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卵巢癌细胞株coc1/ddp多药耐药逆转对中性鞘糖脂表达的调控作用

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解放军医学杂志 2001年第3期26卷 166-168页

作者：李胜平王丽莉张积仁张健成都军区成都总医院成都610083 第一军医大学珠江医院

为探讨逆转卵巢癌细胞株的多药耐药性 (MDR)对细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的调控作用 ,以三苯氧胺 (TAM )和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应 ,采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株coc1/ddpMDR逆... 详细信息

为探讨逆转卵巢癌细胞株的多药耐药性 (MDR)对细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的调控作用 ,以三苯氧胺 (TAM )和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应 ,采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株coc1/ddpMDR逆转前后及亲本株coc1细胞的N GSLs,高效薄层层析(HPTLC)分析了N GSLs的表达。结果显示 ,coc1/ddp和coc1的N GSLs表达有显著差异 ,coc1/ddp的CMH表达较coc1强 ;经TAM、VRP作用后 ,coc1/ddp的耐药性发生逆转 ,CMH表达降低。说明卵巢癌的多药耐药性与中性鞘糖脂CMH相关 ,CMH可能为卵巢癌MDR相关鞘糖脂抗原。

关键词：卵巢肿瘤多药抗药性中性糖苷神经鞘脂类神经酰胺类 coc1/ddp

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp在体外的增殖抑制作用

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第三军医大学学报 2009年第21期31卷 2124-2127页

作者：胡琴琴钟玲徐蕾蒋兴伟池余刚重庆医科大学第二附属医院妇产科重庆400010

目的观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、3... 详细信息

目的观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72h)对coc1/ddp的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Westernblot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果GSPE对coc1/ddp具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变。流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高。Westernblot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加。结论原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关。

关键词：原花青素卵巢癌耐药凋亡 coc1/ddp

顺铂联合热疗对卵巢癌铂敏感细胞株coc1和铂耐药细胞株coc1/ddp的影响

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华西药学杂志 2011年第1期26卷 24-26页

作者：李玉玲尹如铁谢聪肖萍游小林四川大学华西第二医院四川成都610041

目的探讨热疗联合化疗对卵巢癌铂敏感细胞株coc1和铂耐药细胞株coc1/ddp增殖、凋亡的作用、逆转耐药细胞的耐药性及其可能机制。方法采用MTT法检测热疗及联合不同浓度的顺铂(1.25、2.5、5、10、20μ***-1)对卵巢癌细胞株coc1,coc1/ddp... 详细信息

目的探讨热疗联合化疗对卵巢癌铂敏感细胞株coc1和铂耐药细胞株coc1/ddp增殖、凋亡的作用、逆转耐药细胞的耐药性及其可能机制。方法采用MTT法检测热疗及联合不同浓度的顺铂(1.25、2.5、5、10、20μ***-1)对卵巢癌细胞株coc1,coc1/ddp生长的抑制作用;RT-PCR法检测两种细胞株中Survivin基因及ERCC1基因mRNA表达的差异。结果细胞株coc1/ddp在42℃联合顺铂作用下凋亡率增加明显,细胞半数致死量由4.98μ***-1(37℃)降至1.82μ***-1(42℃),对顺铂的敏感性增加了2.78倍(Pcoc1半数致死量无明显差异(P>0.05);42℃时细胞株中ERCC1基因和survivin基因的mRNA表达量均低于37℃时的表达(P<0.05)。结论热疗本身具有杀灭肿瘤细胞的作用,联合化疗可增强耐药株对顺铂的敏感性,一定程度上逆转了铂耐药性,其机制可能与降低survivin基因和ERCC1基因mRNA的表达有关。

关键词：卵巢癌 coc1 coc1/ddp 顺铂热疗 Survivin ERCC1

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株coc1/ddp的增敏作用及其机制的研究

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广西医科大学学报 2007年第3期24卷 361-364页

