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UC-MSC移植对cia大鼠免疫细胞亚群免疫功能的调节作用

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中国实验血液学杂志 2014年第1期22卷 166-170页

作者：顾健林传明顾蔚蔡心珍李邹任敏敏孙幸倪军沈连军吴蔚何斌孙梅张育扬州大学临床医学院血液科江苏省扬州市血液病学研究所扬州225001 赣南医学院附院血液科江西赣州341000 徐州医学院血液科江苏徐州221002

本研究旨在观察脐带间充质干细胞(Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UC-MSC)移植对cia(collagen typeⅡ-induced Arthritis,cia)大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、辅助性Th17细胞及中性粒细胞的影响,初步探讨UC-MSC移植对cia大鼠免疫细胞亚群的调节作用。大鼠分为3组:cia组(模型组),UC-MSC治疗组及空白对照组。经尾静脉给cia大鼠注射UC-MSC,以流式细胞术(FCM)检测大鼠外周血CD4+CD25+细胞比例及中性粒细胞表面NCD11b表达,以酶联免疫吸附试验(ELISA)观察大鼠血清白介素-17(IL-17)水平。结果表明:模型组大鼠外周血NCD11b平均荧光强度(MFI)及IL-17水平均明显高于同期空白对照组,CD4+CD25+细胞比例则显著降低(P大鼠NCD11b及IL-17水平显著低于模型组(P0.05)。结论:UC-MSC可上调cia大鼠外周血Treg比例,抑制Th17细胞分泌IL-17及中性粒细胞的活性,减轻机体免疫性炎症反应,减少促炎因子的释放,诱导机体免疫重建。

关键词：脐带间充质干细胞 cia大鼠 Treg细胞 IL-17 免疫调节

cia大鼠炎症网络因子与易栓状态关系实验研究及中药干预

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CIA大鼠炎症网络因子与易栓状态关系实验研究及中药干预

作者：韩乔燕扬州大学

学位级别：硕士

目的:为了探讨炎症网络因子对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)免疫炎性血管病变的致病作用与易栓状态关系,课题建立了以Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(collagen typeⅡ-induced arthritis, cia)大鼠模型,研究cia大鼠炎症网络... 详细信息

目的:为了探讨炎症网络因子对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)免疫炎性血管病变的致病作用与易栓状态关系,课题建立了以Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(collagen typeⅡ-induced arthritis, cia)大鼠模型,研究cia大鼠炎症网络与易栓状态关系,并观察中药丹参、小檗碱的干预作用。方法:以Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(complete Freund’s Adjuvant, CFA)共同建立cia大鼠模型。药物组共分5组均于初次免疫次日灌胃给药;cia模型组每天灌服1.5ml蒸馏水;正常对照组自由饮水。各组大鼠每周进行一次AI评分,于第35天心脏采血,分离血清,予酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清IL-6、D-D水平,Western Blot法检测MMP-9的表达并计算相对含量;处死大鼠后取膝关节进行常规病理和免疫组织化学检测滑膜CD40。结果:1、Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂诱导大鼠关节炎症状,成功复制出RA动物模型,cia大鼠出现明显的局部持续关节肿胀、关节活动障碍等临床表现。组织病理学可见滑膜增厚,大量炎症细胞呈弥漫性或局限性浸润,纤维组织增生。2、cia大鼠血清IL-6、MMP-9、D-D水平明显增高于正常对照组(P大鼠血清IL-6、MMP-9、D-D水平明显低于模型组和单用小檗碱组(P0.05)。结论:1、cia大鼠发病过程中炎症网络因子释放增高,参与形成RA的免疫性关节和滑膜病变的病理过程,是促进RA发生易栓状态或肢端局部血栓形成的病理基础。2、中药丹参联合MTX治疗改变相关指标疗效显著优于两药单用组。提示丹参有协同MTX的抗免疫炎性作用,可使炎症网络因子水平降低,改善免疫炎性所致的易栓状态。3、小檗碱与MTX联合用药对抑制cia大鼠炎症网络因子有一定的作用,但低于丹参联合MTX治疗组。单用小檗碱该作用不明显。

