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The Effect and Mechanism of Microglia cd200/cd200R signaling on Functional Reconstruction after Cerebral Ischemia

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The Effect and Mechanism of Microglia CD200/CD200R signaling...

树突状细胞及cd200／cd200R与URSA主动免疫治疗疗效相关性的研究进展

中国神经科学学会第十二届全国学术会议

作者： Hao SUN Xia TAO Ting-ting HOU Hong LIAO Jiangsu Key laboratory of Drug Screening China Pharmaceutical University

Objective As a glycoprotein on the cell membrane, cd200 is widely expressed on multiple cells and tissues, in the central nervous system mainly expressed in neurons, whereas cd200 R is specifically located in microglia. And emerging evidence indicated that cd200/cd200 R interactions play an important role in regulating microglia activation and synaptic plasticity in a variety of neurodegenerative diseases. However, the role of cd200/cd200 R signaling in cerebral ischemia is unclear. Thus, this study will aim to investigate the role of cd200/cd200 R signaling in functional recovery after cerebral ischemia in rats. Methods In this study, we established transient middle cerebral artery occlusion（t MCAO） model on rat, then intracerebroventricular injection of cd200 R agonist cd200 Fc or blocking antibody cd200 R Ab at 24 hours after t MCAO. In order to study the recovery of function in rats at different stages, we evaluated the sensorimotor, learning and memory functions by Longa score, modified grip-traction test, Limb-use asymmetry test（cylinder）, and adhesive removal test at 4, 7, 14, 21, 28 days and Morris water maze at 28 days. The cerebral infarction volume as assessed by Cresyl violet staining. The expression of cd200 R, SYP and PSD-95 was detected by western blot and the dendritic spine density and morphology was detected by Golgi stain. Axonal regeneration and activation of microglia were detected by immunofluorescence. The expression of inflammatory cytokines and neurotrophic factors was detected by q RTPCR. Results（1） The expression of cd200 R was up-regulated in microglia after acute cerebral ischemia, but the expression of cd200 was no change.（2） After cerebral ischemia, the activation of cd200/cd200 R signaling significantly reduced the infarct volume, improved the sensorimotor and cognitive functional recovery. However, blocking cd200/cd200 R signaling exacerbated the sensorimotor and cognitive dysfunction.（3） The activation of cd200/cd200 R signaling after cerebral ischemia significantly increased the

关键词： cd200 cd200R cerebral ischemia synaptic plasticity functional reconstruction

来源： cnki会议评论

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国际医药卫生导报 2015年第1期21卷 143-144页

作者：全燕高天旸南华大学教学医院广东省第二人民医院广州510317

目前原因不明复发性流产患者免疫状态和主动免疫治疗疗效尚缺乏确切的评估指标，封闭抗体作为目前主要的评估指标尚存在不足。树突状细胞作为唯一能激活初始T细胞的抗原提呈细胞，与封闭抗体产生相关。而cd200受体作为独特的抑制性受体... 详细信息

目前原因不明复发性流产患者免疫状态和主动免疫治疗疗效尚缺乏确切的评估指标，封闭抗体作为目前主要的评估指标尚存在不足。树突状细胞作为唯一能激活初始T细胞的抗原提呈细胞，与封闭抗体产生相关。而cd200受体作为独特的抑制性受体主要表达在树突状细胞，结合cd200传递耐受信号，抑制树突状细胞的活性。近年来对树突状细胞和cd200／cd200R的研究取得了一定进展，提示它们对维持妊娠免疫耐受有重要意义，还可能与主动免疫治疗疗效相关。

关键词：树突状细胞 cd200 复发性流产主动免疫治疗

手术创伤对成年大鼠和老年大鼠海马区cd200及其受体表达的影响

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山西医药杂志（上半月） 2012年第4期41卷 320-321页

作者：曹学照唐冰谭文斐马虹中国医科大学附属第一医院 110001

目的探讨手术创伤是否引起海马区胶质细胞cd200和cd200受体(cd200R)mRNA的表达变化。方法成年SD大鼠和老年SD大鼠分别随机分为对照组、麻醉组和手术组。对照组不做特殊处理;麻醉组实验动物单纯接受1.5%～2%异氟醚麻醉,行气管插管和机械... 详细信息

目的探讨手术创伤是否引起海马区胶质细胞cd200和cd200受体(cd200R)mRNA的表达变化。方法成年SD大鼠和老年SD大鼠分别随机分为对照组、麻醉组和手术组。对照组不做特殊处理;麻醉组实验动物单纯接受1.5%～2%异氟醚麻醉,行气管插管和机械通气;手术组行肝部分切除术。术后1,3,7d处死实验鼠,取海马区脑组织,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测cd200和cd200RmRNA的表达变化。结果 cd200在成年大鼠和老年大鼠术后第1天表达下调(Pcd200RmRNA的表达水平。结论手术创伤抑制了成年大鼠和老年大鼠海马区cd200mRNA的表达。