作者：英焕春吕靖张淑兰戴进中国医科大学盛京医院妇产科沈阳110004 沈阳市第五人民医院肿瘤科辽宁省辽阳市第三人民医院妇产科

目的：探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系coc1／ddp的增敏作用并探讨其机制。方法：采用MTT法检测姜黄素对coc1／ddp细胞的增敏作用；用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于coc1／ddp细胞48h后的细胞凋亡率；Wester... 详细信息

目的：探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系coc1／ddp的增敏作用并探讨其机制。方法：采用MTT法检测姜黄素对coc1／ddp细胞的增敏作用；用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于coc1／ddp细胞48h后的细胞凋亡率；Westernblot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在15～35μmol／L以内时以一定的剂量一效应关系对coc1／ddp有明显的增殖抑制作用。顺铂的浓度在1．25～5mg／L时加入20μmol／L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05），尤以2．5mg／L顺铂和20μmol／L姜黄素联合作用时，耐药细胞生存率下降最明显；coc1／ddp中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比，凋亡率明显增加（P〈0．05）；顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低（P〈0．05），Caspase-3蛋白的表达明显增高（P〈0．05）。结论：姜黄素能够显著抑制coc-／ddp增殖，并能增强该细胞系对顺铂的敏感性，其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达，增加CasDase-3蛋白的表汰有关。

关键词：卵巢癌 coc1/ddp 耐药顺铂姜黄素 Bcl-2 Survivin Caspase-3

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株coc1/ddp对顺铂敏感性的研究

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实用医学杂志 2009年第8期25卷 1183-1186页

作者：吕靖英焕春戴进沈阳市第五人民医院肿瘤科 110022 中国医科大学附属盛京医院妇产科沈阳市110022 辽宁省辽阳市石油化纤公司职工医院妇产科 111003

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对coc1/ddp细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结... 详细信息

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对coc1/ddp细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(Pcoc1/ddp增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。

关键词：卵巢肿瘤姜黄素顺铂基因 Bcl-2 coc1/ddp 耐药 Smac

穿琥宁对coc1/ddp顺铂耐药性的逆转作用

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中国新药杂志 2010年第20期19卷 1899-1902页

作者：刘明华章卓任美萍李蓉李茂肖顺汉泸州医学院药理教研室四川泸州646000

目的:建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp,探讨穿琥宁对coc1/ddp顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法:采用逐步递增顺铂浓度、体外间歇诱导法建立coc1/ddp;CCK-8试剂盒(CellCounting Kit-8)检测穿琥宁对coc1/ddp顺铂耐药性的逆转作用;... 详细信息

目的:建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp,探讨穿琥宁对coc1/ddp顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法:采用逐步递增顺铂浓度、体外间歇诱导法建立coc1/ddp;CCK-8试剂盒(CellCounting Kit-8)检测穿琥宁对coc1/ddp顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果:历时5个月建立的coc1/ddp细胞株对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性。穿琥宁对coc1/ddp的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到5.63倍。与coc1比较,coc1/ddp细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经穿琥宁干预后,coc1/ddp胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P1)。结论:穿琥宁对coc1/ddp的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预coc1/ddp细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加coc1/ddp细胞内顺铂的含量有关。

关键词：穿琥宁 coc1/ddp 顺铂耐药性

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp的逆转作用研究

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重庆医学 2011年第20期40卷 1982-1984,1987页

作者：刘明华任美萍李蓉章卓肖顺汉泸州医学院药理教研室四川泸州646000

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp,探讨川芎嗪对coc1/ddp顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增ddp浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对coc1/ddp细... 详细信息

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp,探讨川芎嗪对coc1/ddp顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增ddp浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株coc1/ddp;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对coc1/ddp细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL ddp作用下生长良好的耐药细胞株coc1/ddp,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对coc1/ddp的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与coc1比较,coc1/ddp细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,coc1/ddp胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P1)。结论川芎嗪对coc1/ddp的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预coc1/ddp细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。

关键词：川芎嗪顺铂 coc1/ddp 多药耐药性

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp增殖抑制作用及机制研究

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葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP增殖抑制作用及机制研...

