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硼缺乏对汞致烟草by-2细胞程序性死亡的影响及机制探讨

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硼缺乏对汞致烟草BY-2细胞程序性死亡的影响及机制探讨

作者：訾琳大连医科大学

学位级别：硕士

目的:由于人类大量工业活动及某些自然灾害,重金属污染已成为一项严重的世界性环境问题。汞(Hg)作为重金属元素之一,由于其本身的毒性、易流动性、易蓄积性及在生物圈的广泛分布,可对多种生物造成很多不利影响。微量元素硼(B)是植物的... 详细信息

目的:由于人类大量工业活动及某些自然灾害,重金属污染已成为一项严重的世界性环境问题。汞(Hg)作为重金属元素之一,由于其本身的毒性、易流动性、易蓄积性及在生物圈的广泛分布,可对多种生物造成很多不利影响。微量元素硼(B)是植物的必需营养元素之一,硼缺乏已在多个国家有过报道,是农作物减产的重要原因之一。细胞程序性死亡(Programmed cell death,PCD)是植物体内一些细胞通过自身遗传调控的一种高度有序性死亡方式。本研究的目的是探索Hg是否致烟草by-2悬浮细胞发生程序性死亡,B缺乏对Hg诱导的细胞死亡的影响,并进一步探索调控该过程的可能机制。方法:本次实验选择烟草by-2悬浮细胞系为研究系统。通过台盼兰染色法测定无硼条件下Hg诱导的烟草悬浮细胞存活率并在光学显微镜下观察细胞形态;采用Hochest33258染色法在荧光显微镜下观察细胞形态学变化;采用原位末端标记法(Td T—mediated dUTP N ick-End Labeling,TUNEL)检测DNA片段化;通过Real-time qRT-PCR技术检测细胞程序性死亡相关基因Hsr203j,cAPX及防卫基因PR-1a和PAL的表达。为进一步探讨无硼及汞致细胞程序性死亡的机制,采用生物化学方法检测无硼条件下Hg诱导的烟草悬浮细胞胞外过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。实验结果采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。结果:烟草by-2悬浮细胞经30μM HgCl2处理24h后细胞存活率明显降低,无硼处理组在同样Hg应激条件下比单独Hg处理组细胞存活率下降,并随无硼处理时间的延长而降低。正常细胞经Hochest33258染色后呈淡蓝色荧光,无染色质凝集现象。HgCl2处理的细胞发生细胞质皱缩,细胞核出现不规则染色,发生染色质凝集。无硼培养的细胞经HgCl2处理后褶皱程度加大,细胞核部分边缘化,细胞核凝缩,有些甚至呈碎裂状。正常培养组细胞TUNEL阳性核比例低于1%,而30μM HgCl2诱导处理24h后约有28%细胞核呈TUNEL阳性核。无硼处理后,同样HgCl2诱导条件的细胞TUNEL阳性核比率增加,当无硼处理时间达到72h后TUNEL阳性率达到50%。HgCl2诱导的细胞Hsr203j,PR-1a,PAL基因表达量增加,cAPX显著性降低。无硼培养的细胞在Hg诱导下Hsr203j表达量比Hg单独处理组上升,而PR-1a,PAL比汞单独处理组有所下降。30μM HgCl2诱导4h后细胞胞外过氧化氢含量上升,无硼培养细胞Hg处理后胞外过氧化氢含量比单独Hg组上升。HgCl2诱导24h后MDA含量增加,无硼培养细胞Hg处理后MDA含量比单独Hg组上升。但无硼与汞联合组与汞单独处理组相比,胞外过氧化氢与MDA含量无显著性差异。结论:HgCl2可诱导烟草by-2悬浮细胞发生程序性死亡,如细胞发生形态学变化,TUNEL阳性率升高,PCD相关基因Hsr203j表达量上调或c APX下调,防卫基因PR-1a和PAL表达上调。无硼培养的细胞HgCl2处理后比单独Hg处理组细胞发生程序性死亡的比率上升。同时,无硼培养与HgCl2联合作用可诱导细胞胞外过氧化氢、MDA含量上升,使细胞产生氧化损伤,表明细胞发生程序性死亡与氧化损伤途径有关。