关键词： cia大鼠炎症网络因子易栓状态 IL-6 CD40 MMP-9 D-D

脐带间充质干细胞对cia大鼠炎症因子的干预

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第36期15卷 6701-6704页

作者：李慧顾健林传明马莉沈连军吴蔚汪中强扬州大学医学院江苏省扬州市225001 扬州大学临床医学院扬州市血液学研究所江苏省扬州市225001

背景:脐带间充质干细胞可表达多种胚胎干细胞的特有分子标志,具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低等特征。目的:观察脐带间充质干细胞对类风湿性关节炎免疫炎性的病理过程的干预作用。方法:实验分为3组,建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿性... 详细信息

背景:脐带间充质干细胞可表达多种胚胎干细胞的特有分子标志,具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低等特征。目的:观察脐带间充质干细胞对类风湿性关节炎免疫炎性的病理过程的干预作用。方法:实验分为3组,建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎模型大鼠,脐带间充质干细胞组于造模后第4周经大鼠尾静脉注射脐带间充质干细胞,模型组注射生理盐水。结果与结论:治疗后第7天及第35天模型组大鼠血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、血管细胞黏附分子1和中性粒细胞表面CD11b的表达水平均高于正常组(Pcia大鼠的炎症因子释放和抑制内皮细胞的异常活化,有利于缓解类风湿性关节炎的免疫炎性关节症状。

关键词：脐带间充质干细胞 cia大鼠炎症因子血管细胞黏附分子白细胞介素

不同桂枝配伍对cia大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6因子的影响

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中药药理与临床 2013年第6期29卷 98-100页

作者：彭代平汤小虎颜永明周瑞彬万春平云南中医学院昆明650011 云南省中医医院昆明650021

目的:观察桂枝配伍对类风湿性关节炎模型促炎细胞因子(PICK)的调控作用。方法:以Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的免疫性关节炎(cia)大鼠为RA动物模型,通过关节炎指数观察桂枝、桂枝配伍附子、桂枝配伍川乌、桂枝配伍白芍及桂枝配伍当归组的治疗效果... 详细信息

目的:观察桂枝配伍对类风湿性关节炎模型促炎细胞因子(PICK)的调控作用。方法:以Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的免疫性关节炎(cia)大鼠为RA动物模型,通过关节炎指数观察桂枝、桂枝配伍附子、桂枝配伍川乌、桂枝配伍白芍及桂枝配伍当归组的治疗效果;采用ELISA法测定大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)活性。结果:模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6含量明显升高;经治疗后桂枝及各配伍组关节炎指数明显均降低;与模型组比较,桂枝组(1.8g/kg)明显降低TNF-α(Pcia大鼠血清中异常增高的TNF-α、IL-6浓度,提示这可能是其治疗RA的作用机理之一。

关键词：血清TNF-α IL-1β cia大鼠促炎细胞因子配伍组 IL-6 桂枝肿瘤坏死因子-α

瑞香素对cia大鼠脾T淋巴细胞杀瘤效应的影响

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时珍国医国药 2017年第1期28卷 33-35页

作者：王洁莹刘玮郑茂况南珍曾小平傅颖媛南昌大学基础医学院江西南昌330006

目的探讨瑞香素对cia大鼠脾T淋巴细胞杀瘤效应的影响。方法建立胶原诱导关节炎(cia)大鼠模型。大鼠随机分为健康对照组、cia模型对照组、瑞香素治疗组、阳性药物对照组,连续治疗28天后处死大鼠,分离脾细胞。MTT法测定Con A诱导大鼠脾T... 详细信息

