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HPLC法测定Streptomyces sp.发酵液中bafilomycin A1的含量

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药物分析杂志 2019年第4期39卷 730-734页

作者：周剑陈秀明江红福建省微生物研究所福建省新药(微生物)筛选重点实验室福州350007

目的:建立放线菌Streptomyces sp.发酵液中bafilomycin A1的鉴别及含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS)分析技术进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC法)进行含量测定,使用Ultimate LP-C_(18... 详细信息

目的:建立放线菌Streptomyces sp.发酵液中bafilomycin A1的鉴别及含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS)分析技术进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC法)进行含量测定,使用Ultimate LP-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(85∶15),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长247 nm,柱温40℃。结果:bafilomycin A1质量浓度在18.75～600μg·mL^(-1)范围内线性良好,相关系数为1.0(n=6);平均回收率为101.4%,RSD为1.3%(bafilomycin A1含量分别为183.69、196.29、198.63μg·mL^(-1),均在有效测定范围内。结论:本方法可以用于bafilomycin A1发酵、提炼及纯化过程的含量测定。

关键词： bafilomycin A1 多烯大环内脂类抗生素链霉菌发酵液高效液相色谱高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱

Streptomyces bacillaris ATCC 15855~T中bafilomycin A1合成基因簇的挖掘

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工业微生物 2019年第6期49卷 18-25页

作者：赵守静高坤鹏刘振毛相朝中国海洋大学食品科学与工程学院青岛266003 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室青岛266237

bafilomycin A1是大环内酯类抗生素,具有广泛的抗癌活性。通过HPLC及HPLC-MS分析Streptomyces bacillaris ATCC 15855^T的发酵产物,结果显示*** ATCC 15855 T发酵能够产生bafilomycin A1。*** ATCC 15855^T分离自中亚土壤。通过全基因组测序,获得了*** ATCC 15855^T的完整基因组序列。该基因组由6957417 bp的线性染色体组成,GC含量为72.29%。该染色体预测了7284个开放阅读框架(ORF),18个rRNA操纵子,64个tRNA基因。通过antiSMASH v 4.0.3分析,共预测了39个生物合成基因簇。其中,具有抑制液泡型H(+)ATP酶的bafilomycin A1基因簇与已报道的基因簇相似度为100%。在bafilomycin A1合成基因簇中有19个ORFs。

关键词： Streptomyces bacillaris ATCC 15855^T 全基因组序列 bafilomycin A1 次级代谢产物基因簇

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巴弗洛霉素A1抑制前列腺癌转移的初步探讨

全科医学临床与教育 2014年第4期12卷 371-373,376,F0002页

作者：张晓邓金平卢毅莫启旺秦安嵊州市人民医院外四科浙江嵊州312400 上海交通大学医学院附属第九人民医院科室骨科

目的通过检测前列腺癌细胞中质子泵V-ATPase酶的相关基因和相关蛋白的表达,探讨V-ATPase酶抑制剂巴弗洛霉素A1在治疗前列腺癌转移中的潜在价值。方法检测前列腺癌细胞系PC3细胞中质子泵V-ATPase酶相关基因和相关蛋白表达水平;在此基础上... 详细信息

目的通过检测前列腺癌细胞中质子泵V-ATPase酶的相关基因和相关蛋白的表达,探讨V-ATPase酶抑制剂巴弗洛霉素A1在治疗前列腺癌转移中的潜在价值。方法检测前列腺癌细胞系PC3细胞中质子泵V-ATPase酶相关基因和相关蛋白表达水平;在此基础上,使用巴弗洛霉素A1刺激PC3细胞,观察前列腺癌细胞增殖、迁移和细胞内酸化等生物学行为变化。结果质子泵V-ATPase酶V-ATPaseV1A1、V-ATPase V1E和V-ATPase V0A1亚单位在PC3细胞内表达高于人骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞组,差异均有统计学意义(t分别=-13.78、-19.33、-13.45,P均<0.05)。利用V-ATPase酶抑制剂巴弗洛霉素A1(10 nmol)处理96 h,仅有12.00±3.00%的前列腺癌细胞增殖,差异有统计学意义(t=37.17,P<0.05)。与此同时,利用2.5 nmol巴弗洛霉素A1处理时,发生迁移的前列腺癌细胞数量从对照组的(233.33±20.55)个/孔,下降为(105.00±7.02)个/孔迁移,差异有统计学意义(t=8.07,P<0.05)。进一步分子生物学机制分析表明,2.5 nmol巴弗洛霉素A1可完全抑制V-ATPase介导的酸化。结论应用巴弗洛霉素A1可使前列腺癌细胞酸化受影响,从而抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移功能。

