检索结果-南通市图书馆

作者：高尚南京医科大学

学位级别：硕士

第一部分CIK细胞为载体TNF-α溶瘤腺病毒靶向杀伤裸鼠胃癌的实验研究目的:胃癌复发转移后现行的综合治疗方法效果差。应用外源性TNF-ɑ杀伤胃癌易被机体清除,达不到良好的治疗效果。本研究希望解决晚期胃癌治疗效果差的难题。方法:本研... 详细信息

第一部分CIK细胞为载体TNF-α溶瘤腺病毒靶向杀伤裸鼠胃癌的实验研究目的:胃癌复发转移后现行的综合治疗方法效果差。应用外源性TNF-ɑ杀伤胃癌易被机体清除,达不到良好的治疗效果。本研究希望解决晚期胃癌治疗效果差的难题。方法:本研究利用全自动磁珠提取纯化系统从正常人体外周血中分离CIK细胞,通过分子基因工程改造溶瘤腺病毒携带TNF-ɑ基因,建立胃癌裸鼠模型,来研究胃癌移植瘤变化、CIK细胞中TNF-ɑ表达以及胃癌组织坏死的临床病理特点。结果:CIK靶向到达胃癌组织,以CIK细胞为载体携带TNF-α溶瘤腺病毒靶向到达胃癌组织,通过CIK细胞免疫杀伤胃癌细胞,裂解后释放出的TNF-α溶瘤腺病毒近距离感染胃癌细胞。结论:重组溶瘤腺病毒感染(AD-TNF-α-EGFP)CIK细胞通过自身增殖杀伤胃癌细胞同时,使感染的胃癌细胞自分泌释放TNF-ɑ近距离内分泌式杀伤胃癌细胞,起到三重生物杀伤胃癌细胞的作用。第二部分cd90在胃癌中表达及其临床意义目的:通过免疫组织化学双染法检测cd90在胃癌组织、癌旁组织和慢性胃炎组织中的表达,以研究其与胃癌临床病理因素及预后的关系,探讨cd90在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:病例标本从青岛市市立医院普外科数据库中选取自2006年1月至2008年6月手术切除的胃癌组织96例,和同一病例来源的正常组织标本(距肿瘤组织大于5cm),以及慢性萎缩性胃炎组织20例来源于胃镜活检标本。临床病理资料及随访资料完整,通过电话或门诊方式随访,时间截止于2014年1月。对这96名胃癌患者进行随访,收集包括年龄、性别、发病部位、病理类型、TNM分期等病例资料。应用SPSS17.0统计学软件进行数据分析,cd90表达量以及临床病理资料采用X2检验。采用Cox多因素回归分析进行生存分析,生存曲线应用Kaplan-Meier方法。以Pcd90表达阳性率在胃癌组织中为66.7%(64/96),在癌旁正常组织中为15.6%(15/96),在慢性胃炎组织中为15.0%(3/20),差异有统计学意义(pcd90在胃癌中的表达与TNM分期有关(P=0.014),p T(P=0.02),p N(P=0.017)和p M(P=0.045)。而cd90的表达水平与年龄、性别、病理类型及发病部位无关(p>0.05)。(3)另外在多因素生存分析中,cd90高表达的患者均有更差的5年总生存率(pcd90可能与胃癌的侵袭与转移有相关性,有可能为治疗提供一个新的分子靶点,并判断胃癌患者的预后。

关键词： CIK TNF-ɑ 胃癌腺病毒 cd90 胃癌免疫组化双染

成纤维细胞cd90表达与增生性瘢痕形成机理的相关分析

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成纤维细胞CD90表达与增生性瘢痕形成机理的相关分析

作者：杨炳林苏州大学

学位级别：硕士

目的:为深入研究增生性瘢痕的发病机理,用免疫组织化学方法分别检测cd90、TGF-β、α-SMA、I型和III型胶原在增生性瘢痕、瘢痕交界处和正常皮肤组织成纤维细胞中的表达水平,探讨与瘢痕异常增生相关的影响因素,并分析成纤维细胞的cd90表... 详细信息