关键词：创伤和损伤大鼠海马 cd200

系统性红斑狼疮患者cd200与自身抗体的表达及其相互关系

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中国卫生检验杂志 2014年第12期24卷 1723-1724,1728页

作者：江永青冷耀明胡志坚王文娟九江学院附属医院江西九江332000

目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血及血清中cd200和多种自身抗体的表达水平,并探讨其相互关系。方法采用流式细胞术检测受试者外周血细胞表面cd200的表达,应用ELISA方法检测血清游离cd200水平,同时... 详细信息

目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血及血清中cd200和多种自身抗体的表达水平,并探讨其相互关系。方法采用流式细胞术检测受试者外周血细胞表面cd200的表达,应用ELISA方法检测血清游离cd200水平,同时用印迹法检测患者相关自身抗体的阳性率。结果 SLE患者cd3+cd4+T细胞cd200的表达及血清游离cd200水平均显著高于健康对照者(Pcd200的表达显著高于自身抗体表达阴性者。结论 SLE患者cd200表达异常,且与SLE相关自身抗体的表达密切相关。

关键词：系统性红斑狼疮 cd200 自身抗体

cd200+大肠癌干细胞的分离、鉴定及其基因表达谱特点的研究

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CD200+大肠癌干细胞的分离、鉴定及其基因表达谱特点的研究

作者：张珊珊南方医科大学

学位级别：硕士

背景与目的：大肠癌是严重危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一,在西方发达国家其发病率居于恶性肿瘤的第2位,近年来在我国发病率和死亡率均呈明显上升趋势。肿瘤干细胞是在实体肿瘤中发现的一个小的细胞亚群,其具有自我更新和分化、... 详细信息

