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Cyclopamine对LN229细胞Nurr1基因表达的影响

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中国临床解剖学杂志 2012年第5期30卷 539-542页

作者：王迪陈艳刘菲菲冷水龙龙大宏洪乐鹏广州医学院人体解剖学教研室广州510182 广州医学院第二附属医院康复科广州510620

目的探讨环巴胺(Cyclopamine)对恶性胶质瘤细胞株LN229帕金森相关基因Nurr1表达的影响。方法在脂多糖(LPS)刺激LN229细胞的条件下,运用实时定量PCR检测SHH通路基因PTCH、Gli1及Nurr1基因mRNA含量,Western Blotting检测LPS对LN229细胞Nu... 详细信息

目的探讨环巴胺(Cyclopamine)对恶性胶质瘤细胞株LN229帕金森相关基因Nurr1表达的影响。方法在脂多糖(LPS)刺激LN229细胞的条件下,运用实时定量PCR检测SHH通路基因PTCH、Gli1及Nurr1基因mRNA含量,Western Blotting检测LPS对LN229细胞Nurr1蛋白表达的影响。进一步在Cyclopamine阻断Sonic Hedgehog(SHH)信号通路的条件下,实时定量PCR及Western Blotting检测Nurr1的mRNA含量及其蛋白的表达及下游炎症因子IL-1βmRNA的含量。结果 LPS刺激下LN229细胞SHH通路相关基因mRNA,及Nurr1 mRNA升高,Western Blot结果进一步证明LPS可以促进Nurr1蛋白表达。Cyclopamine阻断组与对照组比较,在转录水平和翻译水平明显促进了Nurr1基因表达升高,及下游炎症因子IL-1βmRNA的含量。结论 Cyclopamine对LN229细胞Nurr1表达的影响可能与帕金森发病过程中胶质细胞的活化有关。

关键词： Cyclopamine LN229细胞 Nurr1

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中华实验外科杂志 2010年第5期27卷 651-653页

作者：江穗陈锡林丁咏陈仲伟朱李军冯航广东省医学科学院广东省人民医院口腔颌面外科广州510080 中山大学附属第一医院普通外科

目的观察Hedgehog信号传导通路相关基因在肿瘤组织中的表达，及其特异性抑制剂Cyclopamine对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法免疫组织化学法检测80例人口腔鳞癌组织中Hedgehog信号传导通路成员Shh、Smo、Ptch、Gli-1表达；CCK8法检测对... 详细信息

目的观察Hedgehog信号传导通路相关基因在肿瘤组织中的表达，及其特异性抑制剂Cyclopamine对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法免疫组织化学法检测80例人口腔鳞癌组织中Hedgehog信号传导通路成员Shh、Smo、Ptch、Gli-1表达；CCK8法检测对HSQ．89细胞增殖的影响；AnnexinV-PI双染流式细胞仪检测Cyclopamine对HSQ-89细胞凋亡的影响；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Cyelopamine处理后HSQ-89细胞凋亡相关蛋白表达变化。结果Hh家族成员Shh、Smo、Ptch、Gli-1在80例口腔鳞癌中的表达率分别为：61．25％、56．25％、47．50％、53．75％，明显高于正常人；在低分化或发生淋巴结转移的病例中表达更高。Cyelopamine可抑制HSQ-89细胞增殖及诱导凋亡，且抑制效应呈浓度依赖性。Cyclopamine（0、5、10、20、40、80μmol／L）作用下，细胞增殖抑制率分别为0、3．0％、4．5％、28．2％、51．2％、62．7％，凋亡率分别为3．01％、3．36％、5．70％、9．42％。经Cyclopamine处理后HSQ-89细胞中bcl-2表达下降，bcl-xL、Bid等表达不变。结论口腔鳞癌组织中Hedgehog信号转导通路有多种基因异常表达增高，Cyclopamine可通过抑制bcl-2表达而发挥抑制癌细胞增殖、诱导凋亡效应。

关键词：口腔鳞癌信号转导脱噬作用增殖 Cyclopamine

Cyclopamine联合YH-16对人胰腺癌BxPC-3细胞的抑制作用

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西安交通大学学报（医学版） 2010年第3期31卷 283-287页

作者：徐复国马清涌郭坤胡恒通张珉沙焕臣宫晓光西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科陕西西安710061 山东省肥城市人民医院普外科山东肥城271600 皖南医学院弋矶山医院普外科安徽芜湖241001

