检索结果-南通市图书馆

作者：程兵坤河北医科大学

学位级别：硕士

以骨质疏松(Osteoporosis,OP)为代表的骨代谢性疾病是一种发病率和危害性极高的骨相关性疾病。其主要表现为骨量降低、骨微结构受损、骨小梁减少、骨质变薄等,使得骨脆性增加并易发生骨折等风险;其严重危害着老年人及妇女的身体健康,已... 详细信息

以骨质疏松(Osteoporosis,OP)为代表的骨代谢性疾病是一种发病率和危害性极高的骨相关性疾病。其主要表现为骨量降低、骨微结构受损、骨小梁减少、骨质变薄等,使得骨脆性增加并易发生骨折等风险;其严重危害着老年人及妇女的身体健康,已成为21世纪初人们广泛关注的社会问题之一。因此如何通过促进骨形成进而改善骨质疏松已成为目前研究的热点和难点问题。正常情况下骨代谢处于骨形成与骨吸收平衡的状态,使得骨量保持不变;若某种原因使得骨形成大于骨吸收,则可使骨量增加,进而可改善OP。因此针对调控骨形成的关键分子进行研究受到越来越多的关注,CKIP-1是近年来新发现的负调控骨形成分子,即该基因缺陷小鼠表现为骨形成速率增快、骨量增加、骨硬化。故CKIP-1基因可为骨质疏松等骨代谢相关疾病的防治提供新的思路,为此我们对该基因敲除小鼠进行研究。研究发现CKIP-1基因敲除小鼠的骨量及骨矿密度高于野生型,且颌骨与股骨的变化有差异,颌骨骨体积分数变化更加明显。间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)是具有多向分化潜能的一类细胞,在特定条件下可向成骨细胞、成纤维细胞、软骨细胞等分化。且有研究表明CKIP-1通过负调控MSCs的增殖及成骨分化能力而影响成骨。因此,我们推测CKIP-1是否通过影响不同部位MSCs的增殖及成骨分化能力进而导致不同部位骨量变化不一。目的:本研究拟借助CKIP-1基因敲除小鼠模型,首先通过新方法分离培养颌骨来源MSCs(Orofacial-bone-derived Mesenchymal Stem Cells,OMSCs)及股骨来源MSCs(Long-bone-marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,bmmscs),后经离体细胞和在体动物验证以明确CKIP-1通过影响不同部位MSCs成骨分化能力进而影响不同部位成骨。方法:1采用II型胶原酶消化法分离培养CKIP-1野生(Wildtype,WT)及敲除(knockout,ko)小鼠的omscs及bmmscs,后通过细胞形态观察,及流式细胞术检测细胞表面标记分子表达,证实所分离培养的细胞的来源和分析其生物学特性。2采用mtt及克隆形成实验,检测ckip-1缺失对omscs和bmmscs增殖能力影响;采用流式细胞术检测细胞凋亡实验,研究ckip-1缺失对omscs和bmmscs生物学特性影响。3对各细胞进行成骨、成脂诱导,检测各细胞的成骨和成脂分化能力。成骨诱导后行alp活性检测及茜素红染色,探讨ckip-1缺失对omscs和bmmscs成骨分化中早期及晚期分化的影响;成骨诱导后采用rt-pcr检测成骨分化相关分子(runx2、alp、coli、ocn)表达,探讨ckip-1缺失对omscs和bmmscs成骨分化相关分子的影响。经成脂诱导实验以检测各细胞的多向分化潜能,及ckip-1对mscs成脂能力的影响。4通过将成骨诱导的wt和ko小鼠omscs及bmmscs接种到羟基磷灰石/β-磷酸三钙(ha/β-tcp)上后植入到裸鼠皮下,并于2个月后处死取材,行he和masson三色染色,进一步体内验证ckip-1缺失对omscs和bmmscs成骨分化能力的影响。结果:1采用ii型胶原酶消化法可成功分离并培养出omscs和bmmscs。倒置显微镜观察可见各组细胞均生长良好,呈梭形或三角形。流式细胞术鉴定该类细胞均高表达干细胞表面标志分子(cd29、cd44和cd90),几乎不表达其他来源细胞的标志分子(cd31和cd34)。同时对不同细胞表面标志分子行定量分析,发现wt和ko小鼠颌骨及股骨分离的细胞表达干细胞表面标志分子的阳性率无统计学差异(p>0.05)。2采用mtt及平板克隆形成实验两种方法检测细胞增殖能力,结果均显示,mscs的增殖能力呈现:ko组大于wt组,且ckip-1敲除后omscs组增殖能力增加更加明显(pbmmscs凋亡率无统计学差异(p>0.05)。3成骨诱导后,采用alp活性染色和rt-pcr检测成骨向分化指标(runx2、alp),评估各组mscs的成骨向分化能力。alp染色深度及alp和runx2基因表达结果均表明,ko组大于wt组,且ckip-1敲除后omscs相应结果增加更加明显(p<0.05)。同样采用rt-pcr检测成骨相关指标(COL I、OCN)和行茜素红染色,以检测各组MSCs的成骨能力。同成骨向分化检测结果一致,MSCs的成骨能力也表现为,CKIP-1敲除后OMSCs组成骨能力增加更加明显(P<0.05)。成脂诱导结果表明,细胞均可成脂向分化,且CKIP-1敲除组成脂能力较强。4将载有细胞的支架材料植入到裸鼠皮下,2个月后处死取