关键词：质子泵V-ATPase酶巴弗洛霉素A1 前列腺癌 bafilomycin A1

链霉菌BAF-0711产生的抗肿瘤活性成分的分离纯化和结构鉴定

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天然产物研究与开发 2016年第5期28卷 696-698,649页

作者：张欣杨煌建周剑陈宏方东升黄楷郑卫福建医科大学药学院福州350004 福建省微生物研究所福州350007 福建省中医药研究院药物研究所福州350003

探讨分离、纯化和鉴定链霉菌BAF-0711发酵液中的抗肿瘤活性成分的方法。采用大孔吸附柱层析、硅胶柱层析等方法对该菌株的次级代谢产物进行分离纯化;根据理化性质和波谱学方法进行化学结构的鉴定;利用MTT法来检测化合物的抗肿瘤活性。... 详细信息

探讨分离、纯化和鉴定链霉菌BAF-0711发酵液中的抗肿瘤活性成分的方法。采用大孔吸附柱层析、硅胶柱层析等方法对该菌株的次级代谢产物进行分离纯化;根据理化性质和波谱学方法进行化学结构的鉴定;利用MTT法来检测化合物的抗肿瘤活性。从该菌株发酵液中分离到化合物BAF-0711-A。经波谱方法鉴定与文献中报道的bafilomycin A1同质。以拉帕替尼为对照,BAF-0711-A对乳腺癌细胞MB-45-3d有较强的增殖抑制活性,其IC50值为0.217μmol/L。

关键词： bafilomycin A1 大环内脂分离纯化结构鉴定抗肿瘤活性

β-淀粉样蛋白Aβ_(25-35)诱导HT22细胞自噬及其对V-ATPase表达的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2013年第1期34卷 1-5页

作者：张蓓谷贝贝范胜诺赵嘉赵仲艳刘军中山大学孙逸仙纪念医院神经科广东广州510120

【目的】探讨β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞产生自噬及与V-ATPase变化的关系。【方法】将HT22细胞分为对照组、无血清培养组、Aβ处理组和Aβ+bafilomycin A1组,不同浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24 h,用CCK8测定细胞活力变化,免... 详细信息

【目的】探讨β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞产生自噬及与V-ATPase变化的关系。【方法】将HT22细胞分为对照组、无血清培养组、Aβ处理组和Aβ+bafilomycin A1组,不同浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24 h,用CCK8测定细胞活力变化,免疫细胞荧光检测自噬斑点变化,及Western blot检测LC3、V-ATPase蛋白变化。【结果】Aβ可以诱导HT22细胞出现明显的自噬现象,且这种自噬同Aβ的浓度以及作用时间具有一定的相关性。V-ATPase的表达伴随自噬的增多也逐渐增多。bafilomycin A1可以进一步诱导V-ATPase增加,增加细胞内自噬体的聚积。【结论】Aβ25-35可诱导HT22细胞产生自噬,且与V-ATPase表达有关。

关键词： Aβ25-35 HT22细胞自噬 V—ATPase bafilomycin A1

抑制自噬增强MCF-7乳腺癌细胞对依托泊苷的敏感性

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基础医学与临床 2016年第8期36卷 1087-1091页

作者：刘晓健黄雷陈睿琦张秀冰胡峰曾庆虹辽宁医学院药理学教研室辽宁锦州121001 锦州市食品药品检验所辽宁锦州121001 辽宁医学院基础医学院辽宁锦州121001

目的探讨自噬抑制剂(Baf)在乳腺癌MCF-7细胞对依托泊苷(VP-16)的药物敏感性的影响。方法实验分为对照组(NC)、Baf组、VP-16和VP-16+Baf组。用MTT法检测细胞生存活力、GFP-LC3质粒转染后荧光显微镜检测绿色荧光的分布、Western blot检测... 详细信息

