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miR-199a-3p靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2023年第5期52卷 610-616页

作者：覃艳赵可雷李燕朱云峰曹萌新乡医学院第一附属医院内分泌科二病区新乡453100 新乡医学院第一附属医院肿瘤内科二病区新乡453100

目的探究miR-199a-3p过表达靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响。方法通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-3p和CD151的靶向关系。构建CD151pcdNA载体过表达CD151,将miR-199a-3p mimic与pcdNA-cd15... 详细信息

目的探究miR-199a-3p过表达靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响。方法通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-3p和CD151的靶向关系。构建CD151pcdNA载体过表达CD151,将miR-199a-3p mimic与pcdNA-CD151单独或联合转染至B-CPAP细胞,将细胞随机分为4组:Control组、miR-199a-3p mimic组、pcdNA-CD151组和miR-199a-3p mimic+pcdNA-CD151组。BrdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;流式分选检测细胞周期分布;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blot检测MMP-2、Ki-67、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果CD151与miR-199a-3p存在靶向作用关系。与Control组比较,miR-199a-3p mimic组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G2/M、G1期比例降低,S期比例升高,侵袭细胞数降低,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低;pcdNA-CD151组BrdU阳性细胞数升高,细胞凋亡率降低,G2/M、G1期比例升高,S期比例降低,侵袭细胞数升高,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高。与pcdNACD151组比较,miR-199a-3p mimic+pcdNA-CD151组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G2/M、G1期比例降低,S期比例升高,侵袭细胞数降低,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(均PCD151抑制甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,并诱导细胞凋亡。

关键词：甲状腺癌 miR-199a-3p CD151 凋亡侵袭上皮间质转化

细粒棘球绦虫CD151蛋白的生物信息学分析及其编码基因在不同发育阶段的表达

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中国病原生物学杂志 2021年第9期16卷 1041-1046页

作者：赵鹏鹏县锦雯王宁马勋张艳艳孟季蒙王正荣薄新文石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

目的分析细粒棘球绦虫四跨膜蛋白家族成员CD151(Eg-CD151)分子特性和各发育阶段表达水平,为研发包虫病疫苗奠定基础。方法从NCBI数据库下载Eg-CD151氨基酸序列,利用ProtParam、NetPhos 3.1 Server、GPS-SUMO 2.0、Euk-mPLoc 2.0、SOPMA... 详细信息

目的分析细粒棘球绦虫四跨膜蛋白家族成员CD151(Eg-CD151)分子特性和各发育阶段表达水平,为研发包虫病疫苗奠定基础。方法从NCBI数据库下载Eg-CD151氨基酸序列,利用ProtParam、NetPhos 3.1 Server、GPS-SUMO 2.0、Euk-mPLoc 2.0、SOPMA、SWISS MODEL、SignalP 4.1 Server、TMHMM、SMART、Antibody Epitope Prediction在线生物信息学软件预测Eg-CD151蛋白的理化性质、磷酸化位点、棕榈酰化修饰位点、亚细胞定位、二级结构、三维结构、跨膜区域、结构域、B细胞抗原表位;利用DNAMAN和MEGA进行同源序列分析并建立系统发育进化树。利用实时荧光定量PCR检测不同发育阶段Eg-CD151 mRNA相对表达量。结果Eg-CD151蛋白由170 aa组成,为一种不稳定的跨膜蛋白,无信号肽,含2个跨膜区,分别位于6-28、136-158 aa,3个B细胞抗原表位位于非跨膜区域;存在14个磷酸化位点,包含3个酪氨酸磷酸化位点、5个苏氨酸磷酸化位点、6个丝氨酸磷酸化位点;含一个棕榈酰化位点(139-143 aa);二级结构主要为α-螺旋,占60.00%。同源序列比对显示,Eg-CD151与其终末宿主犬、赤狐及中间宿主牛的CD151进化关系较远。实时荧光定量PCR检测原头蚴、成虫两个发育阶段Eg-CD151 mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论生物信息学分析Eg-CD151存在多个B细胞抗原表位,可作为包虫病诊断及疫苗候选抗原。

