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反转录病毒载体介导Indian hedgehog信号蛋白在c3h10t1/2细胞中的表达及成骨诱导潜能

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中国组织工程研究 2012年第24期16卷 4381-4386页

作者：邹沙沙陈婷婷张玲玲田汝辉杨施李铮胡洪亮上海交通大学医学院附属仁济医院上海市人类精子库精子发育与遗传实验室上海交通大学Bio-X中心上海市200001

背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用。目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在c3h10t1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果。方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克... 详细信息

背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用。目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在c3h10t1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果。方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克隆到反转录病毒载体pSFG上,包装出假病毒转染c3h10t1/2细胞,在共聚焦显微镜下观察其绿色荧光蛋白强度及转染效率。运用Western blot方法检测Ihh蛋白的表达,观察c3h10t1/2细胞形态学变化,碱性磷酸酶染色检测成骨活性。结果与结论:共聚焦显微镜下观察到大量的绿色荧光表达,Western blot检测结果显示Ihh基因及增强型绿色荧光蛋白基因在c3h10t1/2中呈显著共表达。在体外培养过程中,Ihh能诱导c3h10t1/2细胞形态学发生改变,增加碱性磷酸酶活性,提示Ihh具有诱导c3h10t1/2细胞向骨细胞分化的潜能。

关键词：骨发育 Ihh 反转录病毒 c3h10t1/2 成骨

酒精对间充质干细胞c3h10t1/2生物学特性和心肌样细胞分化的影响

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酒精对间充质干细胞C3H10T1/2生物学特性和心肌样细胞分化的影响

作者：许春华重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：酒精对心脏发育的致畸作用已经明确，但机制尚不清楚，心脏的发生和早期发育是一个起源于干细胞的极其复杂的增殖和多因子诱导分化调控过程，本研究以间充质干细胞c3h10t1/2为研究对象，通过体外培养过程中酒精的干预，观察其对c3... 详细信息

目的：酒精对心脏发育的致畸作用已经明确，但机制尚不清楚，心脏的发生和早期发育是一个起源于干细胞的极其复杂的增殖和多因子诱导分化调控过程，本研究以间充质干细胞c3h10t1/2为研究对象，通过体外培养过程中酒精的干预，观察其对c3h10t1/2生物学特性及向心肌样细胞分化的影响，从细胞增殖及分化能力方面探讨酒精致畸的可能机制。方法：应用Mtt比色法观察酒精对间充质干细胞c3h10t1/2的毒性作用并筛选出低、高浓度干预组，在不同培养时间点检测细胞吸光值并绘制生长曲线;不同浓度酒精干预48h后应用流式细胞仪检测细胞周期的变化，应用Q-PcR和Western blot方法检测各组干细胞表面标志Oct-4的表达水平变化。研究酒精干预后对c3h10t1/2向心肌样细胞分化的影响时，分为四个实验组：BMP2诱导组，酒精+BMP2诱导组，c3h10t1/2组和阳性对照组，诱导后1、2、3、4周4个时间点应用Q-PcR检测心脏发育相关基因GAtA4、MEF2c的表达情况，Western blot检测心肌特异性蛋白ctnt、cx43的表达情况。结果：间充质干细胞c3h10t1/2在37℃、5%cO2的细胞培养孵箱中生长状态良好，增殖速度快，2-3d可传代。Mtt筛选出50mM、100mM、200mM浓度的酒精作为干预浓度，50mM酒精对细胞增殖未产生显著影响（P>0.05），200mM酒精对细胞抑制率为20％左右（P1较空白组增大。各组间干细胞表面标志Oct-4的表达在基因及蛋白水平均无显著差异（P>0.05）。c3h10t1/2细胞加入BMP2诱导后细胞折光性增强，呈梭形，细胞间连接紧密且排列趋向一致。BMP2诱导组和酒精+BMP2诱导组GAtA4的表达在诱导的第1周开始升高，第2周达高峰，MEF2c的表达在第2周升高，第3、4周达高峰，两组间无显著差异（P>0.05），但表达量仍明显低于阳性对照组（Pctnt、cx43的表达，两组间无显著差异（P>0.05），但仍低于阳性对照组（Pc3h10t1/2细胞的增殖，且抑制作用呈现剂量依赖性;实验所用浓度酒精虽未对细胞周期产生显著影响，但提示200mM酒精组细胞发生S期阻滞从而抑制细胞增殖;酒精不影响干细胞标志物Oct-4的表达，对干细胞细胞向心肌样细胞分化的能力亦无显著影响，提示酒精可能并未通过影响Oct4的表达进一步影响细胞分化能力来产生致畸作用。

关键词：酒精间充质干细胞 c3h10t1/2 心肌样细胞分化 BMP2

东紫苏精油对c3h10t1/2细胞成脂分化及hepG2细胞脂质积累的影响及机制研究

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东紫苏精油对C3H10T1/2细胞成脂分化及HepG2细胞脂质积累的影响及...