关键词： CKIP-1 OMSCs bmmscs 成骨分化异位成骨

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TRPM8通道对Zmpste24-/-小鼠骨髓间充质干细胞增殖/凋亡的影响

TRPM8通道对Zmpste24-/-小鼠骨髓间充质干细胞增殖/凋亡的影响

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作者：刘窕第四军医大学

学位级别：硕士

Hutchinson—Gilford早老症(HGPS)是一种罕见的遗传性疾病,其临床特征为患者幼年时期即出现衰老症状并累及多种组织器官,包括皮肤、肌肉、骨骼以及心血管系统。HGPS伴发有老年人常见的并发症,并最终导致死亡,该疾病患儿的平均寿命约13.... 详细信息

Hutchinson—Gilford早老症(HGPS)是一种罕见的遗传性疾病,其临床特征为患者幼年时期即出现衰老症状并累及多种组织器官,包括皮肤、肌肉、骨骼以及心血管系统。HGPS伴发有老年人常见的并发症,并最终导致死亡,该疾病患儿的平均寿命约13.5岁。HGPS是由于LMNA基因的点突变干扰了A型核纤层蛋白前体(prelamin A)翻译后的加工过程,从而导致异常prelamin A在细胞核堆积的结果。Zmpste24是参与由prelamin A形成成熟的核纤层蛋白A(lamin A)过程所必须的酶。Zmpste24基因敲除小鼠具有典型的早老表现,是目前研究细胞衰老机制的首选模型。瞬时性受体电位通道(transient receptor potential,TRP)是参与调节胞内钙离子平衡的一种通道,广泛表达于哺乳动物的多种组织中,并参与调节例如细胞增殖、细胞凋亡、递质释放、细胞分化、基因转录等诸多重要的生理功能。研究发现由早老症患者的内皮细胞诱导的多能干细胞高表达TRPV2,最终导致细胞凋亡,与细胞衰老密切相关。但是TRP通道对骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenehymal stem cells,bmmscs)功能的影响尚少有报道,并且TRP通道如何影响细胞衰老的机制也尚不明确。细胞衰老涉及毒性代谢物的积累、DNA损伤、线粒体代谢紊乱等方面,这些衰老的表现都与氧化应激相关。因此本实验通过比较Zmpste24-/-早老小鼠与野生型小鼠bmmscs的衰老情况、增殖能力、凋亡水平、TRP通道的表达情况以及TRP通道与氧化应激的关系,进一步探讨TRP通道对于细胞衰老的影响及其可能存在的调控机制。[实验目的]1.比较Zmpste24-/-基因敲除、野生型小鼠bmmscs的衰老情况、增殖能力和凋亡水平;2.比较Zmpste24-/-基因敲除、野生型小鼠bmmscs的TRP通道表达情况,筛选与细胞增殖、凋亡相关的TRP通道;3.初步探讨TRP通道影响细胞增殖凋亡的机制。[实验方法]1.利用全骨髓贴壁培养法分离培养、纯化Zmpste24-/-、野生型小鼠bmmscs,流式鉴定间充质干细胞的表面标志物,并进行克隆形成的鉴定;2.利用Edu检测两种小鼠bmmscs的增殖能力,流式细胞技术检测细胞周期的情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡能力,β-半乳糖苷酶染色检测两种小鼠bmmscs的细胞衰老情况;RT-PCR检测bmmscs的细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK1、CDK4、CDK6及衰老相关基因P16、P21、P53的表达水平。***-PCR检测两种小鼠bmmscs的TRP通道表达情况,通过无血清培养(抑制增殖)和H2O2处理(促进细胞凋亡)筛选出影响bmmscs增殖凋亡的TRP通道;并通过Western-Blot技术检测该通道的表达;4.抑制TRPM8通道的表达检测bmmscs细胞增殖能力及氧化应激水平的变化。[实验结果]1.分离纯化后,WT的bmmscs呈梭形,细胞个体小,细胞立体感强;Zmpste24-/-的bmmscs细胞呈扁平形,个体较大,立体感差;两种小鼠的bmmscs均阳性表达Sca-1、CD73,阴性表达CD34、CD45,符合间充质干细胞的特性;Zmpste24-/-、WT小鼠的bmmscs通过克隆均能形成集落,其中Zmpste24-/-小鼠的bmmscs形成集落速度慢,集落数目少,WT小鼠的bmmscs形成的集落染色深,大于50个细胞的集落数目较多(pbmmscs的增殖能力明显低于WT(pbmmscs G0/G1期细胞所占比例比WT高,G2期、S期细胞所占比例均比WT低(pbmmscs凋亡水平明显高于WT(pbmmscs的衰老细胞数目明显多于WT(pbmmscs的Cyclin D1、CDK1、CDK4、CDK6的表达水平低于WT小鼠(pbmmscs中的TRPC1、TRPM4、TRPM8、TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV5通道表达水平均明显高于WT小鼠(pbmmscs进行12h的无血清培养后TRPC3、TRPC7、TRPM8、TRPV5的表达水平显著升高(p<0.05);含500μ

关键词： HGPS TRP 通道 bmmscs 细胞增殖细胞凋亡氧化应激

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丙烯酰胺对猪骨髓间充质干细胞NFκB通路的影响

丙烯酰胺对猪骨髓间充质干细胞NFκB通路的影响

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作者：陶晓莉华中农业大学

学位级别：硕士

骨髓间充质干细胞(bmmscs)具有免疫调节功能,参与多种免疫反应,在体内具有优先迁移到受损组织器官发挥其修复功能的能力。现阶段的bmmscs体外分离方法是建立在Friedenstein分离方法的基础上形成的。目前,由于bmmscs的鉴定没有一种明确... 详细信息

