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cd200rhigghh neutrophils with dysfunctional autophagy establish systemic immunosuppression by increasing regulatory T cells

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Cellular & Molecular Immunology 2024年第4期21卷 349-361页

作者： Ye Seon Kim Yu Sun Jeong Geon Ho Bae Ji Hyeon Kang Mingyu Lee Brian A.Zabel Yoe-Sik Bae Department of Biological Sciences Sungkyunkwan UniversitySuwon16419Republic of Korea Department of Health Science and Technology SAIHSTSungkyunkwan UniversitySeoul06351Republic of Korea Palo Alto Veterans Institute for research Veterans Affairs HospitalPalo AltoCA94304USA

Distinct neutrophil populations arise during certain pathological conditions.The generation of dysfunctional neutrophils during sepsis and their contribution to septicemia-related systemic immune suppression remain unclear.In this study,using an experimental sepsis model that features immunosuppression,we identified a novel population of pathogenic cd200r^(high) neutrophils that are generated during the initial stages of sepsis and contribute to systemic immune suppression by enhancing regulatory T(T_(reg))cells.Compared to their cd200r^(low)counterparts,sepsis-generated cd200rhigh neutrophils exhibit impaired autophagy and dysfunction,with reduced chemotactic migration,superoxide anion production,and TNF-αproduction.Increased soluble cd200 blocks autophagy and neutrophil maturation in the bone marrow during experimental sepsis,and recombinant cd200 treatment in vitro can induce neutrophil dysfunction similar to that observed in cd200r^(high) neutrophils.The administration of anα-cd200r antibody effectively reversed neutrophil dysfunction by enhancing autophagy and protecting against a secondary infection challenge,leading to increased survival.Transcriptome analysis revealed that cd200r^(high) neutrophils expressed high levels of Igf1,which elicits the generation of Treg cells,while the administration of anα-cd200r antibody inhibited Treg cell generation in a secondary infection model.Taken together,our findings revealed a novel cd200r^(high) neutrophil population that mediates the pathogenesis of sepsis-induced systemic immunosuppression by generating Treg cells.

关键词： Sepsis Neutrophils cd200r Autophagy IGF-1 regulatory T cells

外周血cd200、cd200r及血清IL-8、TNF-α在再生障碍性贫血患者中的水平变化及临床意义

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国际检验医学杂志 2024年第12期45卷 1526-1529页

作者：刘恋张忠印吉飞跃海安市人民医院输血科江苏海安226600

目的分析外周血cd200、cd200r及血清白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α在再生障碍性贫血(AA)患者中的水平变化及临床意义。方法回顾性分析2019年3月至2021年3月该院收治的86例AA患者的临床资料,根据患者入院病情严重程度分为轻度... 详细信息

目的分析外周血cd200、cd200r及血清白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α在再生障碍性贫血(AA)患者中的水平变化及临床意义。方法回顾性分析2019年3月至2021年3月该院收治的86例AA患者的临床资料,根据患者入院病情严重程度分为轻度组(40例)及重度组(46例),将同期来该院体检的50例体检健康者作为对照组。检测并比较各组外周血cd200、cd200r及血清IL-8、TNF-α水平,采用Spearman相关分析外周血cd200、cd200r及血清IL-8、TNF-α水平与AA病情严重程度的相关性,采用受试者工作特征(rOC)曲线分析血清外周血cd200、cd200r及血清IL-8、TNF-α预测AA患者预后不良的价值;采用多因素Logistic回归分析AA患者预后不良的影响因素。结果重度组cd200、cd200r水平低于轻度组及对照组(Prman相关分析结果显示,AA病情严重程度与cd200、cd200r水平呈负相关(Pcd200、cd200r水平均低于预后良好组(PrOC曲线分析结果显示,外周血cd200、cd200r及血清IL-8、TNF-α可用于AA预后不良的预测,曲线下面积分别为0.939、0.961、0.814、0.648。多因素Logistic回归分析结果显示,病情程度为重度、cd200≤7.641%、cd200r≤6.490%、IL-8>83.197 pg/mL、TNF-α>171.307 pg/mL均是导致AA预后不良的危险因素(Pcd200、cd200r水平降低,且外周血cd200、cd200r及血清IL-8、TNF-α与AA之间存在一定相关性,各指标可反映AA患者病情严重程度。