关键词： Hg 毒性硼缺乏细胞程序性死亡烟草 by-2 细胞氧化损伤

by-2固体润滑剂在继电器、微动开关中的应用性研究试验

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机电元件 1986年第1期 50-60页

作者：陆振基

在广泛应用的电气、电子产品中电接触问题是一个涉及面广、影响大、情况复杂的课题。直接影响产品的使用性、寿命和可靠性,是科技人员十分关切的问题。航空电器专业的产品同样存在这一问题。而且显得更为重要。

关键词：固体润滑剂微动开关快动开关 by-2

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by-2型系列变换器调试中的几个问题

铁道车辆 1983年第6期 78-80页

作者：徐健济南铁路局科研所

by-2型系列荧光灯交换器由铁道部于1981年11月通过鉴定。根据铁道部(81)铁科技字1971号文件要求,于1982年7月1日装车运用。为进一步提高变换器质量,便于现场检修,将by-2型系列调试中应注意的几个问题介绍如下。

关键词：变换器 BZ 匝数比现场检修转换器 by-2 电感磁芯

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客车by-2型系列荧光灯变换器

铁道车辆 1983年第3期 13-20页

作者：毛中坚济南铁路局科研所

我国客车已普遍采用荧光灯照明。为了适应发展形势和车种车型日渐增加的需要,有必要研制出新一代荧光灯变换器的系列产品来代替原来采用的荧光灯交换器。铁道部科技局、车辆局于1980年3月,责成济南铁路局科研所负责,约请北京128

关键词：变换器铁道部车辆段转换器 by-2 荧光灯管客车客运车辆

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by-2型荧光灯逆变器定时电路原理介绍

铁道车辆 1989年第2期 70-71页

作者：刘世英乌鲁木齐铁路运输学校

by-2型荧光灯逆变器的重要特点是采用LC定时电路作反馈电路,避免了负载变化对反馈量造成的影响,使电流、工作频率变化范围小,提高了整机性能。本文主要介绍该电路的工作原理。

关键词：逆变器 by-2 定时电路反向电压反馈电路反馈量自感电动势基极电流工作原理电流变化

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用“by-2”代替仪表油以减少摩擦的试验

航空工艺技术 1984年第6期 37-38页

作者：王少华钱健素二一二厂技术科

一、问题的提出自一九七七年以来,我厂某位置指示器因电位器组件与电刷之间摩擦大而影响装配的问题越来越严重,每批少则几件、十几件,多则一半左右。如:一九八○年三月份装配的一批产品,200件就有115件不好,高达57％。为此,曾作了大量... 详细信息

一、问题的提出自一九七七年以来,我厂某位置指示器因电位器组件与电刷之间摩擦大而影响装配的问题越来越严重,每批少则几件、十几件,多则一半左右。如:一九八○年三月份装配的一批产品,200件就有115件不好,高达57％。为此,曾作了大量的工作,如:复测电刷的硬度、接触压力;检查电位器工作表面质量及操作工艺等均符合产品图纸或工艺资料的要求;

关键词：仪表油电刷碳刷集电装置 by-2 电位器电器工作表面位置指示器涂复

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by-2接点薄膜润滑剂简介

航空工艺技术 1977年第7期 46-46页

BY—2(北邮二号)接点薄膜润滑剂是北京邮电学院一九七五年研制成功的一种新型固体润滑材料。这种润滑材料的主要作用是减小开关、连接器等机电元件上金属接触点的磨擦力和金属磨损,同时还可以隔绝腐蚀性气体,防止金属腐蚀,从而达到延长... 详细信息

BY—2(北邮二号)接点薄膜润滑剂是北京邮电学院一九七五年研制成功的一种新型固体润滑材料。这种润滑材料的主要作用是减小开关、连接器等机电元件上金属接触点的磨擦力和金属磨损,同时还可以隔绝腐蚀性气体,防止金属腐蚀,从而达到延长机电元件使用寿命,提高其电接触可靠性的目的。通过试验表明本接点薄膜润滑剂对镀银层的防蚀润滑作用效果较好,为机电元件在工业中大量采用镀银