目的:为深入研究增生性瘢痕的发病机理,用免疫组织化学方法分别检测cd90、TGF-β、α-SMA、I型和III型胶原在增生性瘢痕、瘢痕交界处和正常皮肤组织成纤维细胞中的表达水平,探讨与瘢痕异常增生相关的影响因素,并分析成纤维细胞的cd90表达与其增殖、合成、收缩等功能的相关性。方法:1、取手术切除的带有少量正常皮肤的瘢痕组织18例,将组织标本固定、石蜡包埋,组织切片HE染色证实临床诊断后,分为增生性瘢痕组、瘢痕交界处组、正常皮肤组,每组各18例。2、选取组织蜡块,根据HE染色、形态学观察确定典型病变部位,从每例标本中选取1个采样点,构建包括54点组织标本的芯片蜡块,阵列为9×6。3、从芯片蜡块中切取5张切片,应用免疫组织化学方法对组织芯片进行染色,对5张组织芯片分别检测cd90、TGF-β、α-SMA、I型和III型胶原在增生性瘢痕、瘢痕交界处和正常皮肤组织中的表达水平,将所得结果进行统计学分析。4、比较分析成纤维细胞的cd90表达与其它4种蛋白表达的相关性。结果:1、成功构建研究增生性瘢痕的组织芯片,用于免疫组化检测和多因素分析。2、免疫组织化学染色显示18例增生性瘢痕组织中11例有cd90阳性表达的成纤维细胞,18例瘢痕交界处组织有8例阳性表达,18例瘢痕周围正常皮肤组织只有3例阳性表达,增生性瘢痕组与瘢痕交界处组相比无显著性差异(P>0.05),两组与正常皮肤组相比均有显著性差异(P0.05),且TGF-β、α-SMA表达具有相关性。而两者在瘢痕周围正常皮肤组织中仅有少量表达,与增生性瘢痕和瘢痕交界处组织相比均有显著性差异(P0.05),增生性瘢痕以I型胶原为主,瘢痕周围正常皮肤以III型胶原为主。5、统计学分析发现增生性瘢痕成纤维细胞cd90和TGF-β、α-SMA的表达具有相关性。结论:1、组织芯片用于多因素比较研究具有高效率、质控好的优点,可用于增生性瘢痕的相关研究。2、在增生性瘢痕中,cd90阳性表达的成纤维细胞可能是瘢痕异常增生的特异表型。3、TGF-β在增生性瘢痕中的表达增强,提示TGF-β可能参与了增生性瘢痕的形成并起着重要的作用,故在预防和治疗增生性瘢痕中具有一定的临床意义。4、TGF-β可以诱导α-SMA在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达作用。5、增生性瘢痕组织中I型和III型胶原的合成及分布变化在瘢痕形成过程中起到重要作用。6、增生性瘢痕中成纤维细胞cd90和TGF-β、α-SMA的表达具有相关性,其在瘢痕异常增生过程中可能存在一定的协同关系。

关键词：增生性瘢痕 cd90 表型组织芯片免疫组织化学

干细胞表面标记（cd90）与肺癌顺铂耐药的相关性研究

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干细胞表面标记（CD90）与肺癌顺铂耐药的相关性研究

作者：况里杉第三军医大学

学位级别：硕士

背景：肺癌（Lung cancer)是当今社会最常见的恶性肿瘤之一，发病率及死亡率一直处于居高不下的状态，其5年生存率大约为15%[1]，引起肺癌患者低生存率的原因之一是肿瘤细胞对化疗药物形成耐药。因此，探索化疗耐药形成原因并寻找相应... 详细信息