作者：张梦媛昆明医科大学

学位级别：硕士

【目的】东紫苏(Elsholtiza bodinieri Vaniot)作为云南一种药食两用植物资源,含有丰富的黄酮类、萜类等化学成分,具有抗氧化、抗炎、抗病原微生物、解热、镇痛、解痉、增强免疫力等作用,课题组前期研究发现,东紫苏精油对于秀丽隐杆线... 详细信息

【目的】东紫苏(Elsholtiza bodinieri Vaniot)作为云南一种药食两用植物资源,含有丰富的黄酮类、萜类等化学成分,具有抗氧化、抗炎、抗病原微生物、解热、镇痛、解痉、增强免疫力等作用,课题组前期研究发现,东紫苏精油对于秀丽隐杆线虫肥胖模型具有减脂功能,但作用机制有待深入研究。本研究以c3h10t1/2成脂细胞及PA诱导的hepG2细胞为模型,探讨东紫苏精油在细胞中对脂质代谢的影响及机制,为东紫苏的药用研究和食品开发提供基础数据。【方法】采用微波无溶剂法提取东紫苏精油。以0.5 M IBMX、2.5 m M地塞米松、344.38μM胰岛素、1 m M罗格列酮、125μM吲哚美辛、30.72μM t3诱导c3h10t1/2细胞成脂;250μmo L棕榈酸诱导建立人肝癌hepG2细胞脂肪变性模型。利用Mtt法检测细胞成活率,以确定东紫苏精油及奥利司他(Orlista)适宜的作用浓度范围;设置空白对照组、模型对照组、奥利司他阳性对照和精油干预组、用油红O染色法对干预后的细胞进行染色并对脂肪含量进行定量分析;GPO-PAP酶法、cOD-PAP酶法检测东紫苏精油处理后细胞内甘油三酯、胆固醇含量的变化;定量逆转录-聚合酶链反应基因转录分析法和蛋白质印迹法分别检测c/EBPα、PPARγ、FABP4、AMPK、SIRt1、PPARα、cD36 mRNA和相关蛋白在脂质代谢调节中的表达水平,揭示东紫苏精油对细胞脂质代谢的影响及作用的分子机制。数据使用Image J处理,SPSS.17.0软件包统计分析,Pc3h10t1/2成脂细胞及PA诱导的hepG2细胞内甘油三酯和胆固醇的积累。并通过降低ccAAt增强子结合蛋白α、过氧化酶体增殖物激活受体γ及脂肪酸结合蛋白4,显著抑制c3h10t1/2细胞的成脂分化,由此认为东紫苏精油可能通过c/EBP-α/PPARγ/FABP4信号通路发挥对c3h10t1/2成脂细胞脂质代谢的调节作用;东紫苏精油通过增加沉默信息调节因1、磷酸化AMP激活的蛋白激酶、过氧化酶体增殖物激活受体α蛋白及其下游脂肪酸转位酶蛋白的表达,显著减少了PA诱导的hepG2细胞内脂质积累,由此认为东紫苏精油可能通过SIRt1/AMPK信号通路发挥对PA诱导的hepG2细胞的降脂作用。此外,东紫苏精油还能通过减轻凋亡程度来改善PA诱导产生的脂毒性。【结论】东紫苏精油具有一定减脂作用,可能是其萜类化学成分在发挥重要作用。我们认为东紫苏精油可能通过调控c/EBP-α/PPARγ/FABP4信号通路发挥对c3h10t1/2细胞成脂分化的抑制作用;可能通过调控SIRt1/AMPK信号通路发挥对PA诱导的hepG2细胞脂质代谢的抑制作用,但其具体机制及其能否通过其他途径来减少脂肪含量,还有待后续深入研究。

关键词：东紫苏精油 c3h10t1/2 hepG2细胞脂质代谢

黄芪多糖对c3h10t1/2细胞棕色脂肪分化中长链非编码RNA表达谱的影响

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激光生物学报 2020年第4期29卷 333-343,351页

作者：张世和曹宇鑫邓步皓高旭阳赵俊星山西农业大学动物科技学院太谷030800

本试验旨在探究黄芪多糖(APS)对小鼠间充质干细胞c3h10t1/2细胞棕色脂肪化过程中长链非编码RNA(lncRNA)表达谱的影响。试验以c3h10t1/2细胞为研究对象,在成脂诱导分化培养液中添加0.4 g/L的APS,以诱导分化1.5 d的细胞构建文库后测序,筛... 详细信息