目的探讨瑞香素对cia大鼠脾T淋巴细胞杀瘤效应的影响。方法建立胶原诱导关节炎(cia)大鼠模型。大鼠随机分为健康对照组、cia模型对照组、瑞香素治疗组、阳性药物对照组,连续治疗28天后处死大鼠,分离脾细胞。MTT法测定Con A诱导大鼠脾T淋巴细胞增殖率。MTT法检测大鼠脾T淋巴细胞对瘤细胞(肝癌细胞株SMMC-7721)的杀伤率。结果 1瑞香素治疗组脾T淋巴细胞增殖率为(161.11±14.05)%,与cia模型对照组(55.61±10.88)%、阳性药物对照组(13.00±12.14)%、健康对照组(101.35±16.79)%比均明显增高(P大鼠脾T淋巴细胞对瘤细胞杀伤率为(23.50±11.08)%,与cia模型对照组(15.89±8.77)%、阳性药物对照组(7.74±8.84)%比均明显增高(Pcia大鼠脾T淋巴细胞增殖率和脾T淋巴细胞对瘤细胞杀伤率,有效促进cia大鼠免疫功能。

关键词：瑞香素 cia大鼠脾T淋巴细胞杀瘤效应

超顺磁性氧化铁携载Uc-MSC干预cia大鼠炎症反应的研究

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超顺磁性氧化铁携载Uc-MSC干预CIA大鼠炎症反应的研究

作者：李慧扬州大学

学位级别：硕士

目的：为了研究脐带间充质干细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells, Uc-MSC）对类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）免疫炎性病理过程的治疗作用,课题选择SD大鼠建立了类风湿关节炎（collagen type Ⅱ-induced arth... 详细信息

目的：为了研究脐带间充质干细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells, Uc-MSC）对类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）免疫炎性病理过程的治疗作用,课题选择SD大鼠建立了类风湿关节炎（collagen type Ⅱ-induced arthritis, cia）模型,采用超顺磁性氧化铁（Superparamagnetic nanoparticles,SPIO）携带Uc-MSC,通过MRI下成像的方法观察其在cia大鼠病变关节聚集和对RA炎症网络的干预作用。研究对象： cia大鼠方法：以Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂（complete Freund’s Adjuvant, CFA）建立cia大鼠模型。实验分为5组：对照组、造模组、Uc-MSC组、超顺磁性氧化铁组（Superparamagnetic nanoparticles, SPIO）及超顺磁性氧化铁纳米结合Uc-MSC组（SPIO-UCMSC）,每组10只,其中Uc-MSC组、超顺磁性氧化铁组及超顺磁性氧化铁纳米结合Uc-MSC组完成造模后一周经尾静脉分别给予Uc-MSC、SPIO、 SPIO-UCMSC各0.5ml注射。所有实验组大鼠每周予以AI评分,第5周于MRI下成像,治疗后第1周及第5周于腹主静脉采血,3ml置于血清管中,分离血清后予酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清白介素-1（interleukin-1,IL-1）、白介素-6、白介素-18、肿瘤坏死因子-α （Tumor necrosis factor-α）、血管细胞黏附分子（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）;余2ml置肝素抗凝管中,以流式细胞术（flow cytometry, FCM）检测中性粒细胞表面CD11b的表达：处死大鼠后取膝关节进行常规病理检测了解滑膜增生情况。结果： 1、以Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂成功造模cia大鼠,经AI评分、关节X线片以及关节滑膜组织病理证实。 2、造模组cia大鼠血清IL-1、IL-6、IL-18、TNF-α VCAM-1及中性粒细胞表面CDllb的表达水平明显增高于对照组（P＜0.05）;含有Uc-MSC组上述指标水平于治疗后第1周、第5周均降低（P＜0.05）,AI评分亦降低。 3、SPIO-UcMSC组和Uc-MSC组于治疗后第5周血清炎症因子水平低于治疗后第1周和模型组（P＜0.05）,SPIO-UcMSC组与其他组比较大鼠下肢于MRI下可见明显低密度影。 ***-UcMSC组和Uc-MSC组治疗后对血清炎症因子水平的影响相似,两组间无统计学差异（P＞0.05）。结论： 1、cia大鼠发病过程中炎症网络因子释放明显增高,是参与形成RA的免疫性关节炎和滑膜病变病理过程的重要因素。 2、SPIO-UcMSC在病变关节浓聚,并于MRI下显影且成像清楚,说明脐带间充质干细胞有向炎症损伤部位聚集的趋化性。 3、Uc-MSC治疗后cia大鼠血清IL-1、IL-6、IL-18、TNF-α VCAM-1水平,中性粒细胞表面CD11b的表达水平有不同程度的降低,并改善AI评分,提示Uc-MSC能抑制类风关炎症因子的释放,改善RA的免疫炎性。