目的体外研究Hedgehog(HH)信号通路阻断剂Cyclopamine和抗血管生成剂YH-16对胰腺癌细胞株BxPC-3的抑制作用。方法以Cyclopamine和YH-16单独或联合干预BxPC-3细胞,MTT法观察药物对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检... 详细信息

目的体外研究Hedgehog(HH)信号通路阻断剂Cyclopamine和抗血管生成剂YH-16对胰腺癌细胞株BxPC-3的抑制作用。方法以Cyclopamine和YH-16单独或联合干预BxPC-3细胞,MTT法观察药物对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。结果Cyclopamine和YH-16对BxPC-3细胞均有明显的抑制作用,两者联合作用时抑制作用更强(PCyclopamine和YH-16均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞的凋亡率更高(PCyclopamine和YH-16均可下调Bcl-2和上调Bax的表达,联合用药则下调Bcl-2和上调Bax更明显(PCyclopamine和YH-16能抑制BxPC-3肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,两者联合作用时抑瘤效果明显增加,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达有关。

关键词： Cyclopamine YH-16 胰腺癌细胞增殖细胞凋亡

Cyclopamine对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

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肿瘤 2009年第2期29卷 113-117页

作者：刘靳波余晓林文阳安姜习新李朴杨细媚涂植光重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:探讨sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(Cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白(albumin,ALB)、甲胎球蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达的影响。方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FC... 详细信息

目的:探讨sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(Cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白(albumin,ALB)、甲胎球蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达的影响。方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FCM法、RT-PCR和电化学发光免疫法,检测血清饥饿状态下Cyclopamine引起的Hep3B细胞增殖抑制、线粒体膜电位改变,以及对细胞分泌ALB和AFP的影响。结果:血清饥饿状态下Cyclopamine可明显抑制Hep3B细胞的增殖。半定量测量结果显示,Hep3B细胞平均红绿荧光吸光度比值有所降低;FCM法检测结果显示,6h后线粒体膜电位较0h时明显降低,差异有统计学意义(PCyclopamine对Hep3B细胞增殖以及AFP mRNA和蛋白的分泌有明显抑制作用,同时促进线粒体膜电位的降低,提示Cyclopamine具有抑制肿瘤细胞生长和促进早期凋亡发生的作用。

关键词：肝肿瘤, 实验性细胞凋亡 Cyclopamine

低剂量砷联合Cyclopamine协同抑制非雄激素依赖的前列腺癌PC3细胞生长的实验研究

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低剂量砷联合Cyclopamine协同抑制非雄激素依赖的前列腺癌PC3细胞...

作者：熊永江大连医科大学

学位级别：硕士

目的：前列腺癌（Prostatic cancer,Pca）是西方国家最常见的男性恶性肿瘤，而近年我国该病发病率亦逐年上升，大部分患者最终会进展为非雄激素依赖的Pca，但目前尚无公认可以有效的治疗非雄激素依赖Pca的手段。因此，寻求可以有效治疗... 详细信息