本试验旨在探究黄芪多糖(APS)对小鼠间充质干细胞c3h10t1/2细胞棕色脂肪化过程中长链非编码RNA(lncRNA)表达谱的影响。试验以c3h10t1/2细胞为研究对象,在成脂诱导分化培养液中添加0.4 g/L的APS,以诱导分化1.5 d的细胞构建文库后测序,筛选差异mRNAs和差异lncRNAs,并对差异mRNAs和差异lncRNAs的顺式及共表达作用预测的靶基因进行了功能分析。通过荧光定量PcR随机分析了3个lncRNAs和3个mRNAs的表达水平,验证了测序结果的准确性。研究结果表明,本次测序共得到13450个lncRNAs和57776个mRNAs。通过对其表达量、长度、外显子个数和成对重复性检验分析证明了测序数据的可靠性较好。筛选共得到153个差异表达的lncRNAs和1238个差异表达的mRNAs。结果表明,差异mRNAs主要基因本体(GO)注释富集在53个功能分类中,京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析富集在343条通路中。差异lncRNAs顺式及共表达作用预测的靶基因GO注释分别富集在34和33个功能分类中,在分子功能中条目一致。KEGG分析显示,多个基因富集在脂肪代谢和脂肪分化的信号通路中,尤其在胰高血糖素及cAMP信号通路中富集显著。综上表明,APS导致了c3h10t1/2细胞成脂分化中lncRNA表达谱的变化。本研究结果可为进一步解析APS对干细胞的分化调节提供科学依据。

关键词：黄芪多糖 lncRNAs c3h10t1/2 棕色脂肪分化表达谱

MicroRNA-20a对小鼠c3h10t1/2成骨分化及骨形成负调节子cKIP-1的影响研究

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MicroRNA-20a对小鼠C3H10T1/2成骨分化及骨形成负调节子CKIP-1的...

MicroRNA-20a对小鼠c3h10t1/2成骨分化及骨形成负调节子cKIP-1的影响研究

中华口腔医学会口腔修复学专业委员会第十次全国口腔修复学术大会

作者：陈俊凤江晓霞均凯解放军总医院解放军医学院

目的:间充质干细胞是一种能自我更新及多向分化的多潜能间质细胞,能向脂肪组织、骨、软骨和肌肉组织分化,因此为治疗学应用带来希望。MicroRNA在许多生物过程中其发挥关键作用,包括细胞增殖,分化和凋亡。我们研究MiR-20a对小鼠c3h10t1/... 详细信息

目的:间充质干细胞是一种能自我更新及多向分化的多潜能间质细胞,能向脂肪组织、骨、软骨和肌肉组织分化,因此为治疗学应用带来希望。MicroRNA在许多生物过程中其发挥关键作用,包括细胞增殖,分化和凋亡。我们研究MiR-20a对小鼠c3h10t1/2细胞成骨作用的影响及对骨形成负调节子cKIP-1的调节作用。方法:对贴壁培养的小鼠c3h10t1/2细胞成骨诱导不同时间,ALP、茜素红染色及qRtPcR验证诱导结果,同时观察MiR-20a在诱导过程中表达变化;细胞转染MiR-20amimics,ckip-1siRNA,荧光显微镜下观察转染效果,qRt-PcR测定过表达及敲低效率;qRt-PcR检测过表达MiR-20a及敲低ckip-1对细胞成骨分化的影响及对骨形成负调节子ckip-1基因表达的影响。结果:我们发现成骨标记基因ALP、Runx2、OSX、OcN、BSP随小鼠c3h10t1/2细胞诱导过程逐渐升高,且成骨诱导分化过程中MiR-20a表达上调。过表达MiR-20a促进c3h10t1/2细胞成骨分化,成骨标记基因碱性磷酸酶ALP、RUNt相关因子2(RUNX2)、OSX、骨钙(OcN)涎蛋白(BSP)著高于对照组。此外过表达MiR-20a抑制骨形成负调节子ckip-1表达;且敲低ckip-1促进细胞成骨标记基因表达。结论:MiR-20a促进c3h10t1/2细胞成骨分化,并下调骨形成负调节子ckip-1的表达。

关键词： MiR-20a c3h10t1/2 成骨分化 ckip-1

来源： cnki会议评论

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MicroRNA-20a对小鼠C3H10T1/2成骨分化及骨形成负调节子CKIP-1的...