关键词：细粒棘球绦虫 CD151 抗原表位生物信息学分析

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三阴型乳腺癌中CD151的表达及意义

临床与实验病理学杂志 2019年第9期35卷 1018-1021页

作者：周婷李然陈少华程莉敏李楠冯振中蔡兆根蚌埠医学院第一附属医院病理科蚌埠233000 蚌埠医学院病理学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院临床医学系蚌埠233030

目的观察CD151在三阴型乳腺癌及非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及与乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化EnVision两步法检测CD151在三阴型乳腺癌及非特殊型浸润性乳腺癌中的表达,运用统计学方法分析CD151表达与乳腺癌临床病理特... 详细信息

目的观察CD151在三阴型乳腺癌及非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及与乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化EnVision两步法检测CD151在三阴型乳腺癌及非特殊型浸润性乳腺癌中的表达,运用统计学方法分析CD151表达与乳腺癌临床病理特征、无瘤生存期和预后的关系。结果在三阴型乳腺癌中,CD151表达与淋巴结转移和组织学分级相关(PCD151表达随着组织学分级的增加而升高,与患者年龄(P=0.081)和肿瘤大小(P=0.170)无明显相关性(P均>0.05);三阴型乳腺癌患者肿瘤直径与腋窝淋巴结转移具有相关性(PCD151高表达患者的腋窝淋巴结转移率较高,无瘤生存期较短。结论CD151在三阴型乳腺癌患者中高表达,并与淋巴结转移及组织学分级具有相关性,检测CD151有望成为评估三阴型乳腺癌患者预后的重要指标,为临床治疗和研究提供靶标。

关键词：乳腺肿瘤三阴型 CD151 免疫组织化学预后

CD151-MUT突变对肺腺癌细胞A549迁移的影响及机制

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山东大学学报（医学版） 2020年第3期58卷 81-86页

作者：杨秀婷刘启功左萍刘正湘左后娟滨州医学院附属医院心血管内科山东滨州256600 华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科湖北武汉430030

目的研究CD151整合素结合缺陷突变体(CD151-MUT)突变对肺腺癌细胞A549迁移的影响及机制.方法分别运用CD151、CD151-MUT和GFP质粒转染肺腺癌A549细胞,作为CD151组、CD151-MUT组和GFP组,同时设置Control组及Reagent组.改良的Boyden趋化... 详细信息

目的研究CD151整合素结合缺陷突变体(CD151-MUT)突变对肺腺癌细胞A549迁移的影响及机制.方法分别运用CD151、CD151-MUT和GFP质粒转染肺腺癌A549细胞,作为CD151组、CD151-MUT组和GFP组,同时设置Control组及Reagent组.改良的Boyden趋化小室法检测各组细胞的体外迁移能力.Western blot-ting方法检测各组细胞CD151蛋白、黏着斑激酶(FAK)及P130Cas蛋白的表达.结果 ①CD151组(2.23±0.22)和CD151-MUT组(2.15±0.17)CD151蛋白的表达较Control组(1.03±0.15)、GFP组(1.18±0.13)和Reagent组(1.22±0.11)均增高,5组均值差异有统计学意义(F=39.8,PCD151组和CD151-MUT组间差异无统计学意义(q=1.007,P=0.628).②CD151组较Control组、GFP组及Reagent组促进肿瘤细胞的迁移(F=15.3,P=0.007),而CD151-MUT组细胞的迁移能力较CD151组下降,差异有统计学意义(q=6.760,P=0.010).③CD151高表达促进p-FAK、p-P130Cas蛋白表达增加(F=16.3,PCD151-MUT组p-FAK、p-P130Cas蛋白表达水平较CD151组减弱(q=8.620,P=0.010;q=6.859,P=0.009).结论 CD151-MUT突变破坏CD151-整合素复合体形成,抑制肿瘤转移.CD151-α3/α6整合素复合体在肿瘤细胞迁移过程中发挥重要作用.

