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c6细胞表达的人Angiostatin Kringle(1-3)体外抑制血管内皮细胞生长的研究

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解放军医学杂志 2000年第2期25卷 83-86页

作者：高大宽章翔吴景文屈延荆俊杰梁景文李树合第四军医大学西京医院

为研究人AngiostatinKringle( 1 3) [AK( 1 3) ]抑制血管内皮细胞生长的活性 ,利用脂质体法将带有大鼠血清白蛋白分泌信号的人AK( 1 3)基因导入大鼠c6胶质瘤细胞 ,并用G41 8筛选获得目的细胞株。采用电镜、流式细胞术、免疫组化和Wes... 详细信息

为研究人AngiostatinKringle( 1 3) [AK( 1 3) ]抑制血管内皮细胞生长的活性 ,利用脂质体法将带有大鼠血清白蛋白分泌信号的人AK( 1 3)基因导入大鼠c6胶质瘤细胞 ,并用G41 8筛选获得目的细胞株。采用电镜、流式细胞术、免疫组化和Westernblot等方法 ,检测转染前后细胞超微结构、细胞周期及AK( 1 3)蛋白表达情况 ,并用人脐静脉内皮细胞增殖实验检测目的细胞株表达的AK( 1 3)蛋白抑制血管内皮细胞生长的活性。结果表明 ,成功转染人AK( 1 3)基因的大鼠c6胶质瘤细胞可稳定表达AK( 1 3)蛋白 ,且具有抗血管内皮细胞增殖活性的良好作用 ,为进一步进行体内抗血管生成基因治疗奠定了基础。

关键词： Angiostatin c6细胞脑胶质瘤基因治疗

Tenuifoliside A基于ERK通路保护皮质酮损伤c6细胞作用研究

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中国药理学通报 2013年第4期29卷 506-511页

作者：余冰颖董宪喆胡园穆丽华黄志雄刘屏河北北方学院药学系河北张家口075000 解放军总医院临床药理研究室北京100853

目的探讨远志寡糖酯成分Tenuifoliside A(TFSA)对皮质酮诱导大鼠神经胶质瘤细胞(c6)损伤的保护作用及其分子机制。方法建立以0.8 mmol.L-1的皮质酮作用于c6细胞48h的损伤模型;用皮质酮预处理c6细胞30 min后加入30、10和3μmol.L-1的TFSA... 详细信息

目的探讨远志寡糖酯成分Tenuifoliside A(TFSA)对皮质酮诱导大鼠神经胶质瘤细胞(c6)损伤的保护作用及其分子机制。方法建立以0.8 mmol.L-1的皮质酮作用于c6细胞48h的损伤模型;用皮质酮预处理c6细胞30 min后加入30、10和3μmol.L-1的TFSA,共同作用48 h,ccK试剂盒检测TFSA对皮质酮诱导c6细胞损伤的存活率;荧光显微镜观察c6细胞Hoechst 33258染核后凋亡形态变化;Western blot检测c6细胞内ERK及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;caspase检测试剂盒检测c6细胞内caspase激酶活力的变化。结果与正常对照组比,0.8 mmol.L-1的皮质酮对c6细胞有明显的损伤作用,其细胞存活率降低至69.58%(与正常组相比,P细胞核形态改变,出现凋亡小体;胞内ERK蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显降低(与正常组相比,Pcaspase-3激酶的活力增加(P细胞存活率明显提高至84.48%(与模型组相比,P细胞核形态有明显改善;细胞内的ERK蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显增加(Pcaspase-3激酶活力明显降低。结论 TFSA对皮质酮诱导损伤的c6细胞具有保护作用,其机制可能与TFSA能激活c6细胞内ERK通路,提高抗凋亡蛋白Bcl-2表达,降低caspase-3激酶活性有关。

关键词： TenuifolisideA 远志 c6细胞 ERK 凋亡神经保护

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土槿皮乙酸对胶质瘤c6细胞生长的抑制作用

上海交通大学学报（医学版） 2012年第6期32卷 716-719,725页

作者：陈振军孙冬弢袁媛沈阳医学院沈洲医院神经外科沈阳110002

目的研究土槿皮乙酸(PAB)对大鼠胶质瘤c6细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法采用MTT法测定不同质量浓度(0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、8.0、16.0μg/mL)PAB对c6细胞增殖能力的影响。以0(对照组)、0.15、0.3、0.6μg/mL PAB处理后,采... 详细信息