作者：胡琴琴重庆医科大学

学位级别：硕士

目的观察葡萄籽来源的原花青素(GSPE)对人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp的增殖抑制作用,并初步探讨其机制。方法(1)在第一部分实验中,细胞培养细胞形态观察,HE染色观察细胞形态变化,MTT法检测不同浓度葡萄籽来源的原花青素(0、20、40、80、160... 详细信息

目的观察葡萄籽来源的原花青素(GSPE)对人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp的增殖抑制作用,并初步探讨其机制。方法(1)在第一部分实验中,细胞培养细胞形态观察,HE染色观察细胞形态变化,MTT法检测不同浓度葡萄籽来源的原花青素(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(24、48、72h)对coc1/ddp的增殖抑制作用,测定抑制率。(2)在第二部分实验中,流式细胞仪和TUNEL检测各浓度GSPE作用后细胞凋亡情况,Western-blot和RT-PCR检测细胞内Caspase-3, bcl-2,bax基因的表达情况。结果经GSPE作用后,coc1/ddp细胞体积变小,边缘皱缩,胞浆内颗粒物质增多;HE染色观察发现GSPE能引起明显的细胞凋亡形态改变,在相同作用时间下,药物浓度越高,形态改变越明显;经MTT试验和细胞生长抑制率测定,GSPE对coc1/ddp有明显的增殖抑制作用,而且这种抑制作用随着其浓度的增大和作用时间的延长而增强,。流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高。Western blot和RT-PCR检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3和bax蛋白表达增加,bcl-2的表达下降。结论葡萄籽原花青素在体外对人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp有明显的增殖抑制作用,并能诱导其调亡,增加Caspase-3和bax蛋白表达,降低bcl-2的表达。GSPE诱导人卵巢癌耐药细胞coc1/ddp凋亡的其机制可能与增强Caspase-3表达和上调bax/bcl-2比例有关。

关键词：原花青素卵巢癌耐药基因 coc1/ddp

雷公藤内脂醇对体外培养的人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(coc1/ddp)的活性的影响

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雷公藤内脂醇对体外培养的人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(COC1/DDP)...

作者：罗丽萍南昌大学

学位级别：硕士

目的: 本实验旨用不同浓度雷公藤内脂醇对人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(coc/ddp)进行干预,观察其对体外培养的coc/ddp活性的影响及作用时间和量效关系。以期寻找对耐顺铂治疗的上皮性卵巢癌病人的有效治疗药物。方法: 1 coc/ddp细胞的... 详细信息

