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cd2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用

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解剖学报 2008年第5期39卷 688-692页

作者：姜华军张春朱忠华刘建社邓安国华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科武汉430022

目的观察cd2相关蛋白(cd2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系。方法以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化... 详细信息

目的观察cd2相关蛋白(cd2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系。方法以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系。以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内cd2AP和nephrin的表达。间接免疫荧光结合激光共焦方法观察cd2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及cd2AP与nephrin在足细胞中的共存。直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与cd2AP的共存。结果cd2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞。在足细胞分化过程中,cd2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象。cd2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系。结论cd2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞。cd2AP在足细胞中的分布特点,提示cd2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架调节有关。

关键词： cd2相关蛋白足细胞肾小管上皮细胞系膜细胞免疫荧光激光共焦显微镜

cd2相关蛋白和肾质在多房囊性肾细胞癌中的表达

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中华医学杂志 2009年第8期89卷 543-547页

作者：龚侃赵增喜吕天敬金杰北京大学第一医院泌尿外科北京大学泌尿外科研究所100034 河北北方学院附属第二医院泌尿科

的探讨cd2相关蛋白（cd2AP）及肾质（nephrin）在成人多房囊性肾细胞癌中的表达及意义。方法收集多房囊性肾细胞癌标本28例、肾透明细胞癌标本32例和单纯性肾囊肿标本13例，采用免疫组化方法检测cd2AP在上述组织中的表达。从上述3组组... 详细信息

的探讨cd2相关蛋白（cd2AP）及肾质（nephrin）在成人多房囊性肾细胞癌中的表达及意义。方法收集多房囊性肾细胞癌标本28例、肾透明细胞癌标本32例和单纯性肾囊肿标本13例，采用免疫组化方法检测cd2AP在上述组织中的表达。从上述3组组织蜡块中每组各随机抽取5例共15例，重新切片，用cd2AP和肾质，做免疫组化染色对照实验。结果在多房囊性肾细胞癌的肿瘤细胞中cd2AP表达较强，尤其在囊壁的内层上皮表达强度明显增加。cd2AP在肾透明细胞癌中有弱表达，在单纯性肾囊肿中没有表达。肾质和cd2AP在3种组织的对照实验结果中染色强度和部位完全一致。结论cd2AP在多房囊性肾细胞癌中的表达具有特异性，其表达与肾透明细胞癌和单纯性肾囊肿有显著差异，对于多房囊性肾细胞癌的鉴别诊断有重要意义。cd2AP和肾质在多房囊性肾细胞癌中分布一致的特点，以及上述两种蛋白的足细胞特异性对于多房囊性肾细胞癌的形成原因具有重要提示。

关键词： cd2相关蛋白肾肿瘤腺癌透明细胞肾囊性

cd2相关蛋白启动子区域保守序列的功能分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第9期28卷 805-809页

作者：苏鑫铭周国平任伟陆超陈吉庆吴升华吴元俊南京医科大学第一附属医院儿科 210029

目的在不同物种间通过保守序列分析和荧光素酶功能测定的方法寻找发现cd2相关蛋白（cd2AP）基因启动子重要的调节成分。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系cd2AP启动子序列，构建人cd2AP启动子不同的缺失变异载体，转... 详细信息

目的在不同物种间通过保守序列分析和荧光素酶功能测定的方法寻找发现cd2相关蛋白（cd2AP）基因启动子重要的调节成分。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系cd2AP启动子序列，构建人cd2AP启动子不同的缺失变异载体，转染来自不同种类的细胞，测定荧光素酶活性，并用全反式维甲酸处理，观测其对cd2AP启动子活性的影响。结果在人、牛、猪的cd2AP推断的启动子区域进行同源比较发现推断的Sp1（specific protein1）和下游启动子成分高度进化保守，进行性缺失荧光素酶分析表明在人胚肾细胞株HEK-293、非洲绿猴肾细胞株Vero、仓鼠肾细胞株BHK-21中人cd2AP启动子活性有相似的形式，ATG上游500bp有基本的启动子活性，再向上100bp启动子活性增加10倍，两个推断的Sp1位点位于该100bp区域内，全反式维甲酸可下调cd2AP启动子的活性。结论我们初步发现推断的Sp1位点和下游启动子成分在cd2AP启动子调控中起重要作用。

关键词： cd2相关蛋白启动子肾病综合征肾小球硬化

cd2相关蛋白剪接异构体启动子区及其缺失体的构建和活性分析

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南京医科大学学报（自然科学版） 2016年第8期36卷 933-936,941页

作者：李楠楠王璐璐张慧文金蕊周国平南京医科大学第一附属医院儿科江苏南京210029

目的:构建cd2相关蛋白(cd2-associated protein,cd2AP)剪接异构体启动子区及其缺失体,转染HEK293及He La细胞,评价其启动子活性。方法:取稳定生长的He La细胞,常规方法提取总RNA,逆转录为c DNA并以此为模板,PCR扩增cd2AP剪接异构体之一C... 详细信息