目的研究土槿皮乙酸(PAB)对大鼠胶质瘤c6细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法采用MTT法测定不同质量浓度(0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、8.0、16.0μg/mL)PAB对c6细胞增殖能力的影响。以0(对照组)、0.15、0.3、0.6μg/mL PAB处理后,采用Annexin V-FITc/PI双染色法经流式细胞仪检测c6细胞的凋亡情况,RT-PcR和Western blotting法检测凋亡抑制蛋白Survivin、自噬标志性分子微管相关蛋白1轻链3-β(Lc3)和凋亡剪切产物聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)的表达。结果 MTT法测定结果显示,PAB呈时间剂量依赖性抑制c6细胞的生长,PAB处理12、24、36、72 h后,PAB对c6细胞的半数致死剂量(Ic50)分别为1.23、1.05、0.30、0.09μg/mL。流式细胞仪检测结果显示,0.15、0.30、0.60μg/mL PAB作用c6细胞36 h后细胞出现凋亡,并且随着PAB浓度的升高,细胞凋亡率呈上升趋势,分别为(24.89±0.92)%、(31.38±0.36)%和(62.84±2.22)%,与对照组比较差异均有统计学意义(PcR和Western blotting检测结果显示:PAB处理后的c6细胞内Survivin表达下降,Lc3和cleaved-PARP表达升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P细胞内Survivin、Lc3、cleaved-PARP的表达变化呈剂量依赖性。结论 PAB可抑制大鼠胶质瘤c6细胞增殖,并促进其凋亡;下调Survivin的表达,上调Lc3和cleaved-PARP的表达为PAB可能的作用机制。

关键词：土槿皮乙酸 c6细胞生长抑制

慢性吗啡处理对c6细胞EAAT3蛋白表达的影响及其机制研究

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中国药理学通报 2012年第11期28卷 1589-1593页

作者：吴强何惠燕傅艳妮刘玲曹铭辉中山大学孙逸仙纪念医院麻醉科广东广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院消毒供应中心广东广州510120

目的探讨慢性吗啡暴露、戒断、再次暴露对c6细胞兴奋性氨基酸转运蛋白3(excitatory amino-acid transporter 3,EAAT3)蛋白表达的影响及可能机制。方法 0.1～10μmol·L-1吗啡作用于c6细胞不同时间,Western blot检测c6细胞EAAT3蛋白表达... 详细信息

目的探讨慢性吗啡暴露、戒断、再次暴露对c6细胞兴奋性氨基酸转运蛋白3(excitatory amino-acid transporter 3,EAAT3)蛋白表达的影响及可能机制。方法 0.1～10μmol·L-1吗啡作用于c6细胞不同时间,Western blot检测c6细胞EAAT3蛋白表达水平变化,然后用不含吗啡的培养液培养细胞模拟吗啡自然戒断过程,待EAAT3蛋白表达回升后,再次吗啡暴露(吗啡浓度为第1次给药的1/2)模拟吗啡复吸过程,观察吗啡多次暴露对c6细胞EAAT3蛋白表达的影响。最后在吗啡再次暴露前15 min使用纳洛酮,观察纳洛酮对多次吗啡暴露引起的c6细胞EAAT3表达变化的影响。结果 10μmol·L-1吗啡作用于c6细胞至少48 h可下调c6细胞EAAT3蛋白表达(Pc6细胞4 h即可下调c6细胞EAAT3蛋白表达水平(Pc6细胞EAAT3表达水平,停用吗啡EAAT3表达回升,吗啡再次暴露引起EAAT3表达水平下降所需吗啡浓度降低,暴露时间缩短。吗啡通过作用于阿片受体诱导c6细胞EAAT3表达下降。

关键词： c6细胞吗啡纳洛酮 EAAT3 阿片受体复吸

p38MAPK抑制剂SB-202190对大鼠胶质瘤c6细胞的双重作用

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中国药理学通报 2002年第5期18卷 512-515页

作者：张丰李青曹云新王莉邵秋杰林圣彩第四军医大学西京医院病理科西安710033 第四军医大学免疫学教研室西安7100332 香港科技大学生化教研室香港00852

目的　探讨 p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190对c6细胞生物活性的影响。方法　采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察SB 2 0 2 190诱导胶质瘤细胞的凋亡 ;应用流式细胞仪检测细胞周期变化和是否有凋亡发生。结果　浓度分别为 10、... 详细信息

目的　探讨 p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190对c6细胞生物活性的影响。方法　采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察SB 2 0 2 190诱导胶质瘤细胞的凋亡 ;应用流式细胞仪检测细胞周期变化和是否有凋亡发生。结果　浓度分别为 10、2 0、4 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190能促进c6细胞的细胞周期从G1期过度到S期 ;但 6 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190却诱导c6细胞凋亡 ,凋亡率与时间呈正相关 ,透射电镜观察结果显示 ,凋亡细胞的体积缩小、细胞核浓聚缩小 ,染色质固缩聚集于核膜下 ,胞质浓缩 ,有的细胞染色质浓缩至核膜下成新月状 ;琼脂糖凝胶电泳呈现出特征性的DNA“梯状”带。结论　SB 2 0 2 190在低浓度时促进c6细胞增殖 ,高浓度时诱导细胞凋亡。

