检索结果-南通市图书馆

作者：胡丛武江苏科技大学

学位级别：硕士

抗菌肽是宿主在免疫过程中产生的一类重要抗菌复合物。家蚕Attacin 1(BmAttacin1)蛋白是抗菌肽中的一种,其开放阅读框(ORF)编码214个氨基酸。我们的前期研究中发现BmAttacin 1基因在球孢白僵菌(Beauveria bassiana)感染的家蚕幼虫体内... 详细信息

抗菌肽是宿主在免疫过程中产生的一类重要抗菌复合物。家蚕Attacin 1(BmAttacin1)蛋白是抗菌肽中的一种,其开放阅读框(ORF)编码214个氨基酸。我们的前期研究中发现BmAttacin 1基因在球孢白僵菌(Beauveria bassiana)感染的家蚕幼虫体内显著上调表达。本文运用生物信息学软件预测其N端17号氨基酸为信号肽,成熟蛋白三级结构主要形成反平行β-片层结构;实时荧光定量PCR检测结果进一步证明家蚕幼虫在被球孢白僵菌感染后BmAttacin 1基因显著上调表达。以家蚕大造(p50)品种幼虫三龄起蚕cDNA为模板,克隆出BmAttacin 1成熟蛋白编码序列,利用原核表达系统成功表达获得BmAttacin 1蛋白,抑菌圈实验结果表明BmAttacin 1对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)和球孢白僵菌有明显的抑菌效果,而对革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)没有抑菌效果;进一步将BmAttacin 1与球孢白僵菌分生孢子孵育,间接免疫荧光检测发现BmAttacin 1能与球孢白僵菌分生孢子结合。在家蚕培养细胞(BmN)过表达BmAttacin 1基因后,家蚕其它七种抗菌肽基因也都上调表达,其中天蚕素类抗菌肽Bmcecropin a基因的表达上调了10倍,Bmcecropin B上调了9倍,表明BmAttacin 1基因的表达可能对其它抗菌肽基因的表达具有协同增强作用。本结果为深入研究BmAttacin 1与球孢白僵菌的相互作用以及BmAttacin 1在家蚕抵御球孢白僵菌感染过程中发挥的作用奠定了一定的基础。家蚕cecropin a(Bmcecropin a)也是抗菌肽的一种,其ORF编码63个氨基酸。课题组前期研究发现Bmcecropin a在家蚕体内体外都对球孢白僵菌有明显的抑菌作用,但其发挥作用的具体机制还不清楚。本文根据NCBI登录的Bmcecropin a的ORF序列,运用生物信息学软件预测其12号氨基酸为信号肽,抗原表位氨基酸序列为AIAVIGQA,结合对Bmcecropin a成熟肽结构的分析及同源序列的比对,化学合成法合成Bmcecropin a 233以及513两条氨基酸序列,分别偶联KLH和BSA后以此为抗原混合免疫Balb/c小鼠,蛋白质印迹检测结果表明免疫后的小鼠血清对Bmcecropin a具有特异性抗原抗体反应;通过细胞融合和杂交瘤细胞株筛选,获得两株阳性杂交瘤细胞。利用杂交瘤细胞株培养基上清对大造品系家蚕血淋巴进行蛋白质印迹检测,结果显示其中一株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能在PVDF膜上与抗原结合产生单一条带,大小约为5 kD,即为目的蛋白Bmcecropin a,表明该杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可识别Bmcecropin a的线性表位,不依赖于抗原的特定构象。用该株杂交瘤细胞制备单克隆抗体并通过蛋白质印迹检测Bmcecropin a在家蚕各组织中的特异性表达情况,结果仅在脂肪体组织中检测到特异性抗体抗原反应。异丙醇沉淀法提取家蚕血淋巴蛋白,蛋白质印迹检测发现感染球孢白僵菌32 h的家蚕幼虫血淋巴中抗菌肽cecropin a上调表达。本结果为Bmcecropin a的深入研究及论证其在家蚕抵御球孢白僵菌侵染过程中发挥的重要作用奠定了基础。

关键词：家蚕球孢白僵菌抗菌肽 Attacin1 cecropin a 单克隆抗体

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Lfcin B-cecropin a杂合抗菌肽的生物信息学分析

引用

当代畜禽养殖业 2023年第4期43卷 22-24页

作者：宋雪莹黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院黑龙江齐齐哈尔160000

为提高牛乳铁蛋白肽(Lfcin B)和天蚕素(cecropin a)的抗菌活性和稳定性,降低其对动物机体的毒副作用,将2种肽的活性区域杂合,利用在线生物信息学软件对Lfcin B、cecropin a和杂合肽进行理化性质、二级结构和两亲性分析。结果表明:杂合... 详细信息