关键词：再生障碍性贫血 cd200 cd200r 白细胞介素-8 肿瘤坏死因子-α

cd200/cd200r在异基因造血干细胞移植后的表达水平及意义

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中国实验血液学杂志 2016年第3期24卷 815-820页

作者：黄月华张薇蔡昊李天骄李剑韩冰庄俊玲朱铁楠蔡华聪周道斌中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血液内科北京100730

背景:cd200与其受体cd200r均属于免疫球蛋白超家族成员,在体内起到传递免疫信号、参与免疫稳态的维持、调节自身免疫功能紊乱以及抑制巨噬细胞系统的功能。目的:探讨cd200/cd200r在移植物抗宿主病(GVHD)中的作用。方法:将入组患者分为4... 详细信息

背景:cd200与其受体cd200r均属于免疫球蛋白超家族成员,在体内起到传递免疫信号、参与免疫稳态的维持、调节自身免疫功能紊乱以及抑制巨噬细胞系统的功能。目的:探讨cd200/cd200r在移植物抗宿主病(GVHD)中的作用。方法:将入组患者分为4组:aGVHD组、non-aGVHD组、cGVHD组及non-cGVHD组。首先应用流式细胞术测定各组cd200及cd200r在cd19+细胞、cd3+细胞及树突状(DC)细胞表面表达水平的差异,随后通过实时荧光定量PCr测定各组cd200及cd200r的mrNA表达水平的差异,最后将各研究组外周血单个核细胞与不同浓度的抗-cd200r1抗体体外共培养48 h,采用ELISA方法测定培养上清IL-10水平,以验证cd200/cd200r的功能。结果:non-aGVHD组cd19+细胞表面cd200+表达水平高于aGVHD组,低于正常对照组。non-cGVHD组cd19+细胞表面cd200+表达水平高于正常对照组及cGVHD组。aGVHD组和cGVHD组cd200的mrNA的表达水平均低于正常对照组。aGVHD组cd200的mrNA表达水平低于non-aGVHD组,cGVHD组低于non-cGVHD组。各组cd200r的mrNA表达水平未见明显差异。抗-cd200r1抗体阻断cd200/cd200r通路后,细胞培养上清中IL-10浓度随抗-cd200r1抗体浓度的增加呈下降趋势。结论:aGVHD及cGVHD患者在cd19+cd200+细胞及mrNA表达水平均明显低于未发生GVHD的患者,阻断cd200/cd200r通路后IL-10分泌水平下降,提示cd200/cd200r可能与GVHD的发生有一定的相关性。

关键词：造血干细胞移植 cd200 cd200r 移植物抗宿主病白介素-10

cd200r在肺鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

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中国肿瘤临床 2019年第19期46卷 977-981页

作者：孙倩李舒展魏枫任秀宝天津医科大学肿瘤医院生物技术研究室国家肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室天津市恶性肿瘤临床医学研究中心

目的:探讨白细胞分化抗原cd200受体(cd200 receptor,cd200r)在肺鳞状细胞癌(lung squamous cell carcinoma,LSCC)组织中的表达及其临床意义。方法:选取2004年1月至2011年12月100例于天津医科大学肿瘤医院行手术切除的LSCC患者组织标本,... 详细信息

目的:探讨白细胞分化抗原cd200受体(cd200 receptor,cd200r)在肺鳞状细胞癌(lung squamous cell carcinoma,LSCC)组织中的表达及其临床意义。方法:选取2004年1月至2011年12月100例于天津医科大学肿瘤医院行手术切除的LSCC患者组织标本,应用免疫组织化学法检测cd200r的表达,体外细胞实验验证cd200r对细胞增殖的作用。结果:cd200r主要在LSCC组织的细胞质和细胞膜表达,55%(55/100)呈高表达,45%(45/100)呈低表达。高表达患者的总生存(overall survival,OS)期和无病生存(disease free survial,DFS)期分别为46个月和32个月,均低于低表达患者(P=0.020,P=0.001)。cd200r是患者预后的独立影响因素(Pcd200r表达降低后细胞生长和克隆形成能力降低。结论:LSCC患者组织中存在cd200r表达,且其高表达与患者的不良预后相关。敲低cd200r后细胞的生长增殖能力降低,cd200r可作为预测LSCC复发和生存的新型标志物,为肿瘤治疗技术开发提供新的依据。