关键词： SB-202190 p38MAPK抑制剂细胞周期细胞凋亡 c6细胞生物活性透射电镜胶质瘤细胞动物实验

外源性RGS16基因稳定转染对胶质瘤c6细胞生长的影响

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癌症 2006年第1期25卷 51-55页

作者：洪柳李青陈广生张丰聂蕾林圣彩第四军医大学西京医院病理科陕西西安710032 厦门大学生命科学学院福建厦门361000

背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤c6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染c6细胞,经G418筛选后荧光显微镜... 详细信息

背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤c6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染c6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PcR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线、平板克隆形成等方法研究RGS16基因对胶质瘤细胞周期、生长及增殖的影响。结果:成功构建了稳定表达RGS16和表达空载体的细胞系c6-RGS16、c6-GFP。c6-RGS16、c6-GFP和c6经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为28.5%、18.9%和14.3%(Pc6-RGS16生长的速度明显快于c6-GFP及c6,但其平板克隆形成率分别为12%、25%和25%(P6促进c6细胞周期从G1期向S期过渡,加快细胞生长速度,但是并不促进细胞克隆形成。

关键词： RGS16基因基因转染细胞生长胶质瘤 c6细胞大鼠

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c6细胞HGPRT缺陷株诱变的试验研究

中国畜牧兽医 2011年第12期38卷 50-52页

作者：王新孙书芳谭建华赖小平青岛农业大学动物科学技术学院山东青岛266109 广州中医药大学中药学院广东广州510006 山东省青岛市中心血站山东青岛266071 解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

通过N-甲基-N′-硝基亚硝基胍、8-氮鸟嘌呤、6-巯基鸟嘌呤紫外线照射的联合作用,试图建立c6细胞的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷株,为建立大鼠垂体促性腺激素杂交瘤细胞株奠定基础,但最终未能获得预期的能够被HAT培养基筛选的HGP... 详细信息

通过N-甲基-N′-硝基亚硝基胍、8-氮鸟嘌呤、6-巯基鸟嘌呤紫外线照射的联合作用,试图建立c6细胞的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷株,为建立大鼠垂体促性腺激素杂交瘤细胞株奠定基础,但最终未能获得预期的能够被HAT培养基筛选的HGPRT-缺陷株,提示c6细胞株的HGPRT基因非常稳定,诱变方法难以使其突变缺失。

关键词： MNNG 8-AG 6-TG HGPRT c6细胞

增强型绿色荧光蛋白表达对鼠c6细胞生物学特征影响的研究

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四川大学学报（自然科学版） 2006年第3期43卷 655-660页

作者：王有为宋玉光胡火珍林洪邢玉芝陈芬四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610041 四川省宜宾市第二人民医院四川宜宾644000

脂质体包裹质粒pEGFP-N1转染c6细胞,经G418筛选,得到稳定表达绿色荧光的c6-EGFP细胞.细胞计数,MTT,流式细胞术分别测定c6细胞在转染绿色荧光蛋白后增殖性,细胞活力以及细胞周期等生物学特性.c6细胞在转染了绿色荧光蛋白基因后细胞增殖... 详细信息

脂质体包裹质粒pEGFP-N1转染c6细胞,经G418筛选,得到稳定表达绿色荧光的c6-EGFP细胞.细胞计数,MTT,流式细胞术分别测定c6细胞在转染绿色荧光蛋白后增殖性,细胞活力以及细胞周期等生物学特性.c6细胞在转染了绿色荧光蛋白基因后细胞增殖性降低,细胞活力降低,细胞周期也发生了一些改变.

关键词：增强型绿色荧光蛋白转染 c6细胞 MTT 流式细胞术

环指蛋白146在Aβ诱导的c6细胞凋亡中的作用研究

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神经解剖学杂志 2019年第6期35卷 611-616页

作者：黄银魏慧玲王志军司胜斌张慧涛王银刘娟丁娟宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院银川750004 宁夏医科大学总医院银川750004

目的:探讨环指蛋白146(RNF146)在Aβ诱导c6细胞的凋亡过程中的作用。方法:大鼠神经胶质瘤细胞株c6细胞分为对照组(control)和Aβ处理组(Aβ)。Annexin V-EGFP/PI染色法检测细胞凋亡,Western Blot方法检测c6细胞中RNF146的表达和凋亡诱... 详细信息

目的:探讨环指蛋白146(RNF146)在Aβ诱导c6细胞的凋亡过程中的作用。方法:大鼠神经胶质瘤细胞株c6细胞分为对照组(control)和Aβ处理组(Aβ)。Annexin V-EGFP/PI染色法检测细胞凋亡,Western Blot方法检测c6细胞中RNF146的表达和凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达和分布。结果:与对照组比较,Aβ处理能够促进细胞凋亡,同时减少细胞中RNF146的表达,并促进AIF核转位。结论:Aβ可导致c6细胞凋亡,其机制与RNF146表达下调并激活AIF核转位有关。

关键词： β-淀粉样肽环指蛋白146 凋亡诱导因子 c6细胞