.流式细胞术分选卵清蛋白致敏小鼠的Tfhs,与小鼠骨髓来源DCs共培养。使用实时荧光定量PCR(qPCR)、流式细胞术(FCM)和免疫荧光染色(IF)检测DCs成熟度。脂多糖(LPS)刺激DCs作为阳性对照。2.提取Tfhs的外泌体加入DCs培养基。使用qPCR、FCM和IF检测DCs成熟度。3.使用RNA测序分析外泌体并筛选出差异miR-142-b(序列与miR-142-5p相同),qPCR检测外泌体中miR-142-5p含量。转染miR-142-5p模拟物或抑制剂至Tfhs,与DCs共培养,使用qPCR和FCM检测DCs成熟度。4.TargetScan网站预测CDK5是miR-142-5p直接靶基因,使用双荧光素酶实验得到验证。使用siRNA敲除CDK5(si-CDK5)观察miR-142-5p变化。转染miR-142-5p模拟物或抑制剂,使用qPCR和蛋白质印迹技术(Western blot)检测CDK5变化。敲除CDK5后FCM检测DCs成熟度。LPS刺激DCs成熟,使用qPCR 和 Western blot 检测 miR-142-5p 和 CDK5 表达。5.使用miR-142-5p模拟物或抑制剂,si-CDK5,LPS处理DCs,使用Western blot检测STAT3信号通路蛋白变化。STAT3信号通路蛋白抑制剂和激活剂分别处理DCs,FCM检测DCs成熟度。IF检测DCs成熟过程CDK5、STAT3和pSTAT3蛋白变化。6.小鼠静脉注射AR小鼠来源外泌体后期待致敏。小鼠鼻黏膜切片HE染色观察细胞浸润。qPCR和FCM检测DCs成熟度。酶联免疫吸附法(ELISA)检测相关炎症因子指标。研究结果1.AR小鼠来源Tfhs促进DCs成熟。2.AR小鼠来源Tfhs分泌的外泌体促进DCs成熟。3.MiR-142-5p在AR小鼠来源Tfhs外泌体中显著减少,参与调节DCs成熟。4.CDK5介导miR-142-5p对DCs成熟的调控。5.Tfhs外泌体通过miR-142-5p/CDK5/STAT3通路调节DCs成熟。6.AR小鼠来源Tfhs外泌体通过Th2途径导致AR发病。结论Tfhs来源的外泌体通过调节miR-142-5p/CDK5/STAT3通路诱导DCs成熟,通过Th2途径导致AR发生。