骨髓间充质干细胞(bmmscs)具有免疫调节功能,参与多种免疫反应,在体内具有优先迁移到受损组织器官发挥其修复功能的能力。现阶段的bmmscs体外分离方法是建立在Friedenstein分离方法的基础上形成的。目前,由于bmmscs的鉴定没有一种明确统一的体系,只能从几个方面综合分析来作为其鉴定的依据。丙烯酰胺(ACR)具有致癌性、遗传毒性以及神经毒性。本试验通过bmmscs的分离鉴定,建立bmmscs的体外培养体系,并探讨ACR对bmmscs上ROS、Hsp27以及NFκB通路的影响,以期为ACR的作用机制研究提供一条新的线索。本文采用全骨髓贴壁法体外分离0-6月龄五指山小型猪bmmscs,并利用CCK-8检测其增殖能力。bmmscs的鉴定是通过细胞形态学分析、成脂成骨诱导分化潜能鉴定以及CD34/CD45/CD90/CD29/CD44细胞表面抗原的检测等几种指标综合分析。使用0.5mmM的ACR刺激bmmscs 72 h,分别用ROS检测试剂盒检测ROS分泌量、ELISA试剂盒在蛋白水平检测Hsp27和IL-8表达量、实时定量PCR在mRNA水平上检测IL-8的表达量、双荧光素酶系统检测NFκB通路的激活状况,并用试剂盒检测ACR处理前后bmmscs的细胞周期和凋亡状况。结果表明分离得到的五指山小型猪bmmscs形态呈梭形或多角形,类似成纤维样细胞,细胞群体呈旋涡状生长。成脂、成骨诱导培养21d分别用油红O及茜素红染色均呈阳性。流式细胞仪检测显示,bmmscs表达CD90、CD29及CD44,不表达造血干细胞标志性抗原CD34和白细胞标志性抗原CD45。0.5 mM的ACR刺激bmmscs 72 h后检测其ROS、Hsp27、IL-8表达量均明显升高,双荧光素酶系统检测到NFκB通路被激活(Pbmmscs的细胞周期和凋亡未见明显变化。总之,本文摸索出五指山小型猪bmmscs一套分离培养体系,通过形态学分析、分化潜能以及表面抗原三个方面检测,基本确定其为骨髓间充质干细胞。当0.5 mMACR刺激时,ROS、Hsp27及IL-8表达量均升高,细胞质中NFκB含量显著升高,说明NFκB通路可能被激活,而细胞凋亡和周期变化不明显。

关键词： bmmscs 猪丙烯酰胺 Hsp27 NFκB

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佛手柑内酯对骨髓间充质干细胞成骨分化能力影响的初步研究

佛手柑内酯对骨髓间充质干细胞成骨分化能力影响的初步研究

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作者：肖继杰南方医科大学

学位级别：硕士

一、研究背景骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bmmscs)自20世纪中期被发现以来,一直备受科学界的关注。bmmscs来源于中胚层,是一类具有自我复制和多向分化潜能的非造血干细胞,主要存在于全身结缔组织和器官间质中... 详细信息

