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Influence of Gossypol on Ultrastructure and mrna Expression of bax and Bcl-2 in Mice Testis

Journal of Northeast Agricultural University(English Edition) 2017年第3期24卷 75-83页

作者： Zhao Shu-chen Yuan Yan-bo Hou Zhen-zhong Liu Ke-xiang College of Veterinary Medicine Northeast Agricultural University Harbin 150030 China

The objective was to evaluate the toxicity effect of gossypol on ultrastructure of mouse testis and the expression of bax mrna and Bcl-2 mrna of sperm cells in mice. Forty-eight male mice were randomly divided into four groups： control group, L-group （30 mg-kgt. d）, M-group （60 mg·kg-1 ·d） and H-group （120 mg·kg-1· d） and were orally administrated with gossypol diluted by sodium carboxymethyl cellulose （SCC） or SCC （control group） for 20 days. On the 21st day, all the mice were killed and ultrastructure changes of testis were observed by TEM. mrna expression of bax and Bcl-2 in testis was measured by semiquantitative RT-PCR. The results showed that the testicular ultrastructure in three treated groups was gradually damaged, according to the dosage of gossypol and cellular structure disordered and organdie degenerated, manifesting vacuolation of mitochondria, expansion of endoplasmie reticulum, mrna expression of Bcl-2 in testis significantly increased （p〈0.05） in L-group and then significantly decreased （p〈0.05, p〈0.01） in M-group and H-group compared with that in the control group; mrna expression of Bcl-2 in M-group and H-group significantly decreased （p〈0.05, p〈0.01） than that in L-group and Bcl-2 mrna expression in H-group showed a significant decrease （p〈0.05） compared with that in M-group. On the other hand, mrna expression of bax significant increased （p〈0.05,p〈0.01） in M-group and H-group than that in the control group. The ratio of Bcl-2/bax significantly reduced 07〈0.05, p〈0.01） in the treated group than that in the control group and was found to be an obvious dose-dependent. It demonstrated that the gnssypol could induce the changes on ultrastructure of mice testis, down-regulate mrna expression of Bcl-2 and up-regnlate mrna expression of bax, which indicated that sperm ceils were induced apoptosis.

关键词： gossypol Bcl-2 mrna bax mrna ultrastructure testis mice

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冬眠不同时期达乌尔黄鼠腓肠肌单根肌纤维钙离子浓度及bax和Bcl-2 mrna表达水平的变化

冬眠不同时期达乌尔黄鼠腓肠肌单根肌纤维钙离子浓度及Bax和Bcl-2...

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作者：杜蓓西北大学

学位级别：硕士

研究背景：有关废用性肌萎缩的研究机制表明,蛋白质降解增加和合成的减少被认为是肌萎缩的发生机制,近年来蛋白质水解途径已被引起广泛的关注。课题组实验发现,废用条件下比目鱼肌会出现胞浆钙超载,进而启动泛素途径将蛋白质降解。因... 详细信息