关键词：整合素 CD151 肿瘤转移 FAK-P130Cas 肺腺癌细胞A549

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第三军医大学学报 2018年第10期40卷 862-867页

作者：王帅张诗珩张志敏杨镇洲陆军军医大学(第三军医大学)第三附属医院(野战外科研究所)肿瘤中心重庆400042

目的探讨四跨膜蛋白CD151在肺癌脑转移中的预测作用及相关分子通路机制。方法收集2010年12月至2015年6月本中心160例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者临床资料,其中脑转移患者88例,无脑转移患者72例,采用免疫组织化... 详细信息

目的探讨四跨膜蛋白CD151在肺癌脑转移中的预测作用及相关分子通路机制。方法收集2010年12月至2015年6月本中心160例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者临床资料,其中脑转移患者88例,无脑转移患者72例,采用免疫组织化学方法检测CD151在肺癌组织的表达,并运用Spearman分析CD151表达与脑转移相关性。再选择人NSCLC细胞株HCC827,应用siRNA干扰、Western blot、划痕和Transwell实验检测敲低CD151表达对细胞增殖、迁移状况以及上皮间质转化(EMT)、干性通路相关蛋白表达的影响。结果相对于无脑转移患者,NSCLC脑转移患者肺癌组织CD151表达显著增加(P=0.012),Spearman分析表明CD151高表达与脑转移呈正相关(r=0.478,P=0.004)。通过siRNA敲低CD151可上调Ecadherin表达,并下调Vimentin、SOX2、cd44和cd133表达,同时降低HCC827细胞增殖(P=0.026)与迁移能力(P=0.032)。结论 CD151可能通过调控EMT、干性通路相关蛋白表达影响NSCLC细胞的增殖、迁移,CD151可能是NSCLC脑转移的潜在预测因子。

关键词： CD151 非小细胞肺癌脑转移预测因子

CD151参与TGFβ1介导的Wnt信号通路在结肠癌发展中的作用机制研究及汉黄芩素对CD151和TGFβ1的抑制作用

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CD151参与TGFβ1介导的Wnt信号通路在结肠癌发展中的作用机制研究...

作者：王慧兵河北中医学院

学位级别：硕士

目的CD151影响不同癌症中的各种信号通路,并能影响结肠癌的发生发展过程。然而,这些潜在的机制尚不清楚。本研究旨在全面评估CD151在结肠癌中的功能。方法用免疫组化(IHC)分析CRC患者80例CRC患者的CD151表达水平。通过MTT、划痕和Transw... 详细信息