背景与目的：大肠癌是严重危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一,在西方发达国家其发病率居于恶性肿瘤的第2位,近年来在我国发病率和死亡率均呈明显上升趋势。肿瘤干细胞是在实体肿瘤中发现的一个小的细胞亚群,其具有自我更新和分化、引发肿瘤并促进肿瘤生长、复发和转移的能力。干细胞是公认的大肠癌产生和治疗后复发的根源,也被认为是大肠癌治疗失败的重要原因。近年来包括手术、放化疗,生物及中医药在内的综合治疗,是目前肿瘤病人最佳的治疗方式。随着分子生物学及基因工程技术的不断发展,肿瘤的治疗已经不仅仅局限于手术治疗、放疗和化疗这三种传统的模式。基因工程是近年来的研究热点,随着基因学的发展,人们认识到,基因的改变是肿瘤发生、发展的基础。以大肠癌特异基因为靶向的治疗方式将成为治愈肿瘤的重要途径,但也面临着巨大挑战。研发一种可选择性根治CSC的手段,需要运用新技术来锁定实施治疗的准确靶点,以利于对其进行筛选、分离。因此研究了解有关筛选大肠癌干细胞的标志分子及其功能对于大肠癌的进一步研究、诊断及治疗具有重要意义。 cd200是—种Ⅰ型膜糖蛋白,是高度保守的免疫超家族成员,表达于髓系,例如巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞和嗜酸性粒细胞中,cd200与cd200R间的相互作用可以传递抑制性信号减低髓样细胞的活性,改变其迁移,在免疫疾病和抑制排斥反应中作为一种免疫耐受信号。肿瘤的发展和复发的特点是发生免疫逃逸,而产生肿瘤免疫耐受是肿瘤通过逃避免疫系统的识别,使肿瘤能够继续生长,因此大肠癌干细胞可能通过cd200依赖的免疫机制逃避免疫监视,cd200的表达很可能是大肠癌肿瘤干细胞与肿瘤免疫之间的重要桥梁。同时,cd200也被发现表达于大肠癌、骨髓瘤、乳腺癌、脑癌、黑色素瘤和正常的间充质干细胞中,并且cd200的表达与这些肿瘤的发展进程有重要关联。综上,cd200被认为极有可能是一种新型的大肠癌干细胞标志,但这一说法仍缺乏充足的证据支持。我们前期动物实验发现高表达cd200的大肠癌细胞致瘤能力明显较cd200-大肠癌细胞强。同等数量的两群细胞,cd200+成瘤速度明显快于cd200-,且最终形成的瘤体更大。因此,根据本课题组前期科研成果,本研究首先分析cd200在多种大肠癌细胞系中表达情况,然后分选出阳性表达和阴性细胞进行体外成球及侵袭实验,进一步验证cd200为大肠癌干细胞表面标志。同时分析cd200特异性大肠癌基因表达谱,探究与大肠癌独特生物学特性相关的基因表达及信号通路作用情况,对研究大肠癌干细胞的作用机制及寻找根除大肠癌干细胞的潜在靶点至关重要。材料与方法： 1.大肠癌细胞培养6种大肠癌细胞株(colo205;lovo;sw620;sw480;sw1116;HT29)在含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养。 2.流式检测cd200+细胞所占比例检测6种大肠癌细胞株cd200+细胞所占比例,收集约106个细胞,标记APC—cd200单克隆抗体,空白对照组标记APC—同源IgG单克隆抗体,4℃避光孵育20分钟,分析缓冲液洗涤2次,300g离心10分钟,重悬于分析缓冲液中准备上机检测。 3.无血清培养colo205细胞将colo205细胞在含DMEM/F12(1:1),2%B27,20ng/ml EGF,10ng%ml b-FGF和10ng/ml LIF的无血清培养基中培养两周。 4.流式分选cd200+Colo205大肠癌干细胞将无血清培养了2周的Colo205细胞消化成单细胞悬液,计数约107个细胞,标记APC—cd200单克隆抗体,空白对照组标记APC—同源IgG单克隆抗体,4℃避光孵育20分钟,缓冲液洗涤2次,300g离心10分钟,重悬后上机分选cd200+和cd200-细胞。 5.体外成球实验将分选出的cd200+和cd200-细胞稀释成100个/ml的细胞悬液,取相同数量(100μL)悬液于96孔板中,无血清培养14天,每2天补充一次生长因子。14天后计数细胞数>50的干细胞球数。以干细胞球数/10计算初代成球率。再将己形成的干细胞球消化重悬重新铺板,计算后两代成球率。 6.侵袭小室实验将cd200+和cd200-细胞重悬于DMEM/F12基本培养基中,然后取相同数量(5×104个)分别加入transwell、室上层小室中,下层小室中加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。连续培养48h后,将膜取下,用结晶紫染色后,随机选取10个显微镜下视野计算侵袭过基底膜的细胞数量。 7.基因芯片分析cd200+细胞与cd200-细胞的基因表达谱分别抽提两种细胞群的总RNA样本,质检合格后,制备芯片,经过杂交、洗脱、染色、检测、芯片图像采集及数据分析得到差异表达的基因,通过SAS在线分析系统对差异基因的功能和相关信号通路进行分析。 8.QRT—PCR法检测基因mRNA表达分别抽提cd200+和cd200-细胞群的总RNA样本,通过SYBR(

关键词：大肠癌干细胞 cd200 基因芯片 cd133 cd44 Wnt信号通路

cd200R在系统性红斑狼疮患者树突状细胞上的表达及其功能初探

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CD200R在系统性红斑狼疮患者树突状细胞上的表达及其功能初探

作者：陈洋北京协和医学院

学位级别：硕士

背景和目的 cd200是重要的免疫调节分子,属于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成员,表达于多种细胞类型。由于其缺乏胞内信号序列,需要与受体结合发挥作用。cd200的受体包括cd200R1-5,相对局限分布于髓系来源的细胞,如树突状细胞、巨噬细胞、肥大... 详细信息