研究背景：有关废用性肌萎缩的研究机制表明,蛋白质降解增加和合成的减少被认为是肌萎缩的发生机制,近年来蛋白质水解途径已被引起广泛的关注。课题组实验发现,废用条件下比目鱼肌会出现胞浆钙超载,进而启动泛素途径将蛋白质降解。因此我们认为细胞胞浆钙超载是引起蛋白质降解的因素之一。另一方面,有人认为,骨骼肌胞浆钙超载与细胞凋亡之间有着密切的联系。因此本实验选用冬眠黄鼠腓肠肌肌纤维钙离子浓度和细胞凋亡相关基因为指标,从骨骼肌胞浆钙水平和细胞凋亡水平探讨冬眠黄鼠抗肌萎缩的重要原因。研究目的： 1.通过对冬眠过程中达乌尔黄鼠(Spermophilus dauricus)腓肠肌肌纤维内Ca2+浓度的检测,研究废用对冬眠动物胞浆钙水平的影响,进而探讨冬眠动物骨骼肌抗废用性肌萎缩的可能机制;2.通过测定冬眠不同时期达乌尔黄鼠腓肠肌琥珀酸脱氢酶(Succinodehydrogenase,SDH)活性的变化,从氧化能力的角度研究冬眠动物骨骼肌抗废用性肌萎缩的可能机制;3.通过测定冬眠不同时期达乌尔黄鼠腓肠肌促凋亡基因bax mrna和凋亡抑制基因Bcl-2mrna的相对表达量和其比率的变化,从细胞凋亡水平来探冬眠动物骨骼肌抗废用性肌萎缩的可能机制;4.通过测定后肢去负荷14d大鼠腓肠肌肌纤维胞浆Ca2+浓度、琥珀酸脱氢酶(Succinodehydrogenase, SDH)活性、促凋亡基因bax mrna和凋亡抑制基因Bcl-2mrna的相对表达量以及其比率的变化,探讨废用性肌萎缩的可能机制及川芎嗪对废用性肌萎缩的作用机制。研究方法： 1.腓肠肌肌纤维钙离子浓度通过激光扫描共聚焦技术测定;2.腓肠肌琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性使用分光光度计测定;3.通过使用实时荧光定量PCR技术测定大鼠腓肠肌bax基因和Bcl-2基因mrna的相对表达水平。研究结果： 1.与冬眠前组(Pre-H)相比,冬眠中组(H)和激醒组(IB-A)腓肠肌肌纤维Ca2+浓度分别升高了49.0%(Pbax mrna相对表达量分别升高了47.6%和56.0%(Pmrna相对表达量分别升高了80.5%和83.2%(Pbax/Bcl-2比率降低了22.2%(Pbax mrna和抗凋亡基因Bcl-2mrna的相对表达量及bax/Bcl-2比率分别升高了140.1%、70.9%和37.5%(Pbax mrna和抗凋亡基因Bcl-2mrna的相对表达量及bax/Bcl-2的比率比正常组分别升高了106%(Pmrna和抗凋亡基因Bcl-2mrna均升高,但抗凋亡基因的升高远大于促凋亡基因,冬眠期间抗凋亡基因Bcl-2mrna表达的升高可能是其对抗废用性肌萎缩的重要机制。 4.大鼠后肢去负荷14d后,腓肠肌肌纤维出现胞浆钙超载,氧化能力降低,出现细胞凋亡现象,川芎嗪可以抑制后肢去负荷所产生的胞浆钙超载现象。

关键词：废用性肌萎缩腓肠肌冬眠钙离子琥珀酸脱氢酶 bax mrna Bcl-2mrna

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Dynamic Expressions of Liver Tissue Apoptosis-related Genes of Vibrio Vulnificus Sepsis Rats and the Effects of Antibacterial Agents

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2009年第2期29卷 193-197页

作者：卢中秋李萌芳梁欢邱俏檬杨光田周铁丽洪广亮 Department of Emergency Tongji Hospital Tongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology Department of Emergency the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College

Dynamic changes in mrna expressions of liver tissue apoptosis-promoting genes Fas and bax and apoptosis-inhibiting gene Bcl-2 of vibrio vulnificus sepsis rats were detected and the effects of antibacterial agents were examined. The rat model with Vibrio vulnificus sepsis （VV group） was established and some of the Vibrio vulnificus sepsis rats were treated with antibacterial agents （AA group）. The mrna expressions of Fas, bax and Bcl-2 were measured by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR）. As compared with normal control group （NC group）, the ex- pressions of Fas and bax mrna in liver tissue at all different time points in VV group were increased significantly （P〈0.05）, and the highest levels of Fas and bax mrna expressions were 6 and 12 h after the infection, respectively. At the same time, the expression of Bcl-2 mrna in liver tissue at all different time points in VV group were decreased significantly （P〈0.05）, and the lowest level of Bcl-2 mrna expression appeared 2 h after the infection. The mrna expressions of Bcl-2 in liver tissue 9 and 12 h after the infection in AA group were increased significantly （P〈0.05） compared with NC group, while the expressions of Fas and bax mrna were not significantly different from those of NC group. Compared with VV group, the expression of Fas mrna in AA group was decreased （P〈0.05） and bax rnRNA was decreased significantly 12 and 16 h after the infection （P〈0.05）, while the expressions of Bcl-2 mrna were increased significantly 9, 12 and 16 h after the infection （P〈0.05）. It is concluded that the mrna expressions of liver tissue apoptosis-promoting genes Fas and bax were increased remarkably in vibrio vulnificus sepsis rats, whereas the expression of apoptosis-inhibiting gene Bcl-2 mrna was decreased obviously in sepsis rats in early stage. The treatment with cefoperazone sodium and levofloxacin lactate could inhibit the expression of Fas mrna and bax mrna and enhance the expression ofBcl-2 rnRNA at the sam