一、研究背景骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bmmscs)自20世纪中期被发现以来,一直备受科学界的关注。bmmscs来源于中胚层,是一类具有自我复制和多向分化潜能的非造血干细胞,主要存在于全身结缔组织和器官间质中,在骨髓中的含量最为丰富。近年来,随着大家对骨髓间充质干细胞研究和认识的加深以及细胞生物工程技术的不断发展,骨髓间充质干细胞在临床医学和再生医学中应用越来越广泛,是当前组织修复领域的研究热点。bmmscs在体外分离培养方法简单,扩增速度比较快,并且在一定条件下可以诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等,bmmscs的临床应用大部分都是基于它的多向分化潜能,但是bmmscs的体外诱导分化条件不成熟,诱导效率不稳定,有待进一步的研究。骨质疏松(osteoporosis,OP)是以低骨量和骨组织微结构破坏为特征,导致骨质脆性增加并且容易引起骨折的一种全身性代谢性疾病。尤其在绝经后妇女常见,绝经后雌激素分泌明显降低,骨质吸收和骨质形成均加快,呈高转换型骨代谢,骨质吸收的过程相比较成骨的过程短,从而造成骨量的丢失。成骨细胞、破骨细胞及骨髓间充质干细胞在骨质疏松的发生机制中占有很重要的地位。近年来所研究的具有抗骨质疏松作用中药活性成分多是促进成骨细胞的增殖或者抑制破骨细胞的生成而发挥功效,而所属药物成分对骨髓间充质细胞的作用常常被忽略。目前,关于中药成分作用于骨髓间充质干细胞从而促进成骨能力防治骨质疏松鲜有报道,相关机制的研究更不明确。佛手柑内酯(Bergapten, BP)为呋喃香豆素天然产物,是多种植物的次级代谢物,广泛的存在于自然界中,更是佛手、当归、香橼和羌活等众多中药材中的有效成分之一。BP在国外运用于白癜风等皮肤病的临床治疗已经有几十年的历史,并且取得不错的疗效。近年来BP在肿瘤方面作用的研究成为热点,有研究发现,其对胃癌、肝癌、乳腺癌及鼻咽癌细胞具有体外抑制作用,并且对相关的机制进行了研究,取得了不错的进展。同时,BP的其他功效也进行了广泛的研究,有研究发现,BP可以通过抑制破骨细胞及其前体细胞的形成从而阻止脂多糖导致的骨质流失和吸收。BP也可以通过增高骨形成蛋白2(BMP-2)的表达加强骨生成。由此可见,BP确实具有促进骨质形成及抑制骨质吸收的功能。但是BP在骨髓间充质干细胞成骨方面的作用及防治骨质疏松的动物实验未见报道。Wnt信号通路包括3条细胞内信号转导通路,即Wnt/β-catenin信号转导通路、Wnt/Ca2+信号转导通路和Wnt/平面细胞极性(PCP)信号转导通路。Wnt/β-catenin信号通路参与调控胚胎的正常发育和细胞增殖、迁移与分化等重要生理过程,在骨量和骨生长调控的重要作用得到证实,是目前骨骼系统相关疾病发病机制及骨代谢研究的热点。