背景：肺癌（Lung cancer)是当今社会最常见的恶性肿瘤之一，发病率及死亡率一直处于居高不下的状态，其5年生存率大约为15%[1]，引起肺癌患者低生存率的原因之一是肿瘤细胞对化疗药物形成耐药。因此，探索化疗耐药形成原因并寻找相应的防治方法必将提高肺癌疗效，并使众多肺癌患者获益。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)学说的提出为肿瘤发生机制的研究提供了新的思路，也为肿瘤化疗耐药机制研究提供了新的视角。肿瘤干细胞是在肿瘤细胞和组织中发现有着干细胞特性的小细胞群，该群细胞与其他类型干细胞特点相似，均具有多向分化潜能和自我更新能力。目前认为肿瘤干细胞是肿瘤发生的根源。许多研究证实肿瘤干细胞在肿瘤的发生、转移、侵袭、复发和耐药中具有重要的作用[2]。已有研究表明化疗耐药、自我更新能力和多向分化潜能均是肿瘤干细胞的重要特性[3][4]。而且，肿瘤干细胞耐化疗的特性是促使肿瘤化疗后复发的重要因素。因此，深入研究肿瘤干细胞与化疗耐药之间的关系，必将为逆转肿瘤的化疗耐药提供新的理论依据，有助于在肿瘤的根治方面取得突破性的进展。以细胞表面特异性分子标记和侧群细胞(side population，SP)为标志的分离方法是富集肿瘤干细胞的主要手段。目前大量研究提示间充质干细胞标记cd90是重要的肝癌干细胞分子表面标记物，而cd90是否是肺癌干细胞标记尚缺乏相关研究[5][6]。在前期研究中，我们课题组运用悬浮球培养方法高效分离和富集出肺癌干细胞，进一步的研究发现：与肺腺癌细胞系A549相比，A549细胞球的肿瘤干细胞标记物cd90的表达较高。通过平皿克隆形成试验、成球试验、裸鼠移植瘤实验提示cd90+A549细胞自我更新能力及体内成瘤能力均强于cd90-A549细胞，初步证实cd90有可能是肺癌干细胞的分选标记。本研究试图通过研究cd90与肺癌顺铂（cisplatin，cdDP）耐药的相关性，从耐药角度探讨cd90是否是肺癌干细胞标记。目的：研究cd90与A549细胞顺铂耐药的相关性，在耐药角度探讨cd90是否是肺癌干细胞分子标志物。方法： 1、通过成球实验、CCK-8、平皿克隆实验分别检测A549、A549/cdDP细胞的成球能力、体外增殖能力及克隆形成能力，初步探讨细胞干性与肺癌细胞耐药之间的关联;2、在上述研究基础上，流式细胞仪检测干细胞标志物cd90在A549、A549/cdDP贴壁细胞及细胞球中的比例，观察并比较两者之间的差异。 3、流式分选cd90+A549、cd90-A549细胞，然后通过细胞毒性试验、裸鼠移植瘤试验从体内外分别比较两者的顺铂耐药性。进一步研究cd90与肺癌耐药相关性。结果： 1、A549/cdDP细胞较亲代A549细胞在成球能力、体外细胞增殖能力及克隆形成能力方面均显著增强(pcdDP所含cd90阳性细胞比例均显著高于亲代A549细胞(pcd90+A549细胞的顺铂耐药性均显著强于cd90-A549细胞(pcdDP细胞的自我更新能力显著增强，且cd90+亚群细胞的比例显著增高;cd90+A549细胞的cdDP耐药性显著强于cd90-A549细胞;从不同方面均提示cd90高表达与A549肺癌细胞顺铂耐药相关，进而从耐药角度提示cd90可能是肺癌干细胞标志物。

关键词：肺癌肿瘤干细胞顺铂耐药性 cd90

组织芯片检测肝癌组织中cd90和EpCAM的表达

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组织芯片检测肝癌组织中CD90和EpCAM的表达

作者：代尚广西医科大学

学位级别：硕士

目的目前针对肝细胞癌的诊断上面有着比较严重的滞后性,待确诊疾病时大多数病人的病情已经到了中晚期。而且在肝细胞癌的治疗上面也是大同小异,仅仅局限于治疗肿瘤和阻止其转移和复发。外科手术、放化疗的手段都仅仅是为了减小肿瘤体... 详细信息

目的目前针对肝细胞癌的诊断上面有着比较严重的滞后性,待确诊疾病时大多数病人的病情已经到了中晚期。而且在肝细胞癌的治疗上面也是大同小异,仅仅局限于治疗肿瘤和阻止其转移和复发。外科手术、放化疗的手段都仅仅是为了减小肿瘤体积的大小。目前,全球对于肝癌的研究关注点集中在肝癌干细胞上面。新的研究表明去除肝癌干细胞可能会是未来肝癌主要的治疗模式。而肝癌干细胞表面标记物是存在于肝癌干细胞表面的一类小分子物质,它参与多种细胞信号的转导,在肝癌干细胞发生功能上面起到了非常重要的作用。研究肝癌干细胞标记物,可以了解肝癌细胞的特性,对肿瘤的分化、复制、转移等机制更加明了,对肝癌患者的愈后可能会提供一定的帮助。本实验研究肿瘤干细胞标记物cd90以及EpCAM在肝细胞癌患者的癌组织、癌旁组织以及癌旁正常肝组织中的表达情况,并对病人的生存期进行分析,探讨cd90和EpCAM在肝细胞癌中表达的意义,为肝癌的治疗、预后判断提供新的线索及思路。方法收集广西区肿瘤医院2012年到2013年间的肝细胞癌患者的癌组织、癌旁组织以及癌旁正常组织,同时收集每个患者的病史资料。制作组织蜡块以及组织芯片,HE染色的方法对病理组织进行确认,采用免疫组化的方法来检测cd90和EpCAM在肝癌组织、癌旁组织以及癌旁正常组织中的表达情况。结合已经取得的临床病史资料,对所得结果进行分析。结果1、肿瘤干细胞标记物cd90和EpCAM在肝癌组的阳性表达率高于癌旁组的阳性表达率。肝癌组跟正常组相对比,正常组跟癌旁组相对比差异同样也具有统计学意义。2、cd90表达跟门脉瘤栓、包膜完整度、临床分期、病理分级和民族上有相关性。cd90表达跟患者的年龄、所患肿瘤大小以及AFP值不具有相关性。EpCAM表达跟包膜完整度、临床分期、病理分级和民族有相关性,与年龄、肿瘤大小、门脉瘤栓、AFP值没有相关性。3、cd90和EpCAM阳性表达患者的生存率都低于阴性表达患者的生存率。两者P值都>O.05,生存率与肿瘤干细胞标记物cd9O和EpCAM表达无显著相关性。4、cd90在肝癌组织中的表达与EpCAM的表达两者具有呈正相关(rs=0.451,Pcd90和EpCAM在肝癌组织中的表达率高于癌旁组织和癌旁正常组织。2、结合患者的临床资料我们可以发现cd90和EpCAM的表达与包膜完整度、临床分期以及病理分级有相关牲。3、患者生存率与cd90和EpCAM的表达无显著相关性。4、cd90和EpCAM的表达呈具有呈正相关,提示两者可能同时参与了肝癌的发生和发展。