为提高牛乳铁蛋白肽(Lfcin B)和天蚕素(cecropin a)的抗菌活性和稳定性,降低其对动物机体的毒副作用,将2种肽的活性区域杂合,利用在线生物信息学软件对Lfcin B、cecropin a和杂合肽进行理化性质、二级结构和两亲性分析。结果表明:杂合抗菌肽由23个氨基酸组成,为阳离子型多肽,二级结构中主要包含α-螺旋、β-折叠结构、无规则卷曲和延长肽链,具有不完全两亲性,呈亲水性。综上所述,对Lfcin B、cecropin a和杂合肽进行生物信息学预测分析,可为开发高效、稳定的新型替抗产品提供信息学基础。

关键词： Lfcin B cecropin a 杂合重组生物信息学

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

家蚕抗菌肽cecropin a的单克隆抗体制备及表达特征

家蚕抗菌肽Cecropin A的单克隆抗体制备及表达特征

引用

2019年全国蚕病理学与病虫害防控学术研讨会

作者：胡丛武李瑞林吴万明侯成香高坤耿涛郭锡杰江苏科技大学生物技术学院中国农业科学院蚕业研究所中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

抗菌肽是宿主在免疫过程中产生的一类重要抗菌复合物。家蚕抗菌肽cecropin a（Bmcecropin a）由63个氨基酸组成。课题组前期研究发现Bmcecropin a在家蚕体内体外都对球孢白僵菌有明显的抑菌作用,但其发挥作用的具体机制还不清楚。本文根... 详细信息

抗菌肽是宿主在免疫过程中产生的一类重要抗菌复合物。家蚕抗菌肽cecropin a（Bmcecropin a）由63个氨基酸组成。课题组前期研究发现Bmcecropin a在家蚕体内体外都对球孢白僵菌有明显的抑菌作用,但其发挥作用的具体机制还不清楚。本文根据NCBI登录的Bmcecropin a的ORF序列,运用生物信息学软件预测其1～22号氨基酸为信号肽,抗原表位氨基酸序列为AIAVIGQA,结合对Bmcecropin a成熟肽结构的分析及同源序列的比对,化学合成法合成Bmcecropin a 23～63以及51～63两条氨基酸序列,分别偶联KLH和BSA后以此为抗原混合免疫Balb/c小鼠,蛋白质印迹检测结果表明免疫后的小鼠血清对Bmcecropin a具有特异性抗原抗体反应;通过细胞融合和杂交瘤细胞株筛选,获得两株阳性杂交瘤细胞。利用杂交瘤细胞株培养上清对大造品系家蚕血淋巴进行蛋白质印迹检测,结果显示其中一株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能在PVDF膜上与抗原结合产生单一条带,大小约为5 k D,即为目的蛋白Bmcecropin a,表明该杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可识别Bmcecropin a的线性表位,不依赖于抗原的特定构象。用该株杂交瘤细胞制备单克隆抗体并通过蛋白质印迹检测Bmcecropin a在家蚕各组织中的特异性表达情况,结果仅在脂肪体组织中检测到特异性抗体抗原反应。异丙醇沉淀法提取家蚕血淋巴蛋白,蛋白质印迹检测发现感染球孢白僵菌32h的家蚕幼虫血淋巴中抗菌肽cecropin a上调表达。本结果为深入研究Bmcecropin a在家蚕抵御球孢白僵菌侵染过程中发挥的重要作用奠定了基础。

关键词：家蚕球孢白僵菌抗菌肽 cecropin a 单克隆抗体

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

Cecrop-m2A10融合基因的构建、原核表达、生物学活性分析及转基因体系的构建

Cecrop-m2A10融合基因的构建、原核表达、生物学活性分析及转基因...

引用

作者：丁雪冰南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景:蚊媒可传播多种疾病,如:疟疾(malaria)、流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis B)、丝虫病(filariasis)、登革热(dengue fever)等,是严重威胁人民生命健康的重要疾病。一些蚊媒病如登革热的发病率呈逐年递增的趋势并常有局部... 详细信息