bmmscs的分化方向受多种因素,多个信号途径的调节,Wnt/β-catenin信号通路同归旁分泌或者自分泌的方式影响细胞的分化和增殖。正常状态下,大部分胞质内的β-catenin被束缚在由细胞膜向胞内伸出的E-钙粘着蛋白上,而其余部分与大肠腺瘤样蛋白和轴素多聚蛋白复合物结合,有利于胞浆内糖原合成酶激酶(GSK-3β)磷酸化和上述复合物结合的β-catenin,被磷酸化的β-catenin易被泛素-蛋白酶体系统降解,从而保持细胞质内游离的β-catenin浓度处于相对较低的状态,在Wnt信号通路活化时,通过拮抗对β-catenin的磷酸化、降解作用,使胞质内β-catenin含量积聚并且移至核内,与核内转录因子TCF/LEF家族相连接,从而控制下游靶基因的调控长骨远端生转录和表达。因此,在一定程度上讲,BP通过调控Wnt信号通路从而参与到调控bmmscs向成骨细胞分化的过程中来的。β-catenin作为Wnt信号通路的下游蛋白,是Wnt行使生理功能的重要信号分子,在实际的研究过程中,人们往往通过检测β-catenin的表达量来衡量Wnt信号通路的活性,因此,不难看出β-catenin是Wnt通路中非常重要的蛋白因子。二、目的1.探索不同浓度BP对bmmscs增殖活性的影响,筛选适合bmmscs分化增殖的药物浓度。2.研究体外条件下不同浓度BP对bmmscs分化增殖能力的影响,分析BP促进bmmscs向成骨细胞分化的分子机制。3.在骨质疏松的动物模型上通过对骨质疏松症的治疗,验证BP在活体内促进bmmscs转化为成骨细的有效机制三、材料和方法1、bmmscs分离培养及BP浓度对其增殖的影响选取4周大的雌性C57BL/6小鼠4只,断颈法处死后消毒双下肢手术部位,用无菌眼科剪依次剪开皮肤、肌肉,无菌取出双侧胫骨和股骨,并放入磷酸缓冲盐溶液(PBS)中清洗。剪掉胫骨和股骨的两端,暴露骨髓腔,用注射器反复吸取培养基

关键词： BP bmmscs 成骨细胞骨质疏松骨形成

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银屑病患者骨髓间充质干细胞转分化为血管内皮细胞的初步研究

银屑病患者骨髓间充质干细胞转分化为血管内皮细胞的初步研究

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作者：张永翠山西医科大学

学位级别：硕士

【目的】将银屑病患者骨髓间充质干细胞（Bone marrow Mesenchymal Stem Cells,bmmscs）体外分化为血管内皮细胞（VEC）,并对定向分化的VEC活性进行初步研究,为银屑病患者bmmscs生物特性的深入研究提供依据。【方法】 ①... 详细信息