关键词：肝癌 cd90 EpCAM 组织芯片免疫组化预后

多孔丝素材料修复大鼠真皮缺损过程中成纤维细胞cd90表达及其生物学特性

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多孔丝素材料修复大鼠真皮缺损过程中成纤维细胞CD90表达及其生物...

作者：张印峰苏州大学

学位级别：硕士

目的:为深入研究丝素蛋白在修复大鼠皮肤缺损过程中的作用机理,用免疫组织化学方法分别检测cd90、TGF-βl、α-SMA、I、Ⅲ型胶原在天蚕丝素材料、家蚕丝素材料和海绵材料修复大鼠皮肤缺损过程中的表达水平,探讨材料对主要修复细胞的影响... 详细信息

目的:为深入研究丝素蛋白在修复大鼠皮肤缺损过程中的作用机理,用免疫组织化学方法分别检测cd90、TGF-βl、α-SMA、I、Ⅲ型胶原在天蚕丝素材料、家蚕丝素材料和海绵材料修复大鼠皮肤缺损过程中的表达水平,探讨材料对主要修复细胞的影响,分析成纤维细胞cd90表达及其增殖、合成、收缩等功能的相关性。方法:1、雄性SD清洁级大鼠144只,随机分为3组。A组为天蚕丝素材料组,n=48;B组为家蚕丝素材料组,n=48;C组为海绵材料组,n=48;应用3组材料复合大鼠自体刃厚皮片修复大鼠背部皮肤缺损(2cm×2cm)。分别在术后5d、10d、15d和25d各组取材,标本固定,石蜡包埋,组织切片,HE染色。2、根据HE染色结果确定取材部位,每个组织蜡块中选取1个采样点,不同时间点分别构建4块组织芯片蜡块,阵列均为6×6。每块芯片包含同一时间点的36点组织标本。3、组织芯片行免疫组织化学染色,检测cd90、TGF-βl、α-SMA、I、Ⅲ型胶原在不同时间点各组材料修复大鼠皮肤缺损过程中的表达水平,将所得结果进行统计学分析。4、分析成纤维细胞cd90表达与TGF-βl、α-SMA、I、Ⅲ型胶原4种蛋白表达的相关性。结果:1、移植术后A、B两组复合皮片生长良好、全部存活;C组移植皮片大部分变黑、结痂,并有脱落。2、成功构建丝素蛋白材料修复大鼠皮肤缺损实验的组织芯片,用于免疫组化染色。3、免疫组织化学染色显示术后第10d、15d时A、B两组cd90阳性成纤维细胞表达较多,25d时有所下降,A、B两组相比无显著意义(P>0.05);与C组相比较差异均有显著意义(P0.05),两者与C组相比较均有非常显著意义(P0.05),与C组比较有显著意义(Pcd90表达和TGF-βl、α-SMA表达具有相关性。结论: 1、天蚕丝素和家蚕丝素作为真皮支架材料没有明显差别,移植后局部炎性反应均较轻,具有良好的组织相容性,都可用作真皮缺损的修复材料。2、组织芯片具有效率高、质控好的优点,适合多因素比较研究,可用于修复大鼠真皮缺损的相关实验研究。3、丝素蛋白支架材料作为真皮模板早期能诱导创面周围和基底的成纤维细胞长入,后期可使cd90阳性成纤维细胞降低,可能减少成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,减轻瘢痕挛缩。4、实验结果提示在丝素蛋白支架材料修复大鼠真皮缺损中成纤维细胞cd90表达和TGF-βl、α-SMA表达具有相关性,三者之间可能存在一定的协同关系。