关键词： cia大鼠炎症粘附因子脐带间充质干细胞超顺磁性氧化铁

清热活血方对cia大鼠滑膜组织B细胞浸润程度及IL-21、CXCL13表达的影响

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清热活血方对CIA大鼠滑膜组织B细胞浸润程度及IL-21、CXCL13表达...

作者：李剑明中国中医科学院

学位级别：硕士

目的:观察并比较清热活血方、雷公藤多苷、甲氨蝶呤(MTX)三种药物对胶原诱导关节炎(cia)大鼠滑膜组织B细胞、浆细胞浸润程度及白介素(IL)-21、B淋巴细胞趋化因子(CXCL13)、抗环瓜氨酸多肽抗体(CCP)表达功能的影响,探讨三种药物治疗类风... 详细信息

目的:观察并比较清热活血方、雷公藤多苷、甲氨蝶呤(MTX)三种药物对胶原诱导关节炎(cia)大鼠滑膜组织B细胞、浆细胞浸润程度及白介素(IL)-21、B淋巴细胞趋化因子(CXCL13)、抗环瓜氨酸多肽抗体(CCP)表达功能的影响,探讨三种药物治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)对滑膜组织CD19+B细胞相关功能影响的作用机制,也为中药清热活血方治疗RA发挥综合治疗效果提供新的实验证据。方法:将60只健康SD大鼠(雌雄各半分笼饲养)按照体重随机区组分组分为5组,分别设为正常对照组、cia模型组、雷公藤多苷组、清热活血方组、甲氨蝶呤(MTX)组。除正常对照组外,其余各组均使用牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂二次免疫诱导造模,形成cia关节炎模型,首免与二免间隔一周。首次免疫第10天开始按照既定分组,分别给予生理盐水、雷公藤多苷片、清热活血方、MTX片灌胃给药干预。将雷公藤多苷片制备成0.625mg/ml浓度的混悬液,清热活血方煎取浓缩至以生药量为2g/ml浓度,甲氨蝶呤片制备1mg/ml浓度的混悬液,均严格以体重0.1kg·1ml的剂量灌胃,清热活血方与雷公藤多苷每天一次,MTX一周两次。每日记录体重变化,每隔3日,4日固定时限测量记录后肢肿胀程度。用药30天后各组大鼠均以水合氯醛麻醉后,腹腔主动脉采血后离心收集血清,使用ELISA法分别检测各组大鼠血清IL-21、CXCL13、CCP分子表达的定量。