目的：前列腺癌（Prostatic cancer,Pca）是西方国家最常见的男性恶性肿瘤，而近年我国该病发病率亦逐年上升，大部分患者最终会进展为非雄激素依赖的Pca，但目前尚无公认可以有效的治疗非雄激素依赖Pca的手段。因此，寻求可以有效治疗非雄激素依赖前列腺癌的新的治疗手段是目前临床迫切需要解决的问题。三氧化二砷（Arsenic trioxide，As203，ATO）已被证实对于治疗复发性或难治性急性早幼粒细胞白血病（APL）具有良好疗效。但某些二期临床试验结果发现单独用ATO治疗一些实体瘤，如转移性肾细胞癌或转移性黑色素瘤，其疗效相对有限。故寻找一种辅助药物，与ATO联合使用，使低浓度的ATO发挥高浓度的作用效果，并降低潜在的毒副作用，很有可能是一种改进ATO治疗某些实体肿瘤的可行有效的方法。Hedgehog（Hh）信号通路晚期前列腺癌中呈高表达。最近研究表明ATO能够通过抑制Hh信号通路下游GLI蛋白而抑制尤文肉瘤和生神经管细胞瘤的增殖;而Smo阻滞剂Cyclopamine（CYC）亦可通过对Hh信号通路的阻滞作用而抑制前列腺癌等肿瘤的生长。故本实验选取非雄激素依赖前列腺癌PC3细胞为研究对象，观察低剂量三氧化二砷联合Cyclopamine对PC3细胞的抑制作用及其可能的分子作用机制。方法：1.运用免疫荧光及DAPI染色鉴定PC3细胞及PC3细胞内HH-GLI信号通路的表达情况。2.采用MTT比色法检测不同浓度ATO及Cyclopamine单独或联合使用对不同的时间点PC3细胞生长的抑制。3.应用裸鼠致瘤实验进一步验证ATO联合Cyclopamine对PC3细胞生长的抑制效果。4.Real-time PCR法检测ATO联合Cyclopamine对PC3细胞内Hh信号通路中重要分子的mRNA的表达的影响。5.检测ATO联合Cyclopamine对PC3细胞内细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：1.免疫荧光剂DAPI染色结果显示肿瘤增殖抗原Ki67、前列腺特异性膜抗原PSAM及HH-GLI1信号通路中重要的核内转录因子GLI1均在PC3细胞中呈高表达2.MTT结果显示ATO或Cyclopamine单独使用均能抑制PC3细胞的生长，呈现明显的剂量及时间依赖性;二者联合使用则优于单剂量、甚至二倍剂量的ATO或Cyclopamine，经Chou’s公式分析二者可显著协同抑制PC3细胞生长。3.动物实验进一步显示ATO联合Cyclopamine使用较单剂量组更能明显抑制PC3细胞移植瘤的生长（p ＜0.05）。4.Real-time PCR分析结果显示ATO联合Cyclopamine使用较单剂量组更明显下调Hh信号通路中GLI1蛋白mRNA的表达（p ＜0.05）。5.流式细胞术检测结果显示，ATO联合Cyclopamine使用具有轻微诱导凋亡作用，且较单剂量组能更明显阻滞PC3细胞于S期（p ＜0.01）。结论：低剂量砷联合Cyclopamine能协同抑制非雄激素依赖前列腺癌PC3细胞的生长，其机制与二者联合使用可更明显下调PC3细胞中Hh信号通路中GLI1蛋白、改变细胞周期及轻微诱导凋亡作用有关。故低剂量砷联合Cyclopamine有可能成为潜在的治疗非雄激素依赖前列腺癌的有效治疗方式。

关键词：前列腺癌 PC3细胞三氧化二砷 Cyclopamine Hedgehog信号通路

Preparation and in vitro antitumor activities of triptolide and Cyclopamine loaded polymeric micelles

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Preparation and in vitro antitumor activities of triptolide ...

Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的影响及其治疗银屑病机制的初步研究

2018年第十二届中国药物制剂大会

作者：刘德俊 Di Zhang Yixue Pei Yongjie Liu Lingyun Xu School of Biology and Pharmaceutical Engineering Wuhan Polytechnic University

Objective: In order to overcome the poor solubility of triptolide(TP) and Cyclopamine(CPA), enhance their anticancer effects, and decrease their side effects, triptolide and Cyclopamine encapsulated polymeric micelle system(TP/CPA-PM) was prepared and its in-vitro antitumor activities were investigated. Methods: Self-prepared PEG-PLC was used as a carrier material to prepare a novel polymeric micelle system containing both TP and CPA(TP/CPA-PM;TP:CPA = 1:1, w/w) using acetone solvent evaporation method. The micelles were characterized in terms of particle size, analyzed by laser particle size analyzer, entrapment efficiency, determined by high-performance liquid chromatography(HPLC), and in-vitro drug release, determined by combining dialysis method with HPLC. The MTS assay was performed at different time points to determine the inhibitory effect of TP/CPA-PM and free-TP/CPA with different concentrations on the proliferation of three kinds of human pancreatic carcinoma cell lines, namely Miapace-2 cells, Kras cells and HPSC cells. Results: The average particle size of TP/CPA-PM(TP:CPA = 1:1, w/w) was(54.3±2.6) nm(n = 3), and the encapsulation efficiency of TP and CPA was(48.7±7.7%)(n = 3) and(58.9±6.0%)(n = 3), respectively. The drug release curve showed that TP in TP/CPA-PM demonstrated fast-release profile, while CPA in TP/CPAPM indicated sustained-release profile. The release of CPA from micelles was faster at pH 5.2 than at pH 7.4. After 24 h of incubation at 37 °C, 39.0% of CPA was released at pH 7.4, while 58.4% was released at pH 5.2. Compared with free-TP/CPA, TP/CPA-PM significantly inhibited the proliferation of the three kinds of pancreatic cancer cells in a dose-dependent and time-dependent manner. Conclusion: These findings indicate that the combination of triptolid and Cyclopamine loaded in polymeric micelles is an effective strategy to treat pancreatic tumors.