【目的】将银屑病患者骨髓间充质干细胞（Bone marrow Mesenchymal Stem Cells,bmmscs）体外分化为血管内皮细胞（VEC）,并对定向分化的VEC活性进行初步研究,为银屑病患者bmmscs生物特性的深入研究提供依据。【方法】 ①采用密度梯度离心法分离银屑病患者与对照组骨髓单个核细胞,通过贴壁法培养bmmscs,用流式细胞仪鉴定细胞表面标志;②加入血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）定向诱导bmmscs向VEC分化,流式细胞仪进行细胞表型鉴定;③免疫细胞荧光技术鉴定VEC标志物KDR、VWF的表达;④体外血管成形试验检测诱导的内皮细胞体外成形能力;⑤用transwell小室测诱导的VEC对T细胞的迁移能力。⑥并对在培养分化过程中,发现1例双亲均患病的银屑病患者bmmscs在原代即开始向VEC分化,采用了高通量RNA测序技术对其差异表达基因进行了筛选。【结果】 ①流式测定显示两组培养的bmmscs高表达CD44、CD29,而HLA-DR、CD45、CD34阴性表达,说明所培养的bmmscs纯度较高;②银屑病组CD34、CD45、ICAM-1、HLA-R阳性表达,且明显高于对照组（p﹤0.05）;③免疫细胞化学显示两组都可分化为VEC;④银屑病患者诱导的VEC具有体外成形能力;⑤银屑病组诱导的VEC对T细胞的具有迁移作用;⑥1例自分化患者高通量测定结果,共筛选了475个差异表达基因,其中298个基因表达呈增高趋势,177个基因呈降低趋势,其中,差异表达基因在2个term上有显著富集（P＜0.05）,分别为类前列腺素的代谢过程和前列腺素的代谢过程。【结论】银屑病患者bmmscs生物学活性异常,且易于转分化为VEC。银屑病患者bmmscs参与了银屑病的发病,其向VEC的异常分化可能是导致银屑病患者皮损真皮乳头层微血管异常增生的根源。

关键词：银屑病 bmmscs 差异表达基因 VEC VEGF

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骨髓间充质干细胞N-Cadherin对MRL/lPR狼疮鼠成骨及造血的影响

骨髓间充质干细胞N-Cadherin对MRL/lPR狼疮鼠成骨及造血的影响

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作者：锁星星江苏大学

学位级别：硕士

目的:伴有全血细胞减少的系统性红斑狼疮(SLE)患者,目前临床缺乏有效治疗方法。本课题拟研究骨髓间充质干细胞(bmmscs)N-钙黏蛋白(N-Cadherin)对MRL/lpr狼疮鼠成骨及造血的影响,为SLE全血细胞减少提供新的理论依据,为治疗提供新的靶点... 详细信息