关键词： vibrio vulnificus sepsis Fas mrna bax mrna Bcl-2 rnRNA antibacterial agents

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益智聪明汤对记忆力减退模型大鼠学习记忆的干预作用研究

益智聪明汤对记忆力减退模型大鼠学习记忆的干预作用研究

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作者：李蕾广东药科大学

学位级别：硕士

目的:观察以开窍化痰,醒神益智立法组方的中药复方益智聪明汤对东莨菪碱模型大鼠学习记忆能力的影响,并对其相关作用机制作初步探讨。方法:选择SD大鼠80只,雌雄各半,体重控制在180-220 g,通过行为学试验(穿梭箱试验和Morris水迷宫)筛选... 详细信息

目的:观察以开窍化痰,醒神益智立法组方的中药复方益智聪明汤对东莨菪碱模型大鼠学习记忆能力的影响,并对其相关作用机制作初步探讨。方法:选择SD大鼠80只,雌雄各半,体重控制在180-220 g,通过行为学试验(穿梭箱试验和Morris水迷宫)筛选智力相当,淘汰反应过于迟钝的大鼠,剩余70只,随机分为空白对照组,模型对照组,西药对照组,益智聪明汤低剂量组,益智聪明汤中剂量组、益智聪明汤高剂量组及中药对照组7组。空白对照组和模型对照组大鼠给予生理盐水灌胃(1ml/100g),西药对照组用脑复康溶液(0.4 g/kg)进行灌胃,益智聪明汤低剂量组(10 g/kg),益智聪明汤中剂量组(20 g/kg)、模型益智聪明汤高剂量组(40 g/kg)、中药对照组(归脾丸)(0.25g/kg),各组根据体重计算灌胃量,连续28天。在第23天开始增加造模与行为学试验,连续6天。行为学实验前半小时,采用东莨菪碱注射,造成记忆障碍模型。模型对照组,西药对照组,益智聪明汤低剂量组,益智聪明汤中剂量组、益智聪明汤高剂量组及中药对照组腹腔注射东莨菪碱注射液(2.0 mg/kg),空白对照组注射相应剂量生理盐水,腹腔注射造模药半小时后进行行为学实验测试(穿梭箱、Morris水迷宫)测定大鼠学习记忆能力,第28天实验完成后取材(血、海马组织)。用酶联免疫吸附法检测血清超氧化物歧化酶SOD含量、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性、丙二醛MDA含量;q RT-PCR法检测海马组织的bax基因、bcl-2基因表达;免疫组化法检测海马组织中的胶质纤维酸性蛋白GFAP、脑源性神经营养因子BDNF表达。结果:1.据Morris水迷宫和穿梭箱实验数据结果发现,与空白对照组比较,模型对照组平均潜伏期比正常组明显延长(Pbax m RNA的表达显著升高(Pbax m RNA的表达显著降低(Pbax m RNA的表达,提高Bcl-2 m RNA的表达,减少大鼠海马细胞凋亡有关。

关键词：益智聪明汤东莨菪碱行为学 GFAP SOD bax mrna Bcl-2 mrna

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不同时间窗介入运动训练对实验性脑出血大鼠认知功能及海马可塑性的影响

不同时间窗介入运动训练对实验性脑出血大鼠认知功能及海马可塑性...