关键词：肺鳞状细胞癌 cd200r 免疫组织化学法预后

小鼠外周血嗜碱性粒细胞活化后的cd200r表达

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中药新药与临床药理 2012年第2期23卷 223-225页

作者：陈典周联王青广州中医药大学临床药理研究所免疫研究室广州510405

目的探讨流式细胞术鉴定小鼠外周血嗜碱性粒细胞方法,并分析其活化后表面分子cd200r的表达。方法分离BALB/c小鼠外周血,以抗-IgE-FITC和抗-cd4-PE/cy7与抗-cd45r B220-PE/cy7双色免疫荧光染色结合流式细胞术分析,鉴定小鼠外周血嗜碱性... 详细信息

目的探讨流式细胞术鉴定小鼠外周血嗜碱性粒细胞方法,并分析其活化后表面分子cd200r的表达。方法分离BALB/c小鼠外周血,以抗-IgE-FITC和抗-cd4-PE/cy7与抗-cd45r B220-PE/cy7双色免疫荧光染色结合流式细胞术分析,鉴定小鼠外周血嗜碱性粒细胞;正常以及卵清蛋白(OVA)致敏的BALB/c小鼠外周血,抗-IgE刺激后抗-IgE-FITC、抗-cd4-PE/cy7、抗-cd45r B220-PE/cy7和抗-cd200r-PE三色免疫荧光染色结合流式细胞术检测cd200r的表达。结果小鼠外周血中嗜碱性粒细胞的数量占白细胞总数为0.7%,抗-IgE刺激后嗜碱性粒细胞中cd200r+表达率由3.62%升至31.6%(Pcd200r+表达率由13.43%升至23.5%(Pcd4-cd45r-双色荧光标记可以鉴定小鼠嗜碱性粒细胞;cd200r可以作为小鼠嗜碱性粒细胞重要的表面活化分子。

关键词：嗜碱性粒细胞活化流式细胞术 cd200r

小胶质细胞在不同损伤神经环境下cd200r的表达

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中国免疫学杂志 2012年第11期28卷 1002-1005页

作者：张吉娟罗晓光冯昱禹红梅任艳何志义中国医科大学附属第一医院神经内科沈阳110001

目的:小胶质细胞在不同的损伤神经环境中接受刺激后观察其cd200r的表达情况,探讨活化的小胶质细胞与神经元之间的相互作用。方法:分别采用鼠小胶质细胞瘤细胞BV2细胞和鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞进行研究。将BV2细胞分别与正常的及用鱼... 详细信息

目的:小胶质细胞在不同的损伤神经环境中接受刺激后观察其cd200r的表达情况,探讨活化的小胶质细胞与神经元之间的相互作用。方法:分别采用鼠小胶质细胞瘤细胞BV2细胞和鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞进行研究。将BV2细胞分别与正常的及用鱼腾酮损伤的PC12细胞共育培养。MTT检测细胞活力,倒置荧光显微镜观察细胞cd200r表达,ELISA定量检测cd200r蛋白表达。结果:BV接受损伤PC12上清孵育后其cd200r表达显著下降(Pcd200r表达显著升高(Pcd200r的表达,而与损伤神经细胞共育能提高小胶质细胞的cd200r表达。

关键词：小胶质细胞神经细胞共育 BV2细胞 PC12细胞 cd200r

cd200r在孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究及胎盘差异蛋白分析

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CD200R在孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究及胎盘差...