目的:构建cd2相关蛋白(cd2-associated protein,cd2AP)剪接异构体启动子区及其缺失体,转染HEK293及He La细胞,评价其启动子活性。方法:取稳定生长的He La细胞,常规方法提取总RNA,逆转录为c DNA并以此为模板,PCR扩增cd2AP剪接异构体之一cd2AP002转录起始位点上游2 200 bp的启动子区域片段,亚克隆这些片段至p GL-3基本载体上的多个克隆位点,构建含cd2AP002启动子的重组质粒。cd2AP002质粒构建成功后,以此质粒为模板重复上述步骤构建一系列cd2AP002启动子5′侧翼区缺失体。重组质粒及其缺失体转染人胚肾HEK293细胞及人宫颈癌He La细胞,双荧光素酶报告基因检测各片段的活性。结果:酶切、核酸序列分析证实,成功构建含cd2AP002启动子的重组质粒及其缺失体。经双荧光素酶活性检测证实不同片段大小的5′侧翼区序列缺失体均具有与片段长度相应的活性。结论:成功构建出在HEK293及He La细胞中具有活性的重组质粒及其缺失体。

关键词： cd2相关蛋白启动子剪接异构体

敲低cd2相关蛋白的表达对足细胞黏附和胞质伸展功能的影响

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中华肾脏病杂志 2008年第11期24卷 826-831页

作者：姜华军张春刘建社邓安国朱忠华华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科武汉430022

目的观察敲低足细胞cd2相关蛋白（cd2AP）表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响，并探讨其机制。方法用RPMI1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系，转染针对cd2AP的小分子干扰RNA（siRNA），设无特异靶位点的scrambing序列即control s... 详细信息

目的观察敲低足细胞cd2相关蛋白（cd2AP）表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响，并探讨其机制。方法用RPMI1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系，转染针对cd2AP的小分子干扰RNA（siRNA），设无特异靶位点的scrambing序列即control siRNA转染组作对照。48h后将转染的足细胞制备成单细胞悬液，接种于预铺有Ⅳ型胶原蛋白的96孔板内，33℃下培养90rain后检测足细胞的贴壁率和细胞的伸展面积；流式细胞仪检测抑制cd2AP后足细胞的凋亡率以及在不同氨基核苷嘌呤霉素（PAN）刺激下足细胞的凋亡率；激光共聚焦显微镜下检测F肌动蛋白（F—actin）的分布变化；Western印迹和免疫共沉淀检测nephrin蛋白的表达及其磷酸化水平。结果转染cd2APsiRNA足细胞的黏附率为41．72％±6．07％，显著低于对照组64．46％±8．53％（P〈0．05）；细胞伸展的面积〉200Ixm。的比例（55．86％）亦显著低于对照组（73．61％）。转染cd2APsiRNA后48h足细胞的凋亡率高于对照组[（5．73±0．61）％比（3．26±0．45）％，P〈0．05）。100mg／L的PAN能明显诱导足细胞的凋亡，减少足细胞的黏附率（P〈0．05）。敲低cd2AP的表达后足细胞F—actin的分布发生明显的变化，nephrin蛋白表达和磷酸化水平下降（P〈0．05）。结论敲低cd2AP的表达使足细胞易于凋亡，影响细胞的黏附功能。足细胞骨架蛋白的紊乱和nephrin信号通路的抑制可能是足细胞黏附和伸展功能下降的机制。

关键词： cd2相关蛋白足细胞黏附伸展

2型糖尿病患者尿液胞外囊泡中转化生长因子β1和cd2相关蛋白与糖尿病慢性肾脏疾病的相关性研究

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中国糖尿病杂志 2016年第7期24卷 583-586页

作者：贾懿劼关美萍郑宗基张倩唐川许文伟肖知周王玲薛耀明南方医科大学南方医院内分泌代谢科广州510515

目的探讨尿液胞外囊泡(EVs)中转化生长因子β1(TGF-β1)和cd2相关蛋白(cd2AP)能否作为糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)的生物标记物。方法收集T2DM患者48例,其中,单纯T2DM者18例,微量白蛋白尿者18例,大量白蛋白尿者12例。RT-PCR检测EVs中TGF-... 详细信息

目的探讨尿液胞外囊泡(EVs)中转化生长因子β1(TGF-β1)和cd2相关蛋白(cd2AP)能否作为糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)的生物标记物。方法收集T2DM患者48例,其中,单纯T2DM者18例,微量白蛋白尿者18例,大量白蛋白尿者12例。RT-PCR检测EVs中TGF-β1和cd2AP的表达水平。结果 T2DM组尿液EVs中TGF-β1 mRNA表达水平低于其他两组(Pcd2AP mRNA表达水平高于其他两组(P相关(r=0.491、0.351、0.468,Pcd2AP水平与UAER及Cys-C呈负相关(r=-0.605、-0.385,Pcd2AP能反映CKD的进程,可作为其生物标记物。

关键词：糖尿病慢性肾脏疾病尿液胞外囊泡转化生长因子β1 cd2相关蛋白

霉酚酸酯对大鼠糖尿病肾病及cd2相关蛋白表达的影响

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江苏医药 2005年第10期31卷 773-775,i0003页