目的:伴有全血细胞减少的系统性红斑狼疮(SLE)患者,目前临床缺乏有效治疗方法。本课题拟研究骨髓间充质干细胞(bmmscs)N-钙黏蛋白(N-Cadherin)对MRL/lpr狼疮鼠成骨及造血的影响,为SLE全血细胞减少提供新的理论依据,为治疗提供新的靶点。方法:(1)qRT-PCR检测C57BL/6鼠和MRL/lpr鼠bmmscs N-cadherin的mRNA表达差异;(2)qRT-PCR检测MRL/lpr鼠bmmscs成骨诱导前后N-cadherin表达差异;(3)qRT-PCR检测C57BL/6鼠和MRL/lpr鼠bmmscs成骨指标(Col1A1、ALP、Run2、OCN)的差异;(4)C57BL/6鼠和MRL/lpr鼠bmmscs成骨诱导2周后qRT-PCR检测两组成骨指标的差异;(5)构建慢病毒,转染细胞,下调MRL/lpr鼠bmmscs的N-cadherin的表达,流式筛选GFP绿色荧光阳性的细胞,采用qRT-PCR鉴定出低表达组;(6)取两组细胞(MRL/lpr小鼠bmmscs,shRNA慢病毒侵染bmmscs)成骨诱导2周,诱导为成骨细胞(OB),qRT-PCR检测感染前后成骨指标的差异;(7)10只MRL/lpr小鼠,实验分组为2组,每组5只MRL/lpr小鼠,分别为尾静脉注射PBS狼疮鼠组、尾静脉注射N-Cadherin shRNA慢病毒感染后bmmscs狼疮鼠组,20周龄处死,眼球取外周血,血细胞检测仪检测各组小鼠血常规差异。流式细胞术分析骨髓、脾脏细胞各系的比例,集落形成试验检测骨髓、脾脏集落形成数的差异。结果:(1)MRL/lpr狼疮鼠bmmscs表面粘附分子N-cadherin mRNA的表达量明显高于对照组C57BL/6小鼠(Pbmmscs成骨诱导2周后N-cadherin mRNA的表达高于对照组(pbmmscs的COL1(Pbmmscs正常组和NC组,shRNAN组N-Cadherin的表达明显下降(pbmmscs,shRNA慢病毒侵染bmmscs)成骨诱导为OB,qRT-PCR检测结果显示:狼疮鼠OB的RUNX2的mRNA表达量较感染前明显增加(Pbmmscs组WBC、RBC、HB、PTL计数均有所增加,但无统计学意义;骨髓和脾脏流式结果显示:较PBS组,bmmscs组B220+B淋巴细胞(Pbmmscs组Ter-119+红系,CD3e+T淋巴细胞,CD11b髓系比例未见明显异常;骨髓集落结果显示:较PBS组,bmmscs组CFU-pre-B(Pbmmscs组BFU-E、CFU-GM未见明显异常;脾脏集落结果显示:较PBS组,bmmscs组BFU-E、CFU-GM未见明显异常。结论:(1)MRL/lpr狼疮鼠bmmscs表面粘附分子N-Cadherin的表达量明显高于C57BL/6小鼠;MRL/lpr狼疮鼠OB的N-Cadherin的表达高于对照组;(2)MRL/lpr狼疮鼠的成骨能力低于C57BL/6小鼠;(3)下调N-Cadherin后,MRL/lpr狼疮鼠OB的N-Cadherin表达较下调前明显下降,MRL/lpr狼疮鼠OB的成骨能力增加;(4)下调bmmscs N-Cadherin可抑制MRL/lpr狼疮鼠骨髓、脾脏B淋巴细胞、浆细胞的产生,改善贫血。

关键词：间充质干细胞 bmmscs N-Cadherin 成骨造血

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骨髓间充质干细胞对CD34+细胞增殖影响的体外研究

骨髓间充质干细胞对CD34+细胞增殖影响的体外研究

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作者：王荣山西医科大学

学位级别：硕士

[目的] 研究骨髓间充质干细胞（Bone marrow Mesenchymal Stem Cells, bmmscs）对骨髓CD34+细胞增殖的影响,为骨髓CD34+细胞体外扩增的深入研究提供依据。 [方法] ①VarioMACS分选器进行骨髓CD34+细胞的分选,用流式细胞术进行... 详细信息

[目的] 研究骨髓间充质干细胞（Bone marrow Mesenchymal Stem Cells, bmmscs）对骨髓CD34+细胞增殖的影响,为骨髓CD34+细胞体外扩增的深入研究提供依据。 [方法] ①VarioMACS分选器进行骨髓CD34+细胞的分选,用流式细胞术进行骨髓CD34+细胞纯度鉴定;采用密度梯度离心法分离引产胎儿骨髓单个核细胞,结合贴壁法进行bmmscs的体外扩增培养,并用流式细胞术进行bmmscs表面标志鉴定;用Transwell培养板培养骨髓CD34+细胞与bmmscs,自动细胞计数仪计数有活性的骨髓CD34+细胞数量,并采用MTT比色法检测骨髓CD34+细胞增殖活性。 [结果] 流式细胞术检测显示分选所得的骨髓CD34+细胞纯度通常可达到90%以上;流式细胞术检测显示传至第3代继续培养72h后的bmmscs高表达CD44、CD29,而HLA-DR、CD45、CD34阴性表达,说明所培养的bmmscs纯度很高;Transwell培养板培养骨髓CD34+细胞与bmmscs,倒置显微镜下观察以及自动细胞计数仪计数发现,实验组有活性的骨髓CD34+细胞数量高于对照组（P＜0.05）;采用MTT比色法检测骨髓CD34+细胞的增殖活性,实验组高于对照组（P＜0.05）。 [结论] bmmscs有促进骨髓CD34+细胞增殖的作用,这种作用的发挥可能与其分泌的细胞因子有关。