目的探讨自噬抑制剂(Baf)在乳腺癌MCF-7细胞对依托泊苷(VP-16)的药物敏感性的影响。方法实验分为对照组(NC)、Baf组、VP-16和VP-16+Baf组。用MTT法检测细胞生存活力、GFP-LC3质粒转染后荧光显微镜检测绿色荧光的分布、Western blot检测蛋白表达和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 15μmol/L的VP-16使细胞活力降低,而在收集细胞前12 h时加入10 nmol/L的Baf进一步降低了细胞活力(P<0.01);VP-16明显增加MCF-7细胞的LC3Ⅱ的表达和GFP-LC3绿色荧光斑点的聚集,而减少了P62的蛋白表达;与VP-16组比较,VP-16+Baf组细胞P62的蛋白表达增多,凋亡蛋白cleaved-PARP的表达和细胞凋亡比例也明显增多(P<0.01)。结论 VP-16抑制乳腺癌细胞增殖的过程中诱导了保护性自噬,抑制自噬促进了凋亡性死亡,可以增加癌细胞对VP-16的敏感性。

关键词：依托泊苷自噬 bafilomycin A1 凋亡乳腺癌细胞

巴弗洛霉素A1对脑缺血再灌注损伤作用的初步研究

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赤峰学院学报（自然科学版） 2017年第5期33卷 42-43页

作者：王志坚刘胜兵沈忠飞嘉兴学院医学院浙江嘉兴314000

目的:探讨预防性给予SD大鼠巴弗洛霉素A(bafilomycin A1,Baf A1)对局部脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion-reperfusion,MCAO/R),是否神经保护作用及初步机制研究.方法:健康雄性SD大鼠80只,随机分为:假手术组(sham)、对照组(Saline)、氟西汀组(Fluo)和Baf A1组.Fluo组和Baf A1组大鼠于术前分别给予氟西汀混悬液(2.0mg-1kg^(-1)d^(-1))灌胃和Baf A1(1.0mg-1kg^(-1)d^(-1)),连续14d;sham组和Saline组均于术前14天开始给予等体积生理盐水.再灌注24h后,进行神经神经功能相关检测,并用TTC染色法计算脑梗死面积,并提取新鲜脑组织总蛋白采用Western blot检测自噬相关蛋白Beclin 1的表达.结果:Baf A1可显著降低大鼠脑缺血再灌注后神经功能损伤症状,减少脑梗死面积,并降低自噬相关蛋白Beclin 1的表达.结论:Baf A1对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,可能是通过降低自噬性死亡实现的.

关键词： bafilomycin A1 脑缺血再灌注损伤(MCAO/R) 自噬 Beclin 1

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自噬在索拉菲尼诱导肝癌细胞凋亡中的作用

现代肿瘤医学 2016年第10期24卷 1505-1508页

作者：赵相轩任莹温锋孙巍梁宏元赵罡戴朝霞卢再鸣中国医科大学附属盛京医院辽宁沈阳110004 大连医科大学肿瘤干细胞研究院辽宁大连116044

目的:研究索拉菲尼(Sorafenib)诱导的自噬在肝癌细胞凋亡中的作用。方法:体外培养肝癌细胞Huh7和LH86细胞株。分为对照组、Sorafenib处理组、bafilomycin处理组、Sorafenib+bafilomycin处理组。将构建的质粒表达载体p EGFP-N1-LC3分别转... 详细信息

目的:研究索拉菲尼(Sorafenib)诱导的自噬在肝癌细胞凋亡中的作用。方法:体外培养肝癌细胞Huh7和LH86细胞株。分为对照组、Sorafenib处理组、bafilomycin处理组、Sorafenib+bafilomycin处理组。将构建的质粒表达载体p EGFP-N1-LC3分别转染Huh7和LH86细胞株,用索拉菲尼或者索拉菲尼加bafilomycin同时处理细胞,通过荧光显微镜观察对照组和处理组细胞内细胞自噬小体形成情况。免疫印迹(Western blot)方法检测细胞自噬作用标志蛋白LC3以及细胞凋亡蛋白Caspase 3切割条带在各组中的表达,Heochst 33342染料对各组细胞核进行染色,以评估细胞自噬作用对索拉菲尼诱导细胞凋亡的影响。结果:在荧光显微镜下,可以观察到Sorafenib能够显著诱导两种肝癌细胞株发生自噬作用。抑制剂Balfilomycin能够显著抑制Sorafenib诱导的自噬作用。Balfilomycin抑制自噬能够显著增强Sorafenib诱导的细胞凋亡。结论:Sorafenib能够诱导肝癌细胞产生自噬作用。这种自噬作用在Sorafenib诱导的肝癌细胞凋亡中起到负调控作用。

关键词：自噬索拉菲尼肝癌 bafilomycin 细胞凋亡