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作者：吕顺丽西南医科大学

学位级别：硕士

目的:初步探讨不同时间窗介入运动训练对实验性脑出血大鼠认知功能以及海马可塑性的影响,为临床治疗提供依据和指导。方法:1、造模及干预方法:向大鼠右侧尾状核内注射Ⅰ型胶原酶及肝素钠建立实验性脑出血大鼠模型,对照组大鼠相同部位注... 详细信息

目的:初步探讨不同时间窗介入运动训练对实验性脑出血大鼠认知功能以及海马可塑性的影响,为临床治疗提供依据和指导。方法:1、造模及干预方法:向大鼠右侧尾状核内注射Ⅰ型胶原酶及肝素钠建立实验性脑出血大鼠模型,对照组大鼠相同部位注入等体积生理盐水代替胶原酶及肝素钠,造模后进行改良神经功能缺损评分(Modified Neurological Severity Score,m NSS),并于术后12h进行正电子发射计算机断层显像/计算机体层扫描(Positron Emission Tomography/Computed Tomography PET/CT)检查,评分≥8.5分且PET/CT检查确有血肿存在即为造模成功,并根据开始介入运动训练的时间不同将运动训练组分别分为24小时(24h)组、3天(3d)组、7天(7d)组,分别于造模成功后24h、3d、7d开始运动训练,训练总时间为3周,对照组及模型组不予运动训练。2、指标观察:(1)训练结束后分别对各组大鼠进行Y-迷宫试验以评估大鼠分辨学习能力及一次性被动回避反应试验以评估记忆保持能力;(2)利用HE染色法观察脑出血模型大鼠脑出血区组织病理学改变;(3)用免疫组织化学法检测脑出血模型大鼠右侧大脑组织海马CA3区内源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)和白细胞介素-10(Interleukin 10,IL-10)的蛋白表达量,以平均光敏度值(Optical density,OD值)表示;(4)采用RT-PCR法检测脑出血模型大鼠右侧大脑组织海马CA3区bax和bcl-2的基因表达,以灰度值表示。3、统计学分析:本实验的数据处理使用的是IBM SPSS Statitistics 17.0软件进行分析,实验数据结果用的均数±标准差(?x±s)表示,各组大鼠组间检测指标IL-10、BDNF平均光密度值的比较以及bax m RNA、bcl-2 m RNA、bcl-2 m RNA/bax m RNA灰度比值的比较均采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行两两比较,以p0.05),但均显著高于3d组的分辨学习能力评分(p0.05),但均显著高于7d组的记忆保持能力评分(p0.05),但均明显高于7d组(p<0.05);(2)对照组大鼠右侧大脑组织海马CA3区IL-10蛋白表达量极少,模型组和各运动训练组IL-10蛋白表达量均较对照组显著增高(p<0.05);3个运动训练组IL-10蛋白表达量均较模

关键词：脑出血认知功能运动训练 BDNF IL-10 bcl-2 mrna bax mrna

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酸性丝氨酸蛋白酶对人慢性髓性粒细胞株K562细胞作用的初步研究

酸性丝氨酸蛋白酶对人慢性髓性粒细胞株K562细胞作用的初步研究

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作者：薄其青吉林大学

学位级别：硕士

酸性丝氨酸蛋白酶对人慢性髓性粒细胞株K562细胞作用的初步研究目的：酸性丝氨酸蛋白酶（Acidic Serine Protease from Neanthes japonica,ASPNJ）是本实验室从我国北方沿海海洋生物沙蚕体内提纯得到的一种蛋白酶，因其对纤维蛋白及纤... 详细信息