作者：焦芳滨州医学院

学位级别：硕士

一、cd200r在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究目的:探索巨噬细胞表面cd200r在早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法:建立刚地弓形虫感染致不良妊娠结局的孕鼠模型,设感染组和正常对照组,感染组于孕8天腹腔感染... 详细信息

一、cd200r在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究目的:探索巨噬细胞表面cd200r在早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法:建立刚地弓形虫感染致不良妊娠结局的孕鼠模型,设感染组和正常对照组,感染组于孕8天腹腔感染刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondii)速殖子,孕14天颈椎脱臼法处死孕鼠,观察并记录妊娠结局。制备母胎界面(子宫、胎盘)单个核细胞悬液,流式检测F4/80+蜕膜巨噬细胞表面cd200r及其胞内细胞因子TNF-α的表达。取人早孕期流产蜕膜组织标本,贴壁法分离蜕膜巨噬细胞,采用流式细胞术,检测弓形虫感染24小时后cd14+蜕膜巨噬细胞表面cd200r和胞内细胞因子TNF-α的表达。用Spearman相关性分析统计了cd200r与TNF-α的相关性。结果:对照组孕鼠精神状态良好,胎鼠、胎盘血供正常。感染组孕鼠精神萎靡,耸毛、拱背,活动减少;胎鼠有出血坏死,胎盘血供不足,颜色苍白,胎鼠、胎盘外观小,重量轻。感染组孕鼠母胎界面F4/80+蜕膜巨噬细胞表面cd200r表达较对照组显著降低,而胞内炎性细胞因子TNF-α的表达水平增加。与正常组相比,感染组cd14+巨噬细胞表面cd200r的表达降低,而胞内细胞因子TNF-α表达水平则明显升高。用Spearman相关性分析发现,感染组与正常组cd200r的表达水平差异与其胞内细胞因子TNF-α表达水平差异呈负相关。结论:孕期弓形虫感染导致蜕膜巨噬细胞表面cd200r的表达水平降低,胞内细胞因子TNF-α的表达升高,可能是弓形虫感染致不良妊娠结局的分子机制之一。二、无标记液相串联质谱法对弓形虫感染后胎盘差异蛋白的分析目的:采用无标记液相串联质谱方法对弓形虫感染后胎盘差异蛋白分析,筛选在早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的胎盘差异蛋白。方法:建立刚地弓形虫感染孕鼠模型,设感染组和正常对照组,感染组于孕7天腹腔感染刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondii)速殖子,孕12天颈椎脱臼处死孕鼠,留取胎盘标本,对照组与感染组各留取5例。用无标记液相串联质谱技术检测两组胎盘蛋白质组,并用荧光定量PCr、免疫蛋白印迹实验和免疫组化的方法进一步验证蛋白质组分析的部分差异蛋白,用UniProt,Gene Ontology,STrING 10及DAVID数据库分析差异蛋白的分子功能、生理功能及蛋白与蛋白之间相互作用,并进一步分析与妊娠相关的胎盘差异蛋白。结果:在检测的792个胎盘蛋白中有58个蛋白的表达水平在弓形虫感染后的表达差异具有统计学意义(p<0.05),其中包括多种与妊娠时滋养层侵袭过程、胎盘发育和功能、宿主免疫应答及蛋白合成转运密切相关的蛋白,如蛋白酶抑制剂、膜联蛋白、微管蛋白、肌动蛋白及参与蛋白乙酰化、复制、分泌等功能的相关蛋白等。结论:弓形虫感染后所引起某些胎盘蛋白表达水平的改变可能是孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的重要分子机制。

关键词：巨噬细胞 cd200r TNF-α 刚地弓形虫不良妊娠结局胎盘蛋白质组蛋白酶抑制剂膜联蛋白弓形虫

cd200r在系统性红斑狼疮患者树突状细胞上的表达及其功能初探

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CD200R在系统性红斑狼疮患者树突状细胞上的表达及其功能初探

作者：陈洋北京协和医学院

学位级别：硕士

背景和目的 cd200是重要的免疫调节分子,属于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成员,表达于多种细胞类型。由于其缺乏胞内信号序列,需要与受体结合发挥作用。cd200的受体包括cd200r1-5,相对局限分布于髓系来源的细胞,如树突状细胞、巨噬细胞、肥大... 详细信息