目的CD151影响不同癌症中的各种信号通路,并能影响结肠癌的发生发展过程。然而,这些潜在的机制尚不清楚。本研究旨在全面评估CD151在结肠癌中的功能。方法用免疫组化(IHC)分析CRC患者80例CRC患者的CD151表达水平。通过MTT、划痕和Transwell实验分析了低表达CD151对HT29和HCT116细胞活力、迁移和侵袭的影响。构建结肠癌裸鼠移植瘤模型检测CD151在整体动物水平对结肠癌的影响。RNA-seq技术鉴定在体内与CD151相关的基因。此外,进行了共免疫沉淀法(Co IP)和质谱法(MS)来识别与CD151相互作用的蛋白。进行实时荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)、Western blot、GST-pulldown和Co IP验证相关蛋白与CD151的相互作用。利用分子对接技术将汉黄芩素与TGFβ1的三维结构进行分子对接,随之汉黄芩素作用于人结肠癌细胞利用q RT-PCR检测其对TGFβ1的抑制作用,最后汉黄芩素作用于过表达CD151的人结肠癌细胞利用q RT-PCR检测其对CD151的抑制作用。结果人结肠癌癌组织中CD151水平明显高于癌旁组织。在细胞水平上低表达CD151抑制人结肠癌细胞活力、迁移和侵袭。同时,在整体动物水平上低表达CD151抑制结肠癌裸鼠移植瘤模型。细胞组和裸鼠移植瘤分别进行RNA-seq显示低表达CD151显著改变了多个基因的表达。特别是随着CD151低表达TGFβ1和CEACAM6在体外和体内都随之下调,LGR5仅在体内下调。用q RT-PCR和Western bot对COIP-MS结果进行了验证。此外,用GST-pull down和免疫荧光法证实了TGFβ1、CEACAM6和LGR5与CD151的相关性。汉黄芩素在人结肠癌细胞中抑制TGFβ1激活剂引起的TGFβ1高表达作用,在过表达CD151的人结肠癌细胞中抑制CD151的m RNA水平。结论:低表达CD151可能通过TGFβ1介导来抑制CEACAM6、LGR5和Wnt通路,汉黄芩素对TGFβ1、CD151具有抑制作用。

关键词： CD151 TGFβ1 LGR5 CEACAM6 Wnt信号通路结肠癌汉黄芩素

乳腺癌中CD151表达和M2巨噬细胞浸润相关性分析及其临床意义

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乳腺癌中CD151表达和M2巨噬细胞浸润相关性分析及其临床意义

作者：蔡菁菁中国医科大学

学位级别：硕士

目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤,其发病率逐年上升,且有明显年轻化趋势,一部分患者出现复发转移,导致预后不佳。由于复发转移的机理不够明确,部分患者没有相应有效的治疗方法,如果阐明乳腺癌发生发展的分子机理,将有助于防治乳... 详细信息

目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤,其发病率逐年上升,且有明显年轻化趋势,一部分患者出现复发转移,导致预后不佳。由于复发转移的机理不够明确,部分患者没有相应有效的治疗方法,如果阐明乳腺癌发生发展的分子机理,将有助于防治乳腺癌的复发转移。CD151是四跨膜蛋白家族成员之一,在肿瘤的恶性增殖、浸润及血管生成中有重要意义,研究表明,CD151通过调节整合素的功能和信号传导加速了乳腺癌的发展。但是CD151/LB整合素复合物如何调控肿瘤细胞的生长及转移,仍然不明确。M2巨噬细胞可刺激恶性肿瘤的进展,其调节因子之一的受体RON能与LB整合素形成复合物,因此我们推测CD151/LB整合素复合物可能通过RON刺激M2巨噬细胞极化,促进乳腺癌的发生发展。本文通过检测乳腺癌组织中CD151的表达水平及M2巨噬细胞分布,分析两者相关性及其与患者临床病理参数、预后的关系,初步探讨CD151促进乳腺癌发生发展的分子机理。研究方法:本研究收集辽宁省健康产业集团抚矿总医院2013年3月至2016年6月间手术治疗的乳腺癌石蜡标本100例,所有病例术前均未接受过放化疗及其他相关治疗,同时选取30例癌旁正常组织的石蜡切片作为对照。cd163是M2巨噬细胞的高特异性标志物,研究推荐用cd163标记M2巨噬细胞的存在。我们使用免疫组化SP法检测100例乳腺癌和30例癌旁组织中CD151表达水平及M2巨噬细胞的浸润,使用SPSS统计学软件分析两项指标在乳腺癌及癌旁组织的差异,探讨CD151表达水平和M2巨噬细胞浸润相关性,及其与患者临床病理参数及预后的关系。结果:CD151阳性表达呈棕黄色,主要表达在乳腺癌细胞的包膜及胞质,阳性表达率为70%(70/100),与正常的乳腺组织相比差异具有统计学意义(Pcd163阳性细胞(M2巨噬细胞)呈棕黄色,分布于乳腺癌组织间质中,67%(67/100)的病人出现M2巨噬细胞浸润明显增多,与正常乳腺组织相比具有显著性差异(PCD151高表达与M2巨噬细胞浸润增多呈正相关(r=0.701,PCD151阳性与cd163双阳性乳腺癌患者的转移复发率显著高于对照组患者(PCD151阴性表达患者的无进展生存期优于CD151阳性组(PCD151表达明显升高,并与M2巨噬细胞浸润密切相关,CD151高表达同时M2巨噬细胞浸润增多的患者复发转移率升高,提示CD151可能通过募集或刺激M2巨噬细胞极化促进乳腺癌复发转移。对乳腺癌标本进行CD151和M2巨噬细胞联合检测,将有助于了解乳腺癌生物学行为并判断预后,为临床治疗患者提供指导。