关键词： Triptolide Cyclopamine polymer micelles encapsulation efficiency in-vitro release profile pancreatic cancer cells

来源： cnki会议评论

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Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的影响及其治疗银屑病机制的初...

作者：周扬第四军医大学

学位级别：硕士

银屑病是皮肤科一种常见的、具有遗传倾向的慢性炎症性疾病。在外来抗原刺激下,人类白细胞分化抗原4+(Clusters of differentiation,CD4+)T细胞激活,分泌白介素(Interleukin,IL)-2、6、8,刺激角质形成细胞(Keratinocyte,KC)增殖,被激活... 详细信息

银屑病是皮肤科一种常见的、具有遗传倾向的慢性炎症性疾病。在外来抗原刺激下,人类白细胞分化抗原4+(Clusters of differentiation,CD4+)T细胞激活,分泌白介素(Interleukin,IL)-2、6、8,刺激角质形成细胞(Keratinocyte,KC)增殖,被激活的KC可分泌IL-1、6、8,再作用于CD4+T细胞;或通过IL-6、8作用于自身,另外,活化的CD4+T细胞分泌肿瘤坏死因子α(Tumor necros factor- alpha,TNF-α)、干扰素γ(gamma Interferon,IFN-γ)使KC分泌细胞间黏附分子(Intercellular adhesion molecule,ICAM)-1,介导KC与CD4+T细胞黏附,使病变周而复始。 Hedgehog(Hh)信号通路是一个调控胚胎发育的信号转导途径,胚胎发育完成后仍可继续调控细胞的生长、增殖和分化。Hh信号通路的激活可以使KC表现出一些银屑病的病理特点,如使KC增殖、角化异常、角蛋白(Keratin,K)14表达水平增高、表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)磷酸化增加等。该信号通路的高效、特异性抑制剂Cyclopamine,可以迅速清除银屑病皮损,在银屑病的治疗中有显著的疗效。我们曾发现Hh信号通路在银屑病皮损中处于过度激活状态。为进一步确定Cyclopamine治疗银屑病的机理,本实验以银屑病SCID小鼠模型、正常人角质形成细胞系(Hacat)为研究对象,观察Cyclopamine作用后Hacat细胞因子分泌表达的变化及移植皮片组织病理的变化。本研究的主要实验方法及结果如下: 一.银屑病SCID小鼠动物模型的构建切取银屑病患者皮损移植给SCID小鼠,移植后10天,移植皮片周围分点皮下注射经刀豆蛋白A(ConcanavalinA,ConA)刺激的银屑病患者外周血单一核细胞(Peripheral blood monouclear cells,PBMCs),细胞数约为4×106/鼠。移植后15天,绝大多数移植皮片外观和组织病理学特征呈明显的银屑病改变。我们根据Baker评分法,对所有的移植模型进行评分,结果为8.278±0.244(典型的银屑病皮损评分在4.0-10.0之间)。因此从大体表现、组织病理方面,移植皮片均能保留银屑病的表型特点,表明银屑病SCID小鼠动物模型构建成功。二.Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的作用 1.分组及给药将构建好的动物模型随机分为3组,每组4只,分别对应以下处理:5mmol/mL Cyclopamine治疗组:Cyclopamine加DMSO、生理盐水稀释,DMSO终浓度40%,均匀涂抹于移植皮片,每次给药50μL,每天给药两次,连续给药15天;5mmol/mL tomatidine对照组:以tomatidine取代Cyclopamine,剂量、配制及外用方法同Cyclopamine组;空白对照组:DMSO、生理盐水不加Cyclopamine,用法同上。 2.结果治疗后15天比较各组治疗效果: 移植皮片外观显示Cyclopamine组治疗后移植皮片红斑、鳞屑消失,几乎接近于正常皮肤,组织病理学显示表皮显著变薄、炎细胞浸润减轻、组织学评分显著降低;tomatidine对照组和空白对照组皮损保持明显红斑,可见白色鳞屑,同治疗前相比无明显改变,组织学显示表皮厚度几乎保持不变,尽管角化不全消失,部分颗粒层出现,但仍见角化过度、棘层肥厚、表皮突延长、真皮浅层毛细血管扩张充血及炎细胞浸润等银屑病改变。本部分研究外用Cyclopamine进行治疗,发现其可明显促进SCID小鼠银屑病样皮损的恢复,具有良好的治疗效果,为Cyclopamine的银屑病治疗向临床应用奠定了基础,为银屑病的治疗提供新的方向。三.Cyclopamine处理后Hacat细胞因子分泌表达的变化本部分实验采用ELISA和RT-PCR方法检测Hacat在Cyclopamine处理后IL-6、8、TNF-α分泌表达的变化。结果显示: 1.Hacat在Cyclopamine处理12h、24h、48h后用ELISA检测细胞培养上清中IL-6、8、TNF-α的分泌明显低于空白组,差异有统计学意义,尤以5μmol/mL Cyclopamine组为著。 2.Hacat在Cyclopamine处理12h、24h、48h后用RT-PCR方法检测细胞中IL-8的mRNA表达明显下降,尤以5μmol/mL Cyclopamine组为著。Cyclopamine可明显降低Hacat IL-6、8、TNF-α的分泌表达,提示Cyclopamine治疗银屑病的机理可能为Cyclopamine能降低Hacat分泌IL-6、8、TNF-α这些在银屑病的发病过程中起重要作用的细胞因子。