酸性丝氨酸蛋白酶对人慢性髓性粒细胞株K562细胞作用的初步研究目的：酸性丝氨酸蛋白酶（Acidic Serine Protease from Neanthes japonica,ASPNJ）是本实验室从我国北方沿海海洋生物沙蚕体内提纯得到的一种蛋白酶，因其对纤维蛋白及纤维蛋白原有很强的溶解作用，故曾命名为沙蚕纤溶酶，其本质是酸性丝氨酸蛋白酶。具有纤溶活性的一类蛋白酶如蚓激酶对多种肿瘤细胞有显著的杀伤作用，受到基础和临床研究的重视。然而，ASPNJ对肿瘤细胞的作用及作用机制至今没有被研究。本论文报告ASPNJ对慢性髓性粒细胞白血病K562的体外抗肿瘤作用，并做了初步的机制研究，探讨临床应用的可能性，可能为抗白血病研究与治疗提供一个新的思路。方法： 1、以体外培养的慢性髓性粒细胞白血病K562细胞株为本实验模型;2、MTT比色法检测ASPNJ对K562细胞的增殖抑制作用;3、倒置显微镜、瑞氏-吉姆萨染色法及激光共聚焦显微镜联合流式细胞术观察ASPNJ作用K562细胞后其形态学的改变及凋亡情况;4、PCR检测bax mrna的表达，以β-actin为内参，观察ASPNJ作用于K562细胞后，与凋亡有关的部分基因表达状况;5、观察ASPNJ与多柔比星联合作用于K562细胞的增效作用;6、观察ASPNJ对人正常红细胞溶血、凝聚作用及MTT比色法检测对粒细胞的作用;结果： 1、ASPNJ对K562细胞有明显的增殖抑制作用，呈现出时效-量效关系;2、倒置显微镜、瑞氏-吉姆萨染色法观察形态学变化，可见ASPNJ作用K562细胞后，部分细胞出现明显的凋亡改变，包括核固缩、核碎裂等，部分细胞呈现显著的坏死现象，或同时有凋亡改变也有坏死改变;3、激光共聚焦显微镜下，可见典型的细胞膜绿色，胞核红色的形态变化;激光共聚焦及流式细胞术可明显检测到ASPNJ对K562细胞产生的凋亡作用与坏死作用;4、PCR结果显示：随着ASPNJ作用剂量及时间的增加，bax基因表达逐渐增高;5、ASPNJ与盐酸多柔比星联合用药，有显著的肿瘤抑制增效作用;6、ASPNJ对人体正常红细胞无溶血作用，也无凝聚作用;7、ASPNJ对人正常粒细胞没有显著的增殖抑制作用。结论： 1、ASPNJ能抑制K562细胞增殖，其作用呈现一定的时效和量效关系，ASPNJ促使K562细胞凋亡和坏死;2、ASPNJ可能通过上调bax mrna的表达来诱导K562细胞凋亡，可能通过破坏K562细胞膜完整性引起细胞坏死;3、与盐酸多柔比星共同作用，有显著的增效作用;4、ASPNJ对正常人白细胞作用远远低于K562细胞，在6小时内不引起溶血和凝聚

关键词： ASPNJ K562 慢性髓性粒细胞白血病凋亡坏死 bax mrna

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五种牙体修复材料对L929细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因的研究

五种牙体修复材料对L929细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因的研究

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作者：王学南京医科大学

学位级别：硕士

牙科陶瓷具有生物相容性好、美观、色泽稳定、菌斑积聚少、低热传导率、耐磨损、修复体颈缘美观等特性,是其它修复材料如金属和塑料材料无法替代的。由过去单纯制作嵌体、贴面发展到全冠、固定桥,乃至种植义齿的上部结构。本课题组采用... 详细信息