关键词： CD151 M2巨噬细胞乳腺癌免疫组织化学

CD151介导内皮细胞血管生成参与腹主动脉瘤发病

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华中科技大学学报（医学版） 2019年第5期48卷 518-521页

作者：彭丹朱小华商臻左后娟段全炉华中科技大学同济医学院附属同济医院核医学科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科武汉430030

目的研究CD151介导的内皮细胞血管生成在腹主动脉瘤发病机制中的作用。方法在Apoe基因敲除小鼠(Apoe-/-)皮下植入渗透性微泵建立血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠腹主动脉瘤模型,免疫组化法检测动脉瘤组织CD151表达;在脐静脉内皮细胞(HUVECs)中转... 详细信息

目的研究CD151介导的内皮细胞血管生成在腹主动脉瘤发病机制中的作用。方法在Apoe基因敲除小鼠(Apoe-/-)皮下植入渗透性微泵建立血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠腹主动脉瘤模型,免疫组化法检测动脉瘤组织CD151表达;在脐静脉内皮细胞(HUVECs)中转染CD151 siRNA或CD151重组腺相关病毒(rAAV-CD151),调控CD151表达,研究CD151对内皮细胞血管生成的影响;免疫荧光法检测动脉瘤组织cd31阳性细胞数以判断血管新生情况。结果①成功建立腹主动脉瘤小鼠模型;②在AngⅡ诱导的小鼠腹主动脉瘤模型动脉瘤组织内CD151表达升高;③CD151促进HUVECs血管生成;④腹主动脉瘤小鼠动脉瘤组织中血管生成增加。结论 CD151通过促进内皮细胞血管生成参与腹主动脉瘤发生发展过程。

关键词： CD151 腹主动脉瘤血管生成血管内皮细胞

猪CD151蛋白和唾液酸对猪δ冠状病毒在细胞上增殖的影响研究

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猪CD151蛋白和唾液酸对猪δ冠状病毒在细胞上增殖的影响研究

作者：袁一心河南农业大学

学位级别：硕士

近年来,多种感染人或动物的冠状病毒病的暴发给全世界带来了巨大的损失。研究发现冠状病毒具有高变异率,频繁跨种传播等特点,给防控带来很大难度。猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是以仔猪严重水样腹泻、脱水、呕吐等... 详细信息