关键词：丝素蛋白组织芯片成纤维细胞 cd90 生物学特性

cd24、cd29、cd90及cd133在小鼠肾脏发育过程中的表达及意义

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CD24、CD29、CD90及CD133在小鼠肾脏发育过程中的表达及意义

作者：王晗睿锦州医科大学

学位级别：硕士

目的研究间充质干细胞标记物cd24、cd29、cd90及cd133在正常昆明小鼠肾脏发育过程中的时空表达及意义,在肾脏发生发育水平上为肾脏的损伤及修复提供理论依据。方法选取健康昆明小鼠,2月龄,体重24～28g,按雌雄比例1:1进行无垫料配对饲养... 详细信息

目的研究间充质干细胞标记物cd24、cd29、cd90及cd133在正常昆明小鼠肾脏发育过程中的时空表达及意义,在肾脏发生发育水平上为肾脏的损伤及修复提供理论依据。方法选取健康昆明小鼠,2月龄,体重24～28g,按雌雄比例1:1进行无垫料配对饲养,观察到阴栓脱落记为胚龄0.5d(E0.5d),生后1d记为P1d。根据发育时间段分别取E14.5d、E16.5d、P1d、P3d、P5d、P7d、P14d、P28d鼠肾脏,左肾制成石蜡切片,右肾制成冷冻组织标本用于免疫印迹检测。免疫组织化学染色法检测cd24、cd29、cd90及cd133在小鼠肾脏发育过程中的表达情况。右侧肾脏组织进行BCA定量,免疫印迹法检测上述标志物。另取生后1-5d天昆明小鼠肾脏组织,酶消化法分离细胞进行体外细胞培养,用免疫荧光检测方法测定贴壁细胞中上述标记物的表达情况。结果不同发育时间段的昆明小鼠肾脏免疫组化染色显示:cd24在E14.5-P1d表达于输尿管芽、S小体、逗号小体、肾小球内细胞以及肾小管上皮细胞,P3d-28d,在肾小球处表达变弱,主要表达肾皮质处近端小管和远端小管上皮细胞,在肾髓质处也有少量表达;cd29在E14.5-P3d表达位于输尿管芽、S小体、逗号小体、肾小管上皮细胞游离缘,P5d-28d,表达于近端小管和远端小管上皮细胞;cd90在E14.5d-E16.5d时间段表达于后肾间充质,P1d-28d表达于近端小管和远端小管上皮细胞,但在肾小体处不表达;cd133在E14.5d-E16.5d时间段表达逗号小体、S小体、后肾间充质和输尿管芽,P1d-28d表达于近端小管和远端小管上皮细胞,在肾乳头区域表达于集合管。免疫印迹检测结果显示:cd24表达含量在E14.5d时开始增加,P1d时达到高峰,随后开始下降;cd29表达含量在第P7d达到高峰,随后含量逐渐降低;cd90表达含量在第P14d达到高峰,随之含量降低;cd133表达含量在生后P3d达到最高,随之开始下降。原代细胞培养第14天出现长梭形细胞形态并逐渐形成克隆性生长,用免疫细胞荧光检测以上标志物都显示有阳性表达。结论间充质干细胞标记物cd24、cd29、cd90、cd133在肾脏发育过程中存在着一定的时空性,它们影响昆明小鼠肾脏发育情况,尤其是早期肾小体、肾小管和集合管的分化发育情况。

关键词：肾脏发生发育间充质干细胞 cd24 cd29 cd90 cd133

cd45，cd90对分离得到大鼠骨髓间充质干细胞纯度的鉴定

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CD45，CD90对分离得到大鼠骨髓间充质干细胞纯度的鉴定

作者：孙翠明中国医科大学

学位级别：硕士

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BW-MSCs)的分离方法;应用流式细胞仪,用小鼠抗大鼠cd45, cd90检测分离得到BW-MSCs的纯度。方法在无菌条件下,采集双侧股骨,胫骨,用适量DMED／F12培养液冲出骨髓。用... 详细信息