牙科陶瓷具有生物相容性好、美观、色泽稳定、菌斑积聚少、低热传导率、耐磨损、修复体颈缘美观等特性,是其它修复材料如金属和塑料材料无法替代的。由过去单纯制作嵌体、贴面发展到全冠、固定桥,乃至种植义齿的上部结构。本课题组采用以硅藻土为原料,通过添加纳米增韧剂(纳米氧化锆,氧化铝,二氧化钛晶须等)提高其强度,制备了符合临床要求的牙科可切削陶瓷材料。钴铬合金烤瓷、镍铬合金烤瓷及树脂也是目前临床常见的修复材料。但是有文献报道金属合金作为口腔修复材料应用于人体内在人体生理环境中使用对生命有机体会产生一定的作用和影响。生物相容性评价是研究医用金属材料的重要内容之一。本研究从细胞生物学及分子生物学角度对五种口腔修复材料的生物相容性进行了评价,主要目的是通过细胞培养,MTT法,流式细胞术来检测五种牙科修复材料对于L929细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡方面的影响进而评价其生物相容性。通过RT-PCR检测Bcl -2和bax mrna表达来探讨五种牙体修复材料引起细胞凋亡的机制,同时为提出生物相容性评价的新指标提供理论依据。实验一五种牙体修复材料对L929细胞增值率的影响目的:检测一种新型硅藻土可切削陶瓷的细胞毒性并与其他四种牙体修复材料相比较,初步评价其生物相容性。方法:小鼠成纤维细胞L929在新型硅藻土可切削陶瓷浸提液中培养1d,3d,5d,并与其他四种牙科常用修复材料作比较,MTT法观察细胞形态变化,测量吸光度(OD值),计算细胞相对增殖率(RGR),判断细胞毒性的级别。结果:阴性组,新型硅藻土可切削陶瓷组,铸瓷组,钴铬合金烤瓷之间无统计学差异(P>0.05)。阴性组与树脂,镍铬合金烤瓷之间存在统计学差异(P0.05)。结论:五种牙体修复材料对细胞周期均无特殊影响。实验三五种牙体修复材料对L929细胞凋亡的影响目的:通过研究新型硅藻土可切削陶瓷及临床常用四种口腔修复材料对L929细凋亡作用,初步评价其生物相容性。方法:分别提取新型硅藻土可切削陶瓷及四种临床常见口腔修复材料的浸提液作用于L-929细胞,流式细胞仪检测诱导细胞凋亡作用;Annexin V-FITC/PI双染凋亡试剂盒对细胞死亡类型进行定量检测。结果:新型硅藻土可切削陶瓷凋亡率与铸瓷较低,并与阴性组接近(P>0.05);其他3种材料凋亡率远高于阴性组。新型陶瓷主要引起的细胞病变为凋亡,并呈时间依赖性。树脂凋亡率最高,细胞坏死水平也显著提高,与新型陶瓷有统计学差异(Pbax基因的表达。结果:RT-PCR结果显示,新型硅藻土可切削陶瓷组、铸瓷组Bcl-2及bax mrna表达水平都与阴性组接近,差异无统计学意义(P>0.05)。树脂bax mrna表达量最高,Bcl-2 mrna表达量最低,与新型陶瓷组间差异有统计学意义(Pbax mrna表达水平与阴性组有统计学差异(P<0.05)。结论:五种牙体修复材料凋亡相关基因水平有差异,基因表达检测可能成为评价材料生物相容性的新方法之一。

关键词：新型硅藻土可切削陶瓷 L929细胞 MTT 细胞毒性新型硅藻土可切削陶瓷 L929细胞细胞周期新型硅藻土可切削陶瓷 L929细胞细胞凋亡新型硅藻土可切削陶瓷 L929细胞 Bcl-2 mrna bax mrna

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创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因动态表达及抗菌药物的干预

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因动态表达及抗菌药物的干预

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2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议

作者：卢中秋李萌芳梁欢邱俏檬杨光田周铁丽洪广亮温州医学院附属第一医院急诊科

目的探讨大鼠创伤弧菌(Vibrio vulnificus,VV)脓毒症大鼠肝组织凋亡促进相关基因Fasmrna、bax mrna和调亡抑制相关基因Bcl-2 mrna的动态表达及头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星的干预效应。方法制作大鼠W脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干... 详细信息

目的探讨大鼠创伤弧菌(Vibrio vulnificus,VV)脓毒症大鼠肝组织凋亡促进相关基因Fasmrna、bax mrna和调亡抑制相关基因Bcl-2 mrna的动态表达及头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星的干预效应。方法制作大鼠W脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝组织Fasmrna、bax mrna、Bcl-2 mrna表达量的动态变化。结果与NC组相比,VV组各时间点肝组织Fas mrna

关键词：创伤弧菌脓毒症 Fas mrna bax mrna Bcl-2 mrna 抗菌药物

来源： cnki会议评论

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