tenomodulin基因转染对NIh3t3和c3h10t1/2细胞系肌腱相关分子表达的作用

第十次全国老年口腔医学学术年会

作者：陈俊凤杨燕美董晓惠江晓霞曹均凯中国人民解放军总医院口腔医学中心

目的:间充质干细胞是一种能自我更新及多向分化的多潜能间质细胞,能向脂肪组织、骨、软骨和肌肉组织分化,因此为治疗学应用带来希望。MicroRNA在许多生物过程中其发挥关键作用,包括细胞增殖,分化和凋亡。我们研究MiR-20a对小鼠c3h10t1/2细胞成骨作用的影响及对骨形成负调节子cKIP-1的调节作用。方法:对贴壁培养的小鼠c3h10t1/2细胞成骨诱导不同时间,ALP、茜素红染色及q Rt-PcR验证诱导结果,同时观察Mi R-20a在诱导过程中表达变化;细胞转染Mi R-20a mimics,ckip-1siRNA,荧光显微镜下观察转染效果,q Rt-PcR测定过表达及敲低效率;q Rt-PcR检测过表达Mi R-20a及敲低ckip-1对细胞成骨分化的影响及对骨形成负调节子ckip-1基因表达的影响。结果:我们发现成骨标记基因ALP、Runx2、OSX、OcN、BSP随小鼠c3h10t1/2细胞诱导过程逐渐升高,且成骨诱导分化过程中Mi R-20a表达上调。过表达Mi R-20a促进c3h10t1/2细胞成骨分化,成骨标记基因碱性磷酸酶ALP、RUNt相关因子2(RUNX2)、OSX、骨钙(OcN)涎蛋白(BSP)著高于对照组。此外过表达Mi R-20a抑制骨形成负调节子ckip-1表达;且敲低ckip-1促进细胞成骨标记基因表达。结论:Mi R-20a促进c3h10t1/2细胞成骨分化,并下调骨形成负调节子ckip-1的表达。

关键词： MiR-20a c3h10t1/2 成骨分化 ckip-1

来源： cnki会议评论

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组织工程与重建外科杂志 2011年第1期7卷 6-10页

作者：蒋永康何晶李洁曹谊林刘伟上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的研究过表达tenomodulin(tNMD)对NIh3t3和c3h10t1/2细胞系肌腱相关分子表达的作用。方法体外培养NIh3t3和c3h10t1/2细胞系,利用脂质体法在两种细胞系中分别转染pcAGGS空载体和pcAGGS-tNMD表达载体,G418进行稳定筛选。Rt-PcR确认成功... 详细信息

目的研究过表达tenomodulin(tNMD)对NIh3t3和c3h10t1/2细胞系肌腱相关分子表达的作用。方法体外培养NIh3t3和c3h10t1/2细胞系,利用脂质体法在两种细胞系中分别转染pcAGGS空载体和pcAGGS-tNMD表达载体,G418进行稳定筛选。Rt-PcR确认成功转染后,利用倒置相差显微镜观察细胞形态,同时定量PcR检测肌腱相关基因的表达情况。结果两种细胞系转染后细胞形态均无明显改变。基因水平上,NIh3t3细胞过表达tNMD后,collagenⅥ和biglycan显著降低,collagenⅠ没有显著差别。而在c3h10t1/2细胞中,collagenⅠ和biglycan显著升高,collagenⅥ没有显著差别。结论过表达tNMD对NIh3t3和c3h10t1/2细胞系的细胞形态没有影响,但能影响肌腱相关基因的表达情况。

关键词：肌腱过表达 tenomodulin NIh3t3 c3h10t1/2

用X射线转化的c3h10t1/2小鼠细胞和诱导的小鼠肉瘤细胞的癌基因

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国际放射医学核医学杂志 1993年第2期 70-70页

作者：刘炳辰唐卫生

电离辐射可引起DNA的多种损伤,并导致癌基因的激活。为了阐明辐射诱发细胞转化及肉瘤发生,对辐射诱导不同癌基因的转录进行了分析,并探讨了这些基因在早期被激活的可能性。利用分子杂交方法研究了X射线转化的c3h10t1/2(XtD)及诱发的小... 详细信息

电离辐射可引起DNA的多种损伤,并导致癌基因的激活。为了阐明辐射诱发细胞转化及肉瘤发生,对辐射诱导不同癌基因的转录进行了分析,并探讨了这些基因在早期被激活的可能性。利用分子杂交方法研究了X射线转化的c3h10t1/2(XtD)及诱发的小鼠肉瘤(RIF-1)细胞中不同癌基因的表达、扩增和重排的变异。Northern杂

关键词：癌基因肉瘤重排扩增 c3h10t1/2 细胞转化

238Puα粒子诱发c3h10t1/2转化细胞的成瘤性能力弱于X射线

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国际放射医学核医学杂志 1999年第5期23卷 240-240页

作者：楼铁柱