关键词： Hedgehog信号转导通路银屑病角质形成细胞 Cyclopamine 银屑病SCID小鼠模型

Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖的影响

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同济大学学报（医学版） 2009年第3期30卷 18-22页

作者：史阳王军臣华咏张士镓同济大学附属东方医院病理科上海200120 同济大学附属东方医院中心实验室上海200120 同济大学医学院 2003级临床医学上海200092

目的研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人肺癌细胞NCI-H460生长和增殖的影响。方法培养NCI-H460细胞，加入不同浓度Cyclopamine，作用不同时间，倒置显微镜下观察细胞形态变化，CCK-8法检测Cyclopamine对肺癌细胞生长和增... 详细信息

目的研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人肺癌细胞NCI-H460生长和增殖的影响。方法培养NCI-H460细胞，加入不同浓度Cyclopamine，作用不同时间，倒置显微镜下观察细胞形态变化，CCK-8法检测Cyclopamine对肺癌细胞生长和增殖的影响，同时用流式细胞仪检测Cyclopamine对NCI-H460细胞周期的影响。结果与空白对照组和Tomatidine对照组相比，2-40μmol/L的Cyclopamine作用于NCI-H460细胞后，倒置显微镜下观察，细胞立体感消失，皱缩成圆形，细胞间隙增大。CCK-8比色法显示，Cyclopamine对NCI-H460细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性，20μmol/L的Cyclopamine使NCI-H460细胞生长曲线下移，并可将NCI-H460细胞阻滞在G1期，明显减少其S期细胞数量，引起细胞凋亡。结论Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖有比较明显的抑制作用，提示大细胞肺癌的发生和发展与Shh信号转导通路的异常激活有关。

关键词：肺肿瘤信号转导通路 Cyclopamine 流式细胞分析

Cyclopamine对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其机制

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中国临床神经外科杂志 2009年第11期14卷 673-677页

作者：周昱男夏远鹏毛玲戴偌连杨雪胡波华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科湖北武汉430022 武汉市中心医院神经内科湖北武汉430023

目的探讨Shh信号途径的抑制剂Cyclopamine对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其分子生物学机制。方法以不同浓度的Cyclopamine处理SK-N-SH细胞不同时间,在相差倒置显微镜下观察药物作用后的该细胞形态学变化。用四甲基... 详细信息

目的探讨Shh信号途径的抑制剂Cyclopamine对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其分子生物学机制。方法以不同浓度的Cyclopamine处理SK-N-SH细胞不同时间,在相差倒置显微镜下观察药物作用后的该细胞形态学变化。用四甲基偶氮唑盐(MTT)分析法检测各组SK-N-SH细胞的增殖情况,流式细胞仪检测不同浓度Cyclopamine作用后对细胞周期的影响,Westernblot检测药物作用前后细胞周期蛋白D1、P16和P21蛋白表达的变化。结果Cyclopamine各处理组SK-N-SH细胞形态学有所不同。MTT法检测结果显示,Cyclopamine对SK-N-SH细胞增殖的抑制是浓度依赖性和时间依赖性的(PCyclopamine抑制SK-N-SH细胞生长,阻滞细胞从G1期向S期转化,其机制可能与调控细胞周期蛋白表达有关。Cyclopamine可能成为未来治疗神经母细胞瘤的药物之一。

关键词：神经母细胞瘤 Cyclopamine Shh信号途径浓度时间依赖性增殖细胞周期蛋白