背景和目的 cd200是重要的免疫调节分子,属于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成员,表达于多种细胞类型。由于其缺乏胞内信号序列,需要与受体结合发挥作用。cd200的受体包括cd200R1-5,相对局限分布于髓系来源的细胞,如树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞等。该信号通路主要通过髓系细胞间接调节免疫平衡,在过敏、自身免疫、中枢神经系统损伤、移植排斥等免疫相关疾病中可能发挥着重要作用。系统性红斑狼疮(Systemic lupus Erythematous,SLE)是一种多系统受累的自身免疫性疾病,其发病机制涉及遗传背景和环境因素等诸多方面。包括自身反应性T细胞、B细胞及凋亡细胞清除障碍等。树突状细胞作为主要的抗原提呈细胞,也参与到SLE发病的过程中,表现为细胞数量、活化状态及功能的异常等。树突状细胞是cd200R分布的主要细胞群,其在该信号通路的调控过程中应具有重要作用。而目前关于cd200/cd200R的研究主要局限于动物模型,其在人类树突状细胞功能调节及SLE发病机制中的作用尚不清楚。本实验立足于cd200R分布的主要细胞群-树突状细胞,分析SLE中cd200R在其表面表达的情况,并通过建立体外细胞培养模型,研究cd200对树突状细胞功能的影响。阐述该信号通路在SLE致病机制中的可能作用。方法明确诊断SLE的患者20例,同期选择性别年龄匹配的健康对照17例,采集抗凝外周静脉血分离单个核细胞。 1、用cd11c和cd123标记髓样树突状细胞(mDC)和浆样树突状细胞(pDC),通过流式细胞术检测SLE患者及健康对照外周血单个核细胞中树突状细胞的比例及其表面cd200R表达的情况。并对患者进行疾病活动度评价,与树突状细胞表面cd200R表达率进行相关分析。 2、利用磁珠分选从外周血单个核细胞中分离出cd14+单核细胞,体外诱导培养单核细胞来源的树突状细胞(MoDC),然后加入LPS刺激其活化成熟。利用流式细胞术分析LPS刺激对MoDC表面cd200R表达率的影响。通过流式细胞术分析加入LPS或LPS+cd200对MoDC表面活化标志表达的影响;ELISA检测不同处理组中IL-6、IL-10水平的变化：借助流式细胞术检测同种异体混合淋巴反应(MLR)中不同处理组的MoDC刺激cd4+淋巴细胞增殖能力的变化。从而分析cd200对树突状细胞功能的影响。结果第一部分 1、SLE患者与健康对照相比,外周血PBMC中cd11c-cd123bright细胞(pDC)比例下降(0.50±0.08%vs.1.59±0.31%,p=0.002),单核细胞群(Mo)比例升高(18.66±2.77%vs.10.52±1.04%,p=0.014),具有显著性差异;cd11c+cd123dim细胞(mDC)比例无显著性差异(11.35±1.45%vs.9.39±3.35%,p=0.273)。 2、cd200R在cd11c-cd123bright细胞(pDC)上表达的阳性率显著高于cd11c+cd123dim细胞(mDC)(HC:65.14±4.72%vs.27.95±2.00%, pcd11c+cd123dim细胞(mDC)及cd11c-cd123bright细胞(pDC)表面cd200R表达阳性率均显著降低(mDC20.51±2.87%vs.27.95±2.00%,p=0.046;pDC47.97±5.50%vs.65.14±4.72%,p=0.027)。 4、SLE mDC表面cd200R的表达阳性率与血沉呈负相关(r=-0.552,R2=0.3043,p=0.041)。第二部分 1、SLE患者等量外周血中PBMC提取量较健康对照减少(1.24±0.15×107/30ml vs.4.3±0.77×107/30ml, pcd200R的表达均显著下调(HC中LPS vs. M:cd200R+%53.54±4.74%vs.62.09±5.18%, pcd200R+%22.53±2.78vs.28.97±3.58, pcd200R+%45.10±7.53%vs.52.33±8.18%, p=0.023;MFI38.79±1.88v.s.43.28±2.37, p=0.015;MFI×cd200R+%18.01±3.64vs.23.37±4.49, p<0.001)。 3、SLE患者

关键词： cd200 cd200R 树突状细胞系统性红斑狼疮

cd200FC通过保护血脑屏障来改善脑出血后的神经功能

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CD200FC通过保护血脑屏障来改善脑出血后的神经功能

作者：乐辰升浙江大学

学位级别：硕士

研究目的探究cd200-cd200R1信号在自发性脑出血中发生的变化及其起到的作用,尤其是这一信号与血脑屏障的关系,以及通过给予cd200Fc药物的方式进行干预,研究这一信号对于神经功能预后的作用。研究方法采用尾动脉采血,自体血注射法来构建... 详细信息