背景和目的 cd200是重要的免疫调节分子,属于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成员,表达于多种细胞类型。由于其缺乏胞内信号序列,需要与受体结合发挥作用。cd200的受体包括cd200r1-5,相对局限分布于髓系来源的细胞,如树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞等。该信号通路主要通过髓系细胞间接调节免疫平衡,在过敏、自身免疫、中枢神经系统损伤、移植排斥等免疫相关疾病中可能发挥着重要作用。系统性红斑狼疮(Systemic lupus Erythematous,SLE)是一种多系统受累的自身免疫性疾病,其发病机制涉及遗传背景和环境因素等诸多方面。包括自身反应性T细胞、B细胞及凋亡细胞清除障碍等。树突状细胞作为主要的抗原提呈细胞,也参与到SLE发病的过程中,表现为细胞数量、活化状态及功能的异常等。树突状细胞是cd200r分布的主要细胞群,其在该信号通路的调控过程中应具有重要作用。而目前关于cd200/cd200r的研究主要局限于动物模型,其在人类树突状细胞功能调节及SLE发病机制中的作用尚不清楚。本实验立足于cd200r分布的主要细胞群-树突状细胞,分析SLE中cd200r在其表面表达的情况,并通过建立体外细胞培养模型,研究cd200对树突状细胞功能的影响。阐述该信号通路在SLE致病机制中的可能作用。方法明确诊断SLE的患者20例,同期选择性别年龄匹配的健康对照17例,采集抗凝外周静脉血分离单个核细胞。 1、用cd11c和cd123标记髓样树突状细胞(mDC)和浆样树突状细胞(pDC),通过流式细胞术检测SLE患者及健康对照外周血单个核细胞中树突状细胞的比例及其表面cd200r表达的情况。并对患者进行疾病活动度评价,与树突状细胞表面cd200r表达率进行相关分析。 2、利用磁珠分选从外周血单个核细胞中分离出cd14+单核细胞,体外诱导培养单核细胞来源的树突状细胞(MoDC),然后加入LPS刺激其活化成熟。利用流式细胞术分析LPS刺激对MoDC表面cd200r表达率的影响。通过流式细胞术分析加入LPS或LPS+cd200对MoDC表面活化标志表达的影响;ELISA检测不同处理组中IL-6、IL-10水平的变化：借助流式细胞术检测同种异体混合淋巴反应(MLr)中不同处理组的MoDC刺激cd4+淋巴细胞增殖能力的变化。从而分析cd200对树突状细胞功能的影响。结果第一部分 1、SLE患者与健康对照相比,外周血PBMC中cd11c-cd123bright细胞(pDC)比例下降(0.50±0.08%vs.1.59±0.31%,p=0.002),单核细胞群(Mo)比例升高(18.66±2.77%vs.10.52±1.04%,p=0.014),具有显著性差异;cd11c+cd123dim细胞(mDC)比例无显著性差异(11.35±1.45%vs.9.39±3.35%,p=0.273)。 2、cd200r在cd11c-cd123bright细胞(pDC)上表达的阳性率显著高于cd11c+cd123dim细胞(mDC)(HC:65.14±4.72%vs.27.95±2.00%, pcd11c+cd123dim细胞(mDC)及cd11c-cd123bright细胞(pDC)表面cd200r表达阳性率均显著降低(mDC20.51±2.87%vs.27.95±2.00%,p=0.046;pDC47.97±5.50%vs.65.14±4.72%,p=0.027)。 4、SLE mDC表面cd200r的表达阳性率与血沉呈负相关(r=-0.552,r2=0.3043,p=0.041)。第二部分 1、SLE患者等量外周血中PBMC提取量较健康对照减少(1.24±0.15×107/30ml vs.4.3±0.77×107/30ml, pcd200r的表达均显著下调(HC中LPS vs. M:cd200r+%53.54±4.74%vs.62.09±5.18%, pcd200r+%22.53±2.78vs.28.97±3.58, pcd200r+%45.10±7.53%vs.52.33±8.18%, p=0.023;MFI38.79±1.88v.s.43.28±2.37, p=0.015;MFI×cd200r+%18.01±3.64vs.23.37±4.49, p<0.001)。 3、SLE患者

