反转录病毒载体介导Indian hedgehog信号蛋白在C3H10T1/2细胞中的表达及成骨诱导潜能

作     者：邹沙沙 陈婷婷 张玲玲 田汝辉 杨施 李铮 胡洪亮 Zou Sha-sha;Chen Ting-ting;Zhang Ling-ling;Tian Ru-hui;Yang Shi;Li Zheng;Hu Hong-liang

作者机构：上海交通大学医学院附属仁济医院上海市人类精子库精子发育与遗传实验室 上海交通大学Bio-X中心上海市200001 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2012年第16卷第24期

页      面：4381-4386页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 0710[理学-生物学] 0403[教育学-体育学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 08[工学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30973069 30672146) 课题名称分别为:Ihh在组织工程骨构建中作用和机制研究 Wnt7b的信号传导在骨发育中的作用和机制研究~~ 

主　　题：骨发育 Ihh 反转录病毒 C3H10T1/2 成骨 

摘      要：背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用。目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在C3H10T1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果。方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克隆到反转录病毒载体pSFG上,包装出假病毒转染C3H10T1/2细胞,在共聚焦显微镜下观察其绿色荧光蛋白强度及转染效率。运用Western blot方法检测Ihh蛋白的表达,观察C3H10T1/2细胞形态学变化,碱性磷酸酶染色检测成骨活性。结果与结论:共聚焦显微镜下观察到大量的绿色荧光表达,Western blot检测结果显示Ihh基因及增强型绿色荧光蛋白基因在C3H10T1/2中呈显著共表达。在体外培养过程中,Ihh能诱导C3H10T1/2细胞形态学发生改变,增加碱性磷酸酶活性,提示Ihh具有诱导C3H10T1/2细胞向骨细胞分化的潜能。