研究背景:蚊媒可传播多种疾病,如:疟疾(malaria)、流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis B)、丝虫病(filariasis)、登革热(dengue fever)等,是严重威胁人民生命健康的重要疾病。一些蚊媒病如登革热的发病率呈逐年递增的趋势并常有局部暴发流行。疟疾是世界上感染率最高,死亡人数最多的疾病之一。每年有超过30亿人受到疟疾的威胁,死亡人数达200余万。造成这种严重局面的最主要原因是缺乏预防疟疾的有效措施以及蚊媒和病原不断产生耐药性。因此探索并开发新的防治蚊媒疾病的措施已成为当前迫切需要解决的问题,控制昆虫媒介再次成为最有效且实用的抗疟手段。疟原虫是人体疟疾的病原体,共有四种类型,在我国主要是间日疟原虫和恶性疟原虫。人体疟原虫需要人和雌性按蚊做宿主,它在蚊体内的发育包括在蚊胃腔内进行有性生殖即配子生殖(gametogony)和在蚊胃壁进行的无性生殖即孢子增殖(sporogony)两个阶段。子孢子是疟原虫感染人体的阶段。恶性疟原虫环子孢子蛋白(Circumsporozoite protein,CSP)覆盖于子孢子表面,是其重要保护性抗原及粘附入侵靶细胞的物质基础。恶性疟CSP的鼠源单克隆抗体2A10在体外能够阻止子孢子进入蚊唾液腺和人肝细胞。2A10scFv(Single-chainFV antibody fragment)是2A10单链抗体可变区片段。在以鼠源性2A10scFv为靶基因的转基因蚊中,蚊体内所表达的2A10scFv能够与子孢子结合,从而阻断其钻入唾液腺。但由于蛋白的表达量不高,因此未能达到完全阻断子孢子入侵的效果。近年来,国际上提出了利用转基因技术对蚊媒进行遗传修饰以控制蚊媒疾病的新策略。外源基因在转基因蚊体内的表达对于转基因蚊的抗病原效应至关重要,它受到启动子、插入部位及外源基因本身特性等诸多因素的影响。其中,外源基因的密码子在宿主蚊体内的使用频率,即遗传密码子的偏嗜性被认为是一个重要影响因素。物种间编码同一氨基酸的不同密码子的使用频率存在差别,一些在外源基因中出现的密码子很少为表达宿主所使用,相对应的tRNA在宿主体内稀少,由此影响了外源基因mRNA的翻译过程,从而降低了效应蛋白的表达量。在对于大肠杆菌偏嗜性人胰岛素样生长因子1的研究中,实验人员依据大肠杆菌遗传密码子使用频率表,人工合成3条DNA单链,PCR拼接扩增出适于在大肠杆菌中表达的人IGF-1基因。所构建的大肠杆菌偏嗜性人IGF-1基因可显著提高rhIGF-1的产率。此外将异源的免疫原基因密码子优化为免疫接种动物偏嗜性密码子能够提高抗原表达效率并改进DNA疫苗免疫效果也已被许多研究所证实。本实验中经对比分析,鼠源性2A10scFv基因中有些密码子在蚊体内的使用频率确实很低,例如,编码丝氨酸的密码子UCU在冈比亚按蚊的使用频率仅为4.1%。那么我们能否通过2A10scFv基因密码子的蚊偏嗜性改造,使其更适于在转基因蚊体内表达从而提高其表达量、增加其稳定性及生物学活性呢?抗菌肽(antimicrobial peptides,AMP)是抗菌活性短肽的总称。目前已发现抗菌肽或类似的小分子肽类广泛存在于生物界,包括细菌、动植物和人类。内源性的抗菌肽经诱导合成,在机体抵抗病原的入侵方面起着重要的作用,被认为是缺乏特异性免疫功能生物的重要防御成分。抗菌肽具有广谱杀菌作用,大多数对革兰氏阳性菌有较强的杀灭作用,有些则对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均起作用。例如,Reed等将Shiva-Ia转入小鼠中,转基因小鼠对布鲁氏杆菌的抵抗力显著增强;Possani等的研究表明,在蚊体内表达Shiva-3可以抑制疟疾的传播。与传统抗生素相比,某些抗菌肽的抗菌活性还不够理想,改造已有抗菌肽和设计新抗菌肽分子是提高其产量及活性的有效途径。例如,Christsnen B等研究中得到的融合抗菌肽的抗菌活性比其任何一个供体抗菌肽的活性都高;Durasula等通过在长红猎蟋的共生菌中表达cecropin a显减少了其体内锥虫的数量。cecropins是第一个被发现的动物抗菌肽,1975年瑞典科学家从惜古比天蚕(Hyatophoracecropia)蛹中诱导分离得到。其中cecropin a对各种大肠杆菌和其他革兰氏阴性菌如沙门氏菌具有很强的活性,对部分革兰氏阳性菌也具有一定的杀伤活性。其作用机理不同于传统抗生素,不会导致抗药菌株的产生,且对正常的真核生物细胞及霉菌不起作用。由于抗菌肽的分子小,对蛋白酶非常敏感,因此很难直接大量表达而多采用融合表达策略以降低其对宿主细胞的毒性。综上,能否通过基因融合配伍增强cecropin a及2A10scFv的抗病原作用及Cecrop-m2A10在蚊体内的稳定性呢?目的:

关键词：恶性疟原虫环子孢子蛋白单链抗体 cecropin a 生物学活性

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：