留取双下肢膝关节滑膜组织,每组采集3只(雌雄比为1:2),通过免疫组化试验检测滑膜中B淋巴细胞特异性膜蛋白分子CD19,浆细胞特异性膜蛋白分子C D138的表达,使用ImageProPlus6.0软件统计分析特异标记分子的平均光密度(MOD)值,剩余大鼠的滑膜组织分别使用Real-time PCR法检测各组滑膜组织IL-21、CXCL13、激活诱导的胞苷脱氨酶(AID)的mRNA表达水平;ELISA法检测滑膜匀浆IL-21、CXCL13、CCP分子表达的定量;Western-Blot法检测滑膜组织中AID的活化情况。留取下肢踝关节做病理HE染色切片,扫描观察并比较各组踝关节滑膜增生与骨破坏程度的差异。结果:1.关节肿胀度变化雌雄大鼠均于首次造模后第10天起开始出现关节肿胀,雄性在第21天时,雌性在第17天时,足肿胀程度达到最高峰。此后肿胀开始出现消退,相比与模型组,各组用药对大鼠足肿胀程度均有减缓作用,雌雄大鼠对三种药物的治疗反应表现出一致性,清热活血方组肿胀程度最低,雷公藤多苷次之,甲氨蝶呤对雌雄大鼠的肿胀程度控制稍差。在首免后第38天时,三种药物对大鼠足肿胀的抑制程度无明显差别。2.大鼠关节病理切片正常对照组大鼠关节结构完整,呈正常形态。模型组可见明显的滑膜增生,滑膜与骨质边缘出现融合迹象,骨质出现明显不规则侵蚀消融,双侧关节间隙明显狭窄或消失。清热活血方组较cia模型组关节囊内滑膜组织增生程度较轻,关节连接部位未见大面积滑膜组织与骨质融合现象,关节面尚属完整,关节腔隙轻度狭窄;雷公藤多苷组大鼠关节囊内出现大面积滑膜与骨质融合迹象,出现轻度的骨侵蚀,两侧关节间隙几近消失;MTX组滑膜增生严重,出现大面积与骨质融合的迹象,与模型组情况近似,关节间隙基本消失。3.大鼠滑膜组织免疫组化实验相比于正常对照组,大鼠首次造模40天后滑膜组织出现大量的B淋巴细胞、浆细胞浸润,正常对照组只在血管周围B淋巴细胞标记分子比较明显,且正常对照组滑膜组织中几乎没有浆细胞浸润。通过统计分析比较特异标记物蛋白的MOD值,发现模型组滑膜组织有大量浆细胞浸润,与正常对照组比较有显著差异(P大鼠滑膜组织B细胞、浆细胞浸润数量,较模型组有不同程度减少。清热活血方与MTX对B细胞浸润的抑制程度接近,相较模型组有统计意义的改善(Pcia模型组比较有显著差异(P=0.002,cia模型组血清中IL-21、CXCL13、CCP抗体含量明显升高(P大鼠血清中IL-21、CXCL13、CCP含量均降低(P值均0.05)。但雷公藤相较于甲氨蝶呤能够降低血清CCP抗体的含量,而且与模型组相比有统计学差异(P=0.008,<0.01)5.滑