研究目的探究cd200-cd200R1信号在自发性脑出血中发生的变化及其起到的作用,尤其是这一信号与血脑屏障的关系,以及通过给予cd200Fc药物的方式进行干预,研究这一信号对于神经功能预后的作用。研究方法采用尾动脉采血,自体血注射法来构建小鼠脑出血模型,所有小鼠品系均为C57/BL6,体重20至24克。在建模后6小时、12小时、24小时、72小时取脑组织,用蛋白质印记法（Western Blot）测出不同时间点cd200R和cd200的表达量的变化。选择它们改变最显著的时间点作为后续实验选择的关键时间点。在脑出血建模后关键时间点,用免疫荧光法对cd200R分别与小胶质细胞、神经元、星形胶质细胞的标记物进行共定位,以验证在脑出血后cd200R的表达部位和其起作用的细胞。在干预实验中,将小鼠随机分成对照组、脑出血组、cd200Fc治疗组、普通IgG对照组,在建模后1小时按每克体重0.08微克的剂量给药。在建模后第24小时用依文思蓝法测各组小鼠血脑屏障的渗漏程度。此外,按以上四个分组建模和给药后,在建模后第24小时测各组小鼠的加西亚评分,连续一周测量各组小鼠的各项长期行为学,包括失足率、转角试验、疲劳棒试验。所有数据采用GraphPad Prism v.6.02进行统计分析,并且用均数±标准差（mean±SD）表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多重比较用Tukey。P＜0.05为差异有统计学意义。研究结果（1）小鼠脑出血后脑内cd200R1表达量减少,在24小时降到最低并且在72小时回升;cd200表达量在24小时明显降低;（2）小鼠脑内cd200R1主要表达在小胶质细胞上,而星形胶质细胞和神经元上几乎没有表达;（3）脑出血后给予cd200Fc能在24小时之时检测到对小鼠血脑屏障的保护;（4）脑出血后给予cd200Fc能在短期和长期均显示出对小鼠的神经功能学改善。结论小鼠脑内cd200R主要表达在小胶质细胞上,并且在脑出血后其表达量减少,至24小时达到最低,脑出血后一小时给予cd200Fc治疗可以减轻第24小时的血脑屏障渗漏,并对近、远期神经功能学产生改善作用。

关键词： cd200 cd200R1 自发性脑出血血脑屏障

cd200在C57BL/6小鼠白血病肿瘤细胞免疫排斥调节中的作用

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国外医学（免疫学分册） 2002年第6期25卷 F004-F004页

作者：运晨霞

母体和胎儿来源的人胎盘间充质干细胞抑制小鼠皮肤移植免疫排斥作用的比较

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第5期31卷 609-614页

作者：郝贵亮王立斌陈冬梅梁雪云王琼朱永朝马晓娜刘晓明李玉奎宁夏医科大学检验学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院宁夏人类干细胞研究所宁夏银川750004 南京明基医院江苏南京210000

目的研究母体来源的人胎盘间充质干细胞(m PMSC)、胎儿来源的人胎盘间充质干细胞(f PMSC)抑制不同品系小鼠皮肤移植免疫排斥作用的差异及其机制。方法分离两种来源的细胞;流式细胞术鉴定两种来源的细胞及其差异;MTT法检测其增殖能力;利... 详细信息

目的研究母体来源的人胎盘间充质干细胞(m PMSC)、胎儿来源的人胎盘间充质干细胞(f PMSC)抑制不同品系小鼠皮肤移植免疫排斥作用的差异及其机制。方法分离两种来源的细胞;流式细胞术鉴定两种来源的细胞及其差异;MTT法检测其增殖能力;利用cd200抗体中和f PMSC的cd200受体;用携带cd200基因及其空载体的腺病毒感染m PMSC。将60只C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只:PBS组、m PMSC组、f PMSC组、f PMSC联合抗cd200抗体组、m PMSC联合cd200腺病毒组、m PMSC联合腺病毒空载体组。以ICR乳鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体,建立异品系皮肤移植免疫排斥模型,并将上述细胞经尾静脉分别注入各组模型小鼠体内。观察小鼠状态及移植皮肤排斥情况。反转录PCR检测小鼠脾脏中白细胞介素17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12的mRNA水平,ELISA检测小鼠血液中IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-12的水平。结果 f PMSC的cd200阳性率明显高于m PMSC。m PMSC、f PMSC组和PBS组比较,f PMSC组和m PMSC、f PMSC联合抗cd200抗体组比较,m PMSC联合cd200腺病毒组和m PMSC联合腺病毒空载体组比较,前者的移植皮肤的存活时间均明显延长。m PMSC和f PMSC组IL-17、IFN-γ和TNF-α的表达量和PBS组比较明显降低;与f PMSC联合抗cd200抗体组相比,f PMSC组IL-17、IFN-γ、TNF-α和IL-12的表达量明显降低;与m PMSC联合腺病毒空载体组相比,m PMSC联合cd200腺病毒组IL-17、IFN-γ和TNF-α的表达量明显降低。结论 f PMSC抑制小鼠皮肤移植免疫排斥的作用优于m PMSC;f PMSC高表达cd200可更强的抑制免疫细胞的增殖、分化以及成熟等,从而更有效的抑制IL-17、IFN-γ、TNF-α等细胞因子的分泌;f PMSC更适于作为临床上抑制皮肤移植免疫排斥作用的种子细胞。

关键词：胎盘间充质干细胞 cd200 皮肤移植免疫排斥抑制小鼠