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BW-MSCs)的分离方法;应用流式细胞仪,用小鼠抗大鼠cd45, cd90检测分离得到BW-MSCs的纯度。方法在无菌条件下,采集双侧股骨,胫骨,用适量DMED／F12培养液冲出骨髓。用比重为1.073g／ml的Percol1分离液分离,取界面层,获取单个核细胞,用PBS液以1 000r／min离心洗涤,每次10 min,共2次。分离的细胞以5×104／cm2个接种于培养瓶。培养体系为高糖EMDM/F12(1:1),20%胎牛血清。在37℃,体积分数为5%CO2条件下培养,首次24 h更换培养液,去掉未贴壁细胞。每3d换液1次。每天在倒置相差显微镜下观察细胞形态。当细胞达到80%融合时,用1：1的0.1%胰蛋白酶和0.01%EDTA混合液消化,用含2%小牛血清的PBS洗涤后制成1.0×107／ml骨髓MSCs的单细胞悬液,加入EP管中。之后按说明,取一定量cd90-FITC和cd45-PE加入EP管中。4℃避光孵育30min,流式细胞仪检测。结果1、采用密度梯度离心法和贴壁法相结合可从大鼠骨髓中分离出骨髓间充质干细胞。新鲜分离细胞在倒置显微镜下观察呈圆形,大小不均一。24 h细胞贴壁,更换培养液后,见贴壁细胞呈圆形,椭圆形,多边形。48 h见贴壁细胞体积变大,大小不均一,其浆核分界清楚,折光性强。绝大多数为单核,圆形,位于细胞中心位置。而后细胞形态仍然以圆形,椭圆形为主,长梭形的细胞逐渐出现。10-12天后大部分细胞变为长梭形,少部分呈多角形。12天左右可达80%融合。2、密度梯度离心法分离和贴壁法相结合得到的细胞,经小鼠抗大鼠cd90-FITC和cd45-PE双染后,应用流式细胞仪检测三次实验分离得到的细胞,cd9+cd45细胞的百分比40.02%,43.80%,42.63%。结论1、用比重为1.073g／ml的Percoll分离液离心之后贴壁培养可从大鼠股骨胫骨中分离得到骨髓间充质干细胞。2、cd45, cd90双染鉴定密度梯度离心法与贴壁法相结合分离得到骨髓间充质干细胞的百分比约为42.15%。

关键词：骨髓间充质干细胞密度梯度离心法贴壁法分离鉴定 cd45 cd90

肝癌干细胞表面标志物CK19、cd90在化学诱癌过程中不同阶段的差异表达

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肝癌干细胞表面标志物CK19、CD90在化学诱癌过程中不同阶段的差异...

作者：张珍妮广西医科大学

学位级别：硕士

目的检测肝癌干细胞标志物CK19、cd90在联用DEN/CCl4/Ethanol化学诱发C57BL/6J小鼠肝癌过程中不同阶段的表达,从而说明肝癌干细胞表面标志物CK19、cd90在肝癌形成过程中的不同调控作用,并推测肝癌干细胞在肝癌形成过程中可能的作用机制... 详细信息