关键词： cd200 cd200r 树突状细胞系统性红斑狼疮

BV2细胞在不同损伤神经环境下cd200r表达的研究

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BV2细胞在不同损伤神经环境下CD200R表达的研究

作者：张吉娟中国医科大学

学位级别：硕士

目的小胶质细胞是中枢神经系统中最具有代表性的免疫细胞。自1891年首次描述小胶质细胞以来,其在中枢神经系统中作用越来越受到人们的重视。小胶质细胞在帕金森病（PD）、阿尔兹海默病（AD）及脑部炎症、缺血等多种神经系统病变... 详细信息

目的小胶质细胞是中枢神经系统中最具有代表性的免疫细胞。自1891年首次描述小胶质细胞以来,其在中枢神经系统中作用越来越受到人们的重视。小胶质细胞在帕金森病（PD）、阿尔兹海默病（AD）及脑部炎症、缺血等多种神经系统病变中发挥着损伤和修复的双重作用。活化的小胶质细胞在中枢神经系统的固有免疫反应中有许多作用,包括免疫炎症、诱导、吞噬作用、细胞毒作用和通过抗原提呈的T淋巴细胞反应调节作用。小胶质细胞除了在病原体引起的中枢神经系统疾病中起到保护性免疫作用外,在慢性或病理性活化的时候也能引起组织损伤。最新研究显示cd200-cd200r通路是中枢神经系统内下调小胶质细胞活化的重要机制。cd200表达范围较广,主要表达在神经细胞、胸腺细胞、B细胞、T细胞、血管内皮细胞等。其受体为cd200r,主要表达在单核巨噬细胞系统（包括巨噬细胞、小胶质细胞、肥大细胞等）和少量的T细胞上,具有与其配体cd200非常相似的结构。cd200与cd200r结合触发细胞内信号级联放大的系统功能,控制并下调单核巨噬细胞系统的活化。本实验用BV2细胞作为小胶质细胞的替代,PC12细胞作为神经元的替代,小胶质细胞(（BV2）分别与受损和正常神经元（PC12）共育,及用受损和正常神经元的上清液孵育,使小胶质细胞在不同的损伤神经环境中接受刺激后考察其cd200r的表达情况,来探讨活化的小胶质细胞与神经元之间的相互作用。方法对数生长期状态良好的PC12细胞用500nM鱼腾酮（rotenone, rT）处理24h后换新鲜培养液（Conditione Media,CM）, BV2分别与正常PC12细胞、500nM rT处理的PC12细胞共育培养及正常和损伤的PC12细胞上清孵育BV2细胞,正常1640培养液培养BV2细胞作为正常对照。两种细胞的共育培养用转移筛网（孔径8μm的transwell）间隔。共育培养或孵育24h后收集细胞进行试验。MTT检测细胞活力,倒置荧光显微镜观察细胞cd200r表达,ELISA定量检测cd200r蛋白表达。结果 1、BV2细胞用PC12细胞正常或受损上清孵育组细胞存活率要明显低于对照组（P＜0.05）,BV2细胞与PC12细胞共育培养组细胞存活率略高于对照组,但无统计学差异（P＞0.05） 2、BV2细胞与500nM rT损伤PC12细胞共育组cd200r表达与对照组相比显著增多（P＜0.05）,而用受损PC12上清孵育BV2组cd200r表达与对照组相比显著减少（P＜0.05）。BV2与正常PC12细胞共育组cd200r略增加,用正常PC12上清孵育BV2组cd200r略减少,但都无统计学意义（P＞0.05）结论损伤神经细胞上清能够降低小胶质细胞cd200r的表达,而与损伤神经细胞共育能提高小胶质细胞的cd200r表达

关键词：小胶质细胞神经细胞共育 BV2细胞 PC12细胞 cd200r