关键词：类风湿关节炎 cia大鼠清热活血方雷公藤多苷甲氨蝶呤 IL-21 CXCL13 B淋巴细胞浆细胞

甘草附子汤和痛痹方对cia大鼠抗炎及免疫调节机制的研究

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甘草附子汤和痛痹方对CIA大鼠抗炎及免疫调节机制的研究

作者：李宝丽天津医科大学

学位级别：硕士

目的：类风湿关节炎(RA)是以滑膜慢性炎症和关节破坏为特点的自身免疫性疾病，病因和发病机制尚不完全清楚。RA的滑膜病理学表现以T淋巴细胞为主的大量炎细胞浸润、滑膜衬里层细胞增殖、血管新生及血管翳形成。活化增殖的淋巴细胞和滑... 详细信息

目的：类风湿关节炎(RA)是以滑膜慢性炎症和关节破坏为特点的自身免疫性疾病，病因和发病机制尚不完全清楚。RA的滑膜病理学表现以T淋巴细胞为主的大量炎细胞浸润、滑膜衬里层细胞增殖、血管新生及血管翳形成。活化增殖的淋巴细胞和滑膜细胞的过度增生是导致RA关节炎症和软骨及骨破坏的关键因素。细胞因子是滑膜炎症反应和免疫应答的重要介质，具有促炎、抑炎及正负反馈的免疫调节作用，参与滑膜病理变化的全过程。 RA属中医“痹证”范畴，风寒湿邪侵袭，痰湿瘀血阻滞经络而致关节肿胀畸形是其主要病机。甘草附子汤是治疗寒湿痹的经典方剂，在此基础上加入活血化瘀通络药物而组成的痛痹方，临床运用治疗RA取得良好疗效。为探讨温经通络与温经通络加活血化瘀法在RA治疗中的抗炎及免疫调节机理，本实验以cia大鼠为模型，观察甘草附子汤和痛痹方对滑膜组织病理学、滑膜T细胞亚群的影响及相关细胞因子表达水平的动态变化。方法： 1．建立Ⅱ胶原诱导关节炎大鼠模型;2．测量大鼠足肿胀度，计算肿胀率;3．检测血清SA，用ELISA法检测血清IL-2和TNF-α水平;【19附1”汤和枯痹万叫厂I人大鼠抗炎及免疫调育饥制的阶究 4．采用免疫组化技术，检测大鼠滑膜中T细胞亚群及细胞因子 TGF小和FGF的表达，用图像分析系统进行分析处理;5．通过光镜、电镜观察实验大鼠滑膜组织病理学形态及超微结构的变化。结果： ***大鼠有明显持续的局部关节肿胀而少红热的临床表现，组织病理学可见滑膜淋巴细胞浸润、滑膜衬里层增生、新血管生成及血管籍形成等。 2．甘草附子汤和痛痹方可明显抑制cia大鼠关节肿胀率，光镜及电镜观察滑膜组织病理学形态有意改善。 3．甘草附于汤和痛痹方治疗cia大鼠3W时，血清SA水平较模型组显著性降低，用药6W后，血清SA恢复至接近正常水平。 4．用药3W后，中药组大鼠血清IL2和w a的水平均较模型组显著性降低，用药6W后，各组均接近正常水平。 5．甘草附子汤和痛痹方均可有效抑制大鼠滑膜组织中CD4＋T细胞的表达，甘草附子汤同时可有意地上调CDS＋T细胞的表达，降低T细胞亚群比值。 6．甘草附子汤和痛痹方可显著性上调TGF小和下调FGF细胞因子在大鼠滑膜中的表达。结论：cia大鼠是较为理想的寒湿痹型RA实验性关节炎模型。 3 I－19附广汤和’m阵方川〔lA大鼠抗炎及免疫凋川n刷的U阿c我们对细胞因子和炎症介质的检测结果证实，在cia大鼠的治疗中甘草附子汤和痛痹方通过抑制某些炎症介质的活性、调控相关细胞因子的表达及改善滑膜中T细胞亚群的比例，达到并完成抗炎和免疫调节的作用。而两方剂通过抑制滑膜细胞增殖和新血管形成，所表现的对关节滑膜和软骨的保护作用提示，温经通络中药对寒湿痹型RA的治疗和保护作用的关键，与调节滑膜某些细胞因子的表达密切相关。

关键词：类风湿关节炎 cia大鼠细胞因子 T细胞亚群组织病理学免疫组化

臭氧关节腔注射对cia大鼠疗效以及RKL/OPG系统与趋化因子作用机制的研究

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臭氧关节腔注射对CIA大鼠疗效以及RKL/OPG系统与趋化因子作用机制...

作者：刘宁宁山西医科大学

学位级别：硕士

目的:观察臭氧(03)关节腔注射对cia模型大鼠的干预疗效,并在血清水平探讨臭氧关节腔注射之后,对cia大鼠血清中参与骨代谢因子RANKL、OPG以及炎性趋化因子MCP-1、RANTES、CXCL10水平的影响,进一步在组织和分子水平探讨臭氧关节腔内注射对... 详细信息