近年来,多种感染人或动物的冠状病毒病的暴发给全世界带来了巨大的损失。研究发现冠状病毒具有高变异率,频繁跨种传播等特点,给防控带来很大难度。猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是以仔猪严重水样腹泻、脱水、呕吐等为临床特征的一种高度接触性肠道传染病,2014年首次在美国暴发后,迅速蔓延至多个养猪国家,给养猪界带来了巨大的经济损失。。目前对PDCoV的入侵受体以及入侵细胞机制尚不完全清楚。冠状病毒入侵细胞首先需要与宿主细胞进行结合,因此对PDCoV受体的研究有助于深入了解病毒的感染及跨种传播的机制,对新型抗病毒药物和特异性疫苗的研发及对冠状病毒感染的防控有重要意义。本实验室前期通过病毒蛋白铺覆试验发现PDCoV能够与宿主细胞膜中的CD151蛋白和唾液酸相互作用,但其是否为PDCoV的功能性受体则有待进一步研究。本试验对猪CD151在PDCoV感染过程中的作用进行了研究,证实转染并稳定表达CD151的293T不能被PDCoV感染,初步说明CD151不是PDCoV感染的功能性受体。同时对唾液酸在PDCoV感染宿主细胞中的作用进行了系统研究,发现破坏细胞表面糖类和细胞表面唾液酸后都会抑制PDCoV的感染。研究内容如下:1.猪CD151蛋白的体外过表达及其对PDCoV增殖影响的研究应用PCR扩增猪CD151蛋白基因,并将其连接在真核表达载体pEGFP-N1上,成功构建了重组载体pEGFP-N1-CD151,使用脂质体转染法将其转染至PDCoV非易感细胞293T中,通过荧光显微镜可见绿色荧光蛋白,应用western blot对转染后的细胞样品进行蛋白水平的检测,结果显示转染组细胞成功表达出CD151蛋白。用PDCoV感染瞬时表达CD151的293T细胞,通过PCR技术检测PDCoV的感染情况,结果显示转染并瞬时表达CD151的293T不能被PDCoV感染。2.细胞表面糖类对PDCoV增殖影响的研究为了确定细胞表面糖类在PDCoV感染宿主细胞时的作用,本试验先通过MTT试验对NaIO4溶液在ST细胞和LLC-PKI细胞上的安全浓度进行摸索,确定了 NaIO4溶液在两种细胞系上的安全浓度范围。确定安全浓度范围后选择0.2、1和5mM的NaIO4溶液对ST细胞和LLC-PK1细胞进行处理,然后进行接毒,24h后分别收集上清、细胞和混合液,通过RT-qPCR和TCID50测定样品中的病毒含量。结果显示随着NaIO4溶液浓度的升高,PDCoV含量也呈现下调趋势,表示随着NaIO4溶液浓度的升高,PDCoV在细胞上的增殖受到了抑制。进一步用间接免疫荧光法检测NaIO4溶液处理细胞前后的PDCoV的感染程度,结果显示在ST/LLC-PK1细胞中,使用NaIO4破坏细胞表面糖类后能明显降低PDCoV对细胞的感染性。3.细胞表面唾液酸对PDCoV增殖影响的研究为了进一步确定是细胞表面哪种糖类参与PDCoV感染宿主细胞的过程,本试验先通过MTT试验对神经氨酸酶溶液在ST细胞和LLC-PK1细胞上的安全浓度进行摸索,确定了神经氨酸酶溶液在两种细胞系上的安全浓度范围。选择0.0625、0.25、1和4U/ml的神经氨酸酶溶液对ST和LLC-PK1细胞进行处理,然后进行接毒,24h后分别收集上清、细胞和混合液。通过RT-qPCR和TCID50对细胞内和混合液样品中的病毒含量检测,结果显示随着神经氨酸酶浓度的升高,上清、细胞内和混合液样品的PDCoV含量呈现下降趋势,表示随着神经氨酸酶溶液浓度的升高,PDCoV对细胞的感染受到了抑制。间接免疫荧光法进行检测神经氨酸酶溶液处理细胞前后的PDCoV的感染程度,结果显示在ST/LLC-PK1细胞中,使用神经氨酸酶破坏细胞表面唾液酸后能明显降低PDCoV对细胞的感染。综上所述,CD151蛋白不能够介导PDCoV入侵宿主细胞;PDCoV在入侵阶段可能与细胞表面唾液酸结合使病毒粒子吸附在宿主细胞上。这些结果为PDCoV的受体研究提供了研究基础,也为PDCoV的抗病毒药物筛选提供一定的思路。

关键词：猪δ冠状病毒 CD151 唾液酸