目的: 本实验旨用不同浓度雷公藤内脂醇对人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(coc/ddp)进行干预,观察其对体外培养的coc/ddp活性的影响及作用时间和量效关系。以期寻找对耐顺铂治疗的上皮性卵巢癌病人的有效治疗药物。方法: 1 coc/ddp细胞的传代培养:coc/ddp细胞用coc/ddp完全培养基培养,将细胞密度调整至5×10/ml ,置培养瓶中,在37℃、5%CO,饱和湿度条件下于恒温培养箱内培养。每2天细胞长满后,吹打后制成单细胞悬液,离心1000r/min 10min,弃上清液,更换coc/ddp完全培养基,按5×10/ml密度补充液体容量至7ml接种到培养瓶内。 2 coc/ddp细胞的生长曲线测定:取对数生长期细胞5×10/ml置于24孔板中,在37℃、5%CO2,饱和湿度条件下于恒温培养箱内培养5d,每天取三孔细胞,以台盼蓝法计算单位活细胞数量,并取平均值。以细胞密度为纵轴,以时间为横轴绘制coc/ddp细胞生长曲线图。通过生长曲线,可以显示coc/ddp细胞的生长周期,确定最佳干预时间。 3雷公藤内脂醇对coc/ddp细胞增殖的影响:雷公藤内脂醇作用组用不同浓度雷公藤内脂醇(1ng/ml、3ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、75ng/ml、100ng/ml)干预,分为8个浓度雷公藤内脂醇作用组;空白对照组用coc/ddp细胞完全培养基干预,分别作用coc/ddp细胞24h、48h、72h,之后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测每孔光吸收值(OD值)的大小可反映细胞的数量及活性,OD值越高则细胞活性越强。结果可反映雷公藤内脂醇对coc/ddp细胞增殖的影响,同时计算细胞抑制率及IC50值(IC50值即细胞存活率为≤50%时的药物浓度,表示药物的细胞毒性)。 4雷公藤内脂醇对coc/ddp细胞形态及超微结构的改变:通过倒置显微镜及透射电子显微镜下观察了空白对照组(coc/ddp细胞专用培养基)、低浓度雷公藤组(3ng/ml)与高浓度雷公藤组(50ng/ml)作用48h后,coc/ddp细胞的细胞形态及超微结构的改变。结果: 1体外培养的coc/ddp细胞的生长曲线:观察coc/ddp细胞的生长曲线,第1、2、3天,细胞增殖活跃,第三天后细胞增殖进入平台期,之后因生长空间限制而导致细胞密度过大及营养相对缺乏的原因,细胞量缓慢减少。 2雷公藤内酯醇对coc/ddp细胞增殖的影响:结果可见雷公藤内酯醇对coc/ddp细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性。从3ng/ml到100 ng/ml的雷公藤内酯醇均可明显抑制coc/ddp细胞的生长增殖,其药物作用48h后的IC50为药51.76ng/ml,药物作用72h后的IC50为10.78ng/ml。 3雷公藤内脂醇对coc/ddp细胞形态及超微结构的影响: 3.1雷公藤内脂醇作用后coc/ddp细胞形态的改变:通过倒置显微镜可见空白对照组coc/ddp细胞生长良好;低浓度雷公藤内脂醇组coc/ddp细胞分裂状及成串细胞团减少,细胞变扁平,透光性减少,细胞数量较空白对照组减少;高浓度雷公藤内脂醇组coc/ddp细胞细胞形态多样化,胞浆内颗粒增多,coc/ddp细胞数量及细胞密度较低浓度雷公藤内脂醇组更为减少 3.2雷公藤内脂醇作用后coc/ddp细胞超微结构的改变: 3.2.1空白对照组通过透射电子显微镜观察coc/ddp细胞形态及超微结构的改变,可见空白对照组coc/ddp呈椭圆形,细胞核为卵圆形,染色质丰富;3.2.2低浓度雷公藤内脂醇组可见部分coc/ddp细胞体积较大,呈多角形,细胞膜微绒毛较空白对照组细胞明显减少,细胞核较空白对照组变大、内有包含物,染色质聚集、固缩、碎裂、溶解,核膜内陷,细胞质内有空泡形成,线粒体的数目及形状改变,高尔基体碎裂等细胞衰老改变;3.2.3高浓度雷公藤内脂醇组coc/ddp细胞膜完整,细胞膜表面微绒毛消失,细胞器较空白对照组增多,如线粒体增多,内质网扩张,有些细胞膜皱缩,胞质浓缩,核团聚。多数细胞可见细胞核染色质聚集成团块状、新月状,并凝聚在核膜周边。有调亡小体生成的典型细胞凋亡改变呈现。结论: 1雷公藤内脂醇对体外培养的coc/ddp细胞有明显的抑制作用,其浓度自3ng/ml开始有明显抑制作用,并与时间及药物浓度依赖性,药物作用48h后的IC50为药51.76ng/ml,药物作用72h后的IC50为10.78ng/ml。 2低浓度及高浓度雷公藤内脂醇对coc/ddp细胞均有明显抑制作用,其抑制作用的机制可能与其诱导coc/ddp细胞衰老及细胞凋亡有关。 3本研究以coc/ddp为体外实验模型,发现雷公藤内脂醇对coc/ddp细胞有明显的抑制作用,为寻找耐顺铂卵巢癌的有效治疗药物提供了信息,为雷公

关键词：雷公藤内脂醇 coc1/ddp MTT法透射电子显微镜