目的:观察臭氧(03)关节腔注射对cia模型大鼠的干预疗效,并在血清水平探讨臭氧关节腔注射之后,对cia大鼠血清中参与骨代谢因子RANKL、OPG以及炎性趋化因子MCP-1、RANTES、CXCL10水平的影响,进一步在组织和分子水平探讨臭氧关节腔内注射对cia大鼠骨破坏通路RANKL/OPG和其重要转接蛋白TRAF6以及CXCL10/CXCR3趋化轴的影响。方法:将40只体重及鼠龄相当的Wistar大鼠分为2组,正常组(8只)和造模组(32只),CII+CFA对造模组2次免疫,建立cia大鼠模型,造模成功(24只)后随机分为cia组8只、O3组8只;MTX组8只。O3组双踝关节内注射浓度为40μg/ml的O3各1ml,每周1次,共注射3周。MTX组腹腔注射0.9mg/kg,每周1次,共3周。分别测量双足肿胀度、评估关节炎指数和影像学评分对cia大鼠疗效评估。用高通量流式多因子检测技术测定各组大鼠血清中子RANKL、OPG、MCP-1、RANTES、CXCL10的水平。应用免疫组化技术检测滑膜组织表达TRAF6和CXCR3水平;应用RT-PCR方法检测淋巴结、滑膜、脾脏组织中RANKL、OPG、TRAF6和CXCL10、CXCR3的m RNA表达水平;两组间比较用t检验或Wilcoxon秩和检验。结果:1.臭氧关节腔注射对cia大鼠的疗效:40ug/ml的臭氧关节腔注射之后足肿胀度、关节炎指数和影像学评分明显改善,提示臭氧关节腔注射对cia大鼠有明确的疗效2.对骨破坏系统的影响:1)血清中RANKL、OPG、RANKL/OPG变化:?RANKL和RANKL/OPG:cia组与正常组相比明显升高(Pcia组相比明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。?OPG水平:各组间差异无统计学意义(P>0.05)。2)滑膜中TRAF6蛋白表达cia组滑膜细胞TRAF6蛋白表达强于正常组,MTX组和O3组TRAF6蛋白表达弱于与cia组;O3组TRAF6蛋白表达弱于MTX组;3)淋巴结、滑膜、脾脏中RANKL/OPG及TRAF6m RNA表达(1)淋巴结和滑膜中:RANKL/OPG比例和TRAF6:cia组m RNA与正常组相比升高(Pcia组降低,差异有统计学意义(P0.05)。(2)脾脏中:cia组TRAF6的m RNA表达较正常组明显升高,差异有统计学意义(Pcia组明显降低(P0.05)。RANKL/OPG比例各组间无明显差异(P>0.05)。3.对趋化因子的影响:1)血清中MCP-1、RANTES、CXCL10水平(1)MCP-1、RANTES:cia组与正常组相比明显升高,差异有统计学意义(Pcia组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)CXCL10:cia组与正常组相比明显升高(Pcia组相比明显降低,差异有统计学意义(P0.05)2)滑膜中CXCR3蛋白表达cia组滑膜细胞CXCR3蛋白表达强于正常组,MTX组和O3组CXCR3蛋白表达弱于与cia组;O3组CXCR3蛋白表达弱于MTX组3)淋巴结、滑膜、脾脏中CXCL10、CXCR3m RNA表达(1)滑膜中:cia组与正常组相比明显升高(Pcia组明显降低(P0.05)(2)淋巴结和脾脏中O3组与cia组无明显差异(P>0.05)结论:1.40ug/ml的臭氧关节腔注射之后可改善cia大鼠关节症状,阻止骨破坏,疗效显著。2.大鼠造模组中RANKL/OPG系统参与了其骨破坏的发生发展,其作用机制可能为下游信号通路转接蛋白TRAF6上调而致RANKL/OPG比例上升。3.臭氧关节腔治疗对cia大鼠骨破坏系统的作用,是通过减少下游信号通路转接蛋白TRAF6的表达,纠正RANKL/OPG系统的失衡,减少破骨细胞的形成,减轻cia大鼠的骨质的破坏。其在关节局部作用效果优于MTX全身治疗;4.在cia大鼠免疫过程中存在CXCL10/CXCR3趋化轴的紊乱,在cia大鼠形成过程中其表达水平上调;5.臭氧治疗对CXCL10/CXCR趋化因子轴的影响表现为,能降低的cia大鼠滑膜中CXCL10、CXCR3m RNA的表达量,其在局部滑膜中抑制CXCL10/CXCR3趋化因子轴的作用,可能是其减轻cia大鼠关节炎症的作用机制之一。

关键词：臭氧关节腔注射 cia大鼠类风湿关节炎 RANKL OPG TRAF6 MCP-1 RANTES CXCL10 CXCR3