作者：吴晓蓉邢昌嬴赵秀芬钱军刘佳俞香宝南京医科大学第一附属医院肾内科

目的研究霉酚酸酯(MMF)对大鼠糖尿病肾病(DN)及cd2相关蛋白(cd2AP)表达的影响。方法纯种雄性SD大鼠24只,分正常对照(A)组、DN模型(B)组和MMF干预DN(C)组。饲养8周后行有关血尿生化指标和光镜组织学、透射电镜、逆转录聚合酶链反应(RT-PC... 详细信息

目的研究霉酚酸酯(MMF)对大鼠糖尿病肾病(DN)及cd2相关蛋白(cd2AP)表达的影响。方法纯种雄性SD大鼠24只,分正常对照(A)组、DN模型(B)组和MMF干预DN(C)组。饲养8周后行有关血尿生化指标和光镜组织学、透射电镜、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)cd2APmRNA表达检测。结果MMF明显减少DN大鼠24 h尿蛋白的排泄,预防血肌酐的升高。组织学显示C组大鼠肾小球面积明显减少,系膜增宽及细胞外基质积聚明显改善。电镜下B组大鼠足细胞足突增宽,部分融合,肾小球毛细血管袢基膜增厚,系膜区增宽,系膜基质增多,C组大鼠以上病变都明显减轻。cd2AP mRNA表达在B组显著高于A组和C组。结论MMF具有治疗SD大鼠DN的作用,并且在转录水平逆转肾皮质cd2AP表达上调。

关键词：霉酚酸酯糖尿病肾病 cd2相关蛋白 cd2AP SD大鼠蛋白表达逆转录聚合酶链反应肾病(DN) mRNA表达细胞外基质积聚

鲤鱼汤对阿霉素肾病大鼠cd2相关蛋白及肾病蛋白的影响

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中华中医药杂志 2012年第6期27卷 1636-1639页

作者：徐常杰沈卫田小剑吴慧王鑫齐玉梅天津医科大学三中心临床学院天津300170 青岛大学医学院青岛266021 天津市第三中心医院天津300170

目的:观察阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞cd2相关蛋白(cd2-associated protein,cd2AP)和肾病蛋白(nephrin)的表达及鲤鱼汤对其表达的影响,进而探讨鲤鱼汤治疗肾病综合征的作用机制。方法:70只Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(N组)、模型... 详细信息

目的:观察阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞cd2相关蛋白(cd2-associated protein,cd2AP)和肾病蛋白(nephrin)的表达及鲤鱼汤对其表达的影响,进而探讨鲤鱼汤治疗肾病综合征的作用机制。方法:70只Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(N组)、模型组(M组)、福辛普利组(F组)、鲤鱼汤低剂量组(YD组)和鲤鱼汤高剂量组(YG组)。M组、F组、YD组和YG组大鼠采用尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg复制阿霉素肾病模型。第3周开始进行干预,YG组和YD组分别予以高、低剂量鲤鱼汤(2.25、1.13g/mL)灌胃7周;F组予以0.09mg/mL福辛普利灌胃;N组和M组予以等量自来水灌胃。采用免疫组化方法检测各组大鼠肾脏中cd2AP、nephrin的表达,并计算其阳性表达的平均光密度值(AOD)。结果:与模型组相比,鲤鱼汤高剂量和鲤鱼汤低剂量组大鼠血清总蛋白水平、血清白蛋白水平等均有一定升高,尤其鲤鱼汤高剂量组差异均有统计学意义(Pcd2AP与nephrin的表达较N组均降低,但与M组比较,都有不同程度的增加(Pcd2AP和nephrin的表达,改善阿霉素肾病大鼠肾小球的损伤,进而起到治疗作用。

关键词：鲤鱼汤阿霉素肾病大鼠 cd2相关蛋白肾病蛋白

靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞中cd2相关蛋白表达的影响及意义

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实用儿科临床杂志 2009年第3期24卷 216-219页

作者：周艳陈吉庆陆超周国平袁传顺管亚飞南京医科大学第一附属医院儿科南京210029

目的研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中cd2相关蛋白(cd2AP)表达的影响及意义。方法利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs。采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平。采用谷氨... 详细信息

目的研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中cd2相关蛋白(cd2AP)表达的影响及意义。方法利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs。采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平。采用谷氨酸诱导hBMSCs凋亡。采用流式细胞术检测hBMSCs凋亡百分率。Westernblot检测hBMSCscd2AP蛋白表达量。应用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果***-4-SiRNA可下调hBMSCsPar-4-mRNA水平,抑制率为88%(P0.05)。2.流式细胞术检测结果显示,与正常对照组比较,谷氨酸加常规hBMSCs组凋亡百分率为(59.12±5.43)%(Pcd2AP的下调作用被显著抑制,cd2AP蛋白的表达量显著上升(Pcd2AP表达的下调。

关键词：人骨髓间充质干细胞靶向抑制 Par-4基因凋亡 cd2相关蛋白