关键词：骨髓CD34+细胞 bmmscs 增殖

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lncRNAs调控骨髓间充质干细胞分化的研究进展

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广东医科大学学报 2022年第5期40卷 584-588页

作者：彭波邹其声林文杰王蒙程龙杨泽张球良孙欣广东医科大学附属医院骨外科广东湛江524011

近年来国内外越来越多的研究揭露了lncRNAs可能起到调控骨质疏松发病过程的潜在作用。该文从lncRNAs调控bmmscs分化的角度出发,对lncRNAs在骨质疏松症中影响及作用机制进行综述,以进一步探讨lncRNAs在骨质疏松症治疗方面的潜在价值。

关键词： lncRNAs 骨质疏松 bmmscs 成骨分化

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CD226分子参与调节小鼠体内骨植入材料周围骨结合的研究

CD226分子参与调节小鼠体内骨植入材料周围骨结合的研究

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：王津津王颖王宁金敬一方亮王勤涛张玉梅陈丽华第四军医大学基础部免疫学教研室第四军医大学口腔医院牙周科

研究背景:CD226是2000年被命名的白细胞分化抗原分子,前期实验结果表明其与自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染等多种疾病的发生发展密切关系;Cd226-/-小鼠的疾病模型中IL-10的表达和浸润显著减少,从而具有抑制炎症发生的作用,而该种抑炎... 详细信息

研究背景:CD226是2000年被命名的白细胞分化抗原分子,前期实验结果表明其与自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染等多种疾病的发生发展密切关系;Cd226-/-小鼠的疾病模型中IL-10的表达和浸润显著减少,从而具有抑制炎症发生的作用,而该种抑炎作用对小鼠骨植入材料周围骨结合的影响以及CD226在参与骨形成中的作用至今鲜有报道。研究目的:观测Cd226-/-小鼠骨植入材料周围骨结合情况,明确CD226分子对小鼠bmmscs成骨分化的调节作用。研究方法:Cd226-/-和WT小鼠股骨远端植入表面纳米化处理的种植体,2周后处死小鼠并取材。MicroCT检测种植体周围骨结合情况,组织学观察种植体周围骨小梁形成情况及炎症反应。取Cd226-/-和WT小鼠bmmscs原代培养并进行成骨诱导,RT-PCR和ALP染色检测两组细胞成骨分化情况。研究结果:***-CT结果显示Cd226-/-小鼠种植体周围骨体积分数显著高于WT组(46.39±1.27%vs39.05±3.14%,Pbmmscs的骨细胞特异转录因子Runx2及成骨相关转录因子抗体Osterix表达水平显著高于WT组。***染色结果显示Cd226-/-小鼠相比WT组有较多的蓝色结节。研究结论:Cd226-/-可以促进小鼠bmmscs的成骨分化,抑制局部炎症反应,从而有利于骨植入材料周围骨结合。

关键词： CD226 bmmscs 骨植入材料骨结合

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颌骨骨质疏松机制的研究

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中国煤炭工业医学杂志 2017年第10期20卷 1279-1282页

作者：张玉松李健马莉华北理工大学口腔医学院河北省唐山市063000 唐山市人民医院唐山职业技术学院

随着种植技术的发展与改进,人们生活水平的不断提高,种植牙已被广大患者接受和认可。颌骨是全身骨骼系统的一部分,全身骨代谢疾病也会影响颌骨骨组织的代谢和骨量的变化。骨质疏松作为影响种植体骨结合的重要因素,对种植牙咀嚼功能成功... 详细信息

随着种植技术的发展与改进,人们生活水平的不断提高,种植牙已被广大患者接受和认可。颌骨是全身骨骼系统的一部分,全身骨代谢疾病也会影响颌骨骨组织的代谢和骨量的变化。骨质疏松作为影响种植体骨结合的重要因素,对种植牙咀嚼功能成功恢复不可忽视。本文从骨改建异常,骨质疏松与成脂分化,间充质干细胞的成脂分化,Ror2/Wnt5α信号通路对bmmscs成脂分化的调控机制等方面作一综述。

关键词：骨质疏松骨改建 bmmscs Ror2/Wnt5α

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