目的检测肝癌干细胞标志物CK19、cd90在联用DEN/CCl4/Ethanol化学诱发C57BL/6J小鼠肝癌过程中不同阶段的表达,从而说明肝癌干细胞表面标志物CK19、cd90在肝癌形成过程中的不同调控作用,并推测肝癌干细胞在肝癌形成过程中可能的作用机制。方法全部小鼠按照随机数字表法分为实验组和对照组,分笼饲养,标准化光照和自由进食及饮水。实验组为50只C57BL/6J雄性小鼠,通过联用DEN/CCl4/Ethanol化学法诱发肝癌,对照组为50只C57BL/6J雄性小鼠,仅以正常小鼠颗粒饲料喂养,并自由饮用灭菌普通水。观察小鼠的一般生长情况,每2周从实验组和对照组随机各抽取5只小鼠,处死后打开腹腔,观察肝脏表面情况,并摘取肝脏以获取小鼠肝组织标本（实验组中主要是切取含可疑病变的肝组织做标本）,进行病理学、RT-PCR、荧光实时定量PCR（FQ-RT-PCR）法、Western Blot流式细胞术等检测CK19、cd90基因及蛋白的表达情况。结果联用DEN/CCl4/Ethanol化学诱发C57BL/6J小鼠肝癌,整个诱癌过程中实验组和对照组小鼠均未出现小鼠死亡：现象,至诱癌第20周时,留存的实验组小鼠成瘤率100%。对照组小鼠生长状况良好,体重随着周龄增长而增加,平均体重由16g左右增加到30g左右,肝脏颜色红润,被膜光滑,质软,边缘较锐利,无结节;实验组小鼠活动减少,到化学诱癌第18周之后体重开始呈下降趋势,平均体重从29g下降到26g左右,化学诱癌第14周之前,肝组织被膜较光滑,颜色暗红,质地较软,HE染色病理结果,主要表现为肝脏的充血水肿,部分肝细胞变性坏死,炎症细胞浸润,并伴有部分肝细胞增生,呈药物性肝炎的表现,为慢性肝损伤期。化学诱癌第14周可见假小叶形成,间质有纤维组织增生,部分胆管上皮增生,并随着诱癌进展,肝细胞排列结构轻度紊乱,为肝硬化期。化学诱癌第16周处死的小鼠,肝脏表面出现明显的灰白色小结节,呈单发或者多发性,直径在1-3mm,镜下见肝细胞增生结节,结节内肝细胞呈不典型性增生,为非典型增生期。化学诱癌第18、20周时肝癌结节直径在5mm左右,呈多发性;病理切片显示为高、中分化的肝癌细胞,可见瘤巨细胞和病理性核分裂,为癌变期。RT-PCR, Western Blot定性和FQ-RT-PCR、流式细胞术定量的结果显示,在实验组和对照组间及诱癌不同阶段,CK19基因及蛋白在实验组诱癌第14周时开始低水平表达,诱癌第16周表达水平升高,诱癌第20周时显著高于对照组和早期实验组,（P＜0.05）;在实验组和对照组之间以及诱癌不同阶段cd90基因和蛋白表达水平的比较,均在诱癌第16周后开始出现表达差异,诱癌第20周时表达差异更明显（P＜0.05）,综上所述,与正常对照组比较,实验组CK19、cd90基因和蛋白的表达在诱癌不同的阶段存在差异表达,而且分别在化学诱癌第14周和第16周后出现表达,并且表达水平随着诱癌时间递增而逐渐升高,至诱癌第20周时均呈明显高表达。结论1、诱癌过程中无小鼠死亡,至诱癌第20周时,留存的小鼠成瘤率100%,病理学类型为中分化或者高分化肝细胞癌。2、定性和定量检测CK19基因和蛋白,在化学诱癌第14周后开始低水平表达,诱癌第16周后表达水平升高,诱癌第20周时高表达,与对照组和早期实验组比较有显著性差异,提示CK19在肝癌发生、发展过程中存在差异表达。3、定性和定量检测cd90基因和蛋白,在化学诱癌第16周后开始表达并呈现逐渐增高的趋势,至诱癌第20周时表达水平明显增高,与对照组和其他诱癌阶段实验组比较有明显差异,提示cd90的表达在化学诱导肝癌过程中呈动态变化。4、CK19和cd90基因和蛋白在诱癌过程中开始表达出现的时间差异,说明二者对肝癌形成过程的不同阶段发生不同的调控作用,二者的具体调控机制及有关信号通路的调控情况将在下一步进行深入研究。

关键词：肝癌干细胞 CK19 cd90 C57BL/6J 小鼠

病理性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞cd90表达及其生物学特征

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病理性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞CD90表达及其生物学特征

作者：苏卫国苏州大学

学位级别：硕士

目的:免疫组织化学法检测病理性瘢痕和周围正常皮肤组织中成纤维细胞cd90表达情况;采用组织块法原代培养建立病理性瘢痕成纤维细胞模型;使用免疫细胞化学法、免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜,检测体外培养的病理性瘢痕和正常... 详细信息