关键词：润滑剂浸涂邮电 by-2 固体润滑材料接点

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by-2型自动分装机技术鉴定消息报道

药学实践杂志 1984年第1期 12-12页

by-2型自动分装机由上海市淀山湖无线电厂根据上海市海洋渔业公司By-1型光电自动包药机的研究成果试制成功的,已于一九八三年十二月十九日通过技术鉴定。鉴定会议期间,上海市海洋渔业公司和上海淀山湖无线电厂汇报了by-2型药片自动分装... 详细信息

by-2型自动分装机由上海市淀山湖无线电厂根据上海市海洋渔业公司By-1型光电自动包药机的研究成果试制成功的,已于一九八三年十二月十九日通过技术鉴定。鉴定会议期间,上海市海洋渔业公司和上海淀山湖无线电厂汇报了by-2型药片自动分装机的研制情况,上海市第二人民医院、上海市第六人民医院、浦东中心医院等试用单位介绍了该机的使用情况,并

关键词：分装机技术鉴定淀山湖海洋渔业 by-2 无线电厂无线电工厂

A LIM Domain Protein from Tobacco Involved in Actin-Bundling and Histone Gene Transcription

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Molecular Plant 2013年第2期6卷 483-502页

作者： Danièle Moes Sabrina Gatti CEline Hoffmann Monika Dieterle Flora Moreau Katrin Neumann Marc Schumacher Marc Diederich Erwin Grill Wen-Hui Shen André Steinmetz Cldment Thomas Centre de Recherche Public-SantE 84 Val Fleuri L-1526 Luxembourg Luxembourg Laboratoire de Biologie Moleculaire et Cellulaire du Cancer HSpital Kirchberg 9 rue Edward Steichen L-2540 Luxembourg Luxembourg Lehrstuhl for Botanik Technische Universitat Munchen EmiI-Ramann-StraBe 4 D-85354 Freising Germany Jnstitut de Biologie Moleculaire des Plantes du CNRS 12 rue du Général Zimmer F-67084 Strasbourg Ceédex France

The two LIM domain-containing proteins from plants （LIMs） typically exhibit a dual cytoplasmic-nuclear dis-tribution, suggesting that, in addition to their previously described roles in actin cytoskeleton organization, they partici-pate in nuclear processes. Using a south-western blot-based screen aimed at identifying factors that bind to plant histone gene promoters, we isolated a positive clone containing the tobacco LIM protein WLIM2 （NtWLIM2） cDNA. Using both green fluorescent protein （GFP） fusion-and immunology-based strategies, we provide clear evidence that NtWLIM2 local-izes to the actin cytoskeleton, the nucleus, and the nucleolus. Interestingly, the disruption of the actin cytoskeleton by latrunculin B significantly increases NtWLIM2 nuclear fraction, pinpointing a possible novel cytoskeletal-nuclear crosstalk. Biochemical and electron microscopy experiments reveal the ability of NtWLIM2 to directly bind to actin filaments and to crosslink the latter into thick actin bundles. Electrophoretic mobility shift assays show that NtWLIM2 specifically binds to the conserved octameric cis-elements （Oct） of the Arabidopsis histone H4A748 gene promoter and that this binding largely relies on both LIM domains. Importantly, reporter-based experiments conducted in Arabidopsis and tobacco proto-plasts confirm the ability of NtWLIM2 to bind to and activate the H4A748 gene promoter in live cells. Expression studies indicate the constitutive presence of NtWLIM2 mRNA and NtWLIM2 protein during tobacco by-2 cell proliferation and cell cycle progression, suggesting a role of NtWLIM2 in the activation of basal histone gene expression. Interestingly, both live cell and in vitro data support NtWLIM2 di/oligomerization. We propose that NtWLIM2 functions as an actin-stabilizing protein, which, upon cytoskeleton remodeling, shuttles to the nucleus in order to modify gene expression.

关键词： actin by-2 cytoskeleton DNA-binding histone genes LIM Nicotiana tabacum promoter regulation trans-acting factors.