目的:免疫组织化学法检测病理性瘢痕和周围正常皮肤组织中成纤维细胞cd90表达情况;采用组织块法原代培养建立病理性瘢痕成纤维细胞模型;使用免疫细胞化学法、免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜,检测体外培养的病理性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中cd90表达情况,并分析cd90表达和成纤维细胞增殖、合成、收缩等功能的相关性。方法:1.取手术切除的瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮肤(瘢痕边缘)16例标本,组织切片HE染色进一步证实临床诊断后,分为瘢痕疙瘩组、瘢痕疙瘩周围正常皮肤组、增生性瘢痕组、增生性瘢痕周围正常皮肤组。2.免疫组织化学SABC法检测不同组别中成纤维细胞的cd90表达情况。3.每组标本中选取特异性较强的组织块各三例,原代培养这四种不同组织来源的成纤维细胞,通过观察细胞形态和增殖周期,检测体外培养的三种成纤维细胞生长活性差异。4.经过3次传代、自然纯化后得到性质稳定的成纤维细胞,冻存后复苏传1-3代,制成细胞爬片,免疫细胞化学SABC法染色检测cd90的表达情况。5.间接法免疫荧光双重标记(cd90和Ⅰ型胶原蛋白、cd90和Ki-67、cd90和α-SMA)每株细胞,激光共聚焦显微镜下观测细胞并摄像后,通过计算每系成纤维细胞cd90、Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的荧光值和Ki-67阳性细胞百分比,检测成纤维细胞中四种蛋白的表达情况。6.统计分析cd90表达与其他3种蛋白表达的相关性。7.共聚焦多通道、多层次扫描单个成纤维细胞,分析cd90和α-SMA表达的关系。结果:1.免疫组织化学染色显示4例瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤中未发现cd90阳性成纤维细胞,而12例增生性瘢痕组织中7例有较多肥大的cd90阳性成纤维细胞,增生性瘢痕周围正常皮肤中也有少量体积较小的cd90阳性细胞。2.组织块法原代培养建立了性状稳定的病理性瘢痕成纤维细胞模型。3.免疫细胞化学染色显示体外培养不同组织来源的细胞株均表达cd90。4.免疫荧光双重标记结合共聚焦扫描荧光定量发现增生性瘢痕来源成纤维细胞的cd90表达强于正常皮肤的(Pcd90表达和正常皮肤的表达无差异(P>0.05)。4.统计学分析未发现体外培养的各组成纤维细胞cd90表达和α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、Ki-67具有相关性。5.单细胞共聚焦扫描发现cd90和α-SMA具有共区域表达和表达趋势较一致的特点。结论:1.增生性瘢痕中,cd90表达阳性的成纤维细胞可能是瘢痕增生的特异表型。2.组织块法原代培养可以建立病理性瘢痕成纤维细胞的体外模型。3.增生性瘢痕来源的成纤维细胞存在cd90多量表达的特异表型。4.单个瘢痕成纤维细胞cd90和α-SMA有共区域表达的特点和一致的表达趋势,二者可能有一定的协同关系。

关键词：瘢痕疙瘩增生性瘢痕成纤维细胞表型 cd90

cd44和cd90的表达在预测肝移植治疗原发性肝癌患者预后中的价值

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CD44和CD90的表达在预测肝移植治疗原发性肝癌患者预后中的价值

作者：杨杰福建医科大学

学位级别：硕士

目的:研究联合检测cd44及cd90与肝细胞癌肝移植患者预后关系。方法:收集南京军区福州总医院2001年至2012年期间行经典原位肝移植术治疗原发性肝癌,且经病理证实为原发性肝细胞癌的石蜡包埋标本105例。记录患者临床信息及临床病理特征(... 详细信息

目的:研究联合检测cd44及cd90与肝细胞癌肝移植患者预后关系。方法:收集南京军区福州总医院2001年至2012年期间行经典原位肝移植术治疗原发性肝癌,且经病理证实为原发性肝细胞癌的石蜡包埋标本105例。记录患者临床信息及临床病理特征(肿瘤大小,肿瘤个数、分化程度、微血管侵润等),并应用免疫组化染色法,检测肿瘤组织中cd44和cd90的表达,并与临床病理资料及术后随访进行统计学分析。结果:***44、cd90在肝癌肝移植的癌组织中的阳性表达率分别为60.1%、50.5%,呈高表达。通过Spearman相关分析,cd44和cd90的表达有相关性(Pcd90与cd44共同高表达为36.5%,cd44或cd90低表达63.5%。***44、cd90的表达与临床病理特征间的关系:肝癌肝移植的癌组织中cd44、cd90的表达在年龄、性别、肿瘤数目、肿瘤部位等方面的差异无统计学意义(P>0.05)。而在分化程度、术前AFP、肿瘤直径、微血管侵润等方面有统计学差异(Pcd44、cd90以及cd44和cd90共表达是影响患者预后的危险因素(P0.05)。分析显示cd44高表达、cd90高表达的患者与cd44低表达、cd90低表达患者的肝切除术后各自的5年总生存率有显著差异(15.7VS65.3%)(Pcd44和cd90联合表达Kaplan-Meier分析显示cd44和cd90共同高表达的患者比cd44或cd90低表达患者的术后5年总生存率显著低(10.7VS54.5%)(Pcd44、cd90以及cd44和cd90共表达是影响患者术后生存的独立危险因素(Pcd44、cd90以及cd44联合cd90表达与肝癌肝移植患者的术后总生存率相关,cd44、cd90是影响肝癌肝移植患者术后生存的独立危险因素,可能可以作为预测肝癌肝移植患者预后的预测指标。

关键词：肝癌肝移植 cd44 cd90 预后