检索结果-南通市图书馆

作者：张俊俊广西大学

学位级别：硕士

水牛是一种优良的种质资源,是公认的最具有开发潜力和价值的家畜之一。但雄性水牛的繁殖力低于其他牛属物种,其中一个主要的原因是精子发生异常,这在一定程度上阻碍了水牛资源的开发。支持细胞（Sertoli Cells,SCs）是维持正常精子发生... 详细信息

水牛是一种优良的种质资源,是公认的最具有开发潜力和价值的家畜之一。但雄性水牛的繁殖力低于其他牛属物种,其中一个主要的原因是精子发生异常,这在一定程度上阻碍了水牛资源的开发。支持细胞（Sertoli Cells,SCs）是维持正常精子发生必不可少的一类体细胞,通过紧密连接、间隙连接和外质特化等方式构成血-睾丸屏障,在维持雄性繁殖力方面发挥重要作用。自噬是维持细胞稳态的重要机制,可以通过维护外质特化的完整性进而影响精子发生过程。bet（BRD and Extra-Terminal Domain）家族属于溴结构域（Bromodomain,BRD）家族,可作为自噬的调控因子,其受到抑制后会造成精子数量减少、精子活力降低并阻碍精子发生。因此,研究bet家族在支持细胞中的自噬调控机制具有重要价值。本研究以水牛支持细胞为研究对象,通过生物信息学手段分析bet家族的相关信息,并探究bet家族对水牛支持细胞自噬的影响及其潜在的调控机制,为进一步丰富bet家族调控网络以及研究精子发生的调控机制奠定理论基础。本研究的主要内容和结果如下:（1）水牛BRD家族鉴定和进化分析研究bet是BRD家族中的子家族,目前关于bet家族在水牛中的进化关系尚不清楚。为阐明bet家族的进化关系和功能,本试验采用生物信息学方法对水牛中所有BRD家族成员进行鉴定和进化分析。结果表明:在水牛基因组中鉴定出了22个BRD基因,共编码101个BRD蛋白质;bet家族成员位于同一分支上且亲缘关系密切,保守motif/结构域分析支持聚类的结果;在水牛BRD基因中未发现串联或节段重复事件,但20对BRD基因对在水牛和奶牛之间具有显著的同源性,其中包括bet家族,可能属于直系同源基因。以上结果为后续研究bet家族的功能奠定了理论基础。（2）抑制bet家族对水牛支持细胞自噬影响的研究本试验旨在研究抑制bet家族对水牛支持细胞自噬的影响。首先获得纯化的SCs,采用bet家族抑制剂JQ1处理SCs,筛选出最佳的作用浓度和时间,观察其对SCs形态、自噬和凋亡的影响。结果表明:500 n M和1000 n M的JQ1处理24 h对SCs活力产生明显的抑制作用,细胞形态发生明显变化;自噬体的数量增加,自噬溶酶体的降解被抑制,自噬通量减弱;细胞凋亡率无显著变化。以上结果表明,抑制bet家族导致自噬活性被抑制,对凋亡未产生显著影响,为进一步探索bet家族调控水牛SCs自噬的机制奠定了基础。（3）bet家族抑制前后的转录组分析及自噬调控机制的研究为进一步筛选自噬相关调控基因和信号通路,本试验通过转录组学鉴定抑制bet家族前后的差异表达基因,挖掘bet家族调控SCs自噬的潜在机制。结果表明:抑制bet家族前后的样品之间共筛选出2307个差异表达基因,其中上调基因639个,下调基因1614个;差异表达基因主要参与细胞通讯、信号转导、细胞进程调控等生物学进程以及Rap1、c AMP和TNF等信号通路,自噬相关差异表达基因主要参与自噬体的形成和成熟等生物学过程;蛋白质互作网络分析发现PIK3R1、PIK3CB、RRAS、FOXO3、ITPR1、HSPB8、p62、VAMP8在自噬调控中发挥枢纽作用。其中PIK3R1、PIK3CB在网络中的连接度最高,它们是PI3K-AKT信号通路的关键因子,推测PI3K-AKT信号通路可能在bet家族调控水牛SCs自噬的过程中发挥重要作用。q RT-PCR验证了VAMP8、FOXO3、ULK3、NRBF2、PIK3R1、PIK3CB和HSPB8的表达趋势与转录组数据一致。综上所述,本研究通过分析bet家族的进化关系,探究bet家族对水牛支持细胞自噬的影响及其潜在的调控机制,为研究bet家族各成员的功能和丰富bet家族调控网络提供新的依据,为进一步揭示微环境影响精子发生的机理提供参考。

关键词：水牛支持细胞自噬 bet家族转录组

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bet家族基因表达与恶性肿瘤患者总生存期及临床病理特征的关系

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中国医药导报 2016年第2期13卷 69-72,108页

作者：王婧文唐菲邓磊纳飞飞薛建新卢铀四川大学华西医院华西临床医学院四川成都610041 四川大学华西医院肿瘤中心胸部肿瘤科四川成都610041

目的探讨新兴肿瘤治疗靶点bromodomain and extra—terminal（bet）家族基因表达与多种实体恶性肿瘤患者预后及临床病理特征的关系。方法使用美国Kaplan Meier plotter在线数据库，采集肿瘤样本bet家族基因mRNA水平表达数据及患者临床... 详细信息

目的探讨新兴肿瘤治疗靶点bromodomain and extra—terminal（bet）家族基因表达与多种实体恶性肿瘤患者预后及临床病理特征的关系。方法使用美国Kaplan Meier plotter在线数据库，采集肿瘤样本bet家族基因mRNA水平表达数据及患者临床数据，在线完成生存分析。结果胃癌中，BRD2／BRD3／BRDT高表达组患者总生存期显著下降（均P〈0．01）。这一相关性在乳腺癌中仅见于Luminal B型及HER2＋型患者。在肺癌中，鳞癌患者生存期与bet家族基因表达无显著相关性，腺癌患者生存与BRD3正相关[风险比95％CI（HR95％CI）：0．22～0．431，与BRDT负相关（HR95％CI：1．08～1．78）。卵巢癌患者预后与bet家族基因表达正相关（BRD2 HR 95％CI：0．70～0．91，BRD3 HR 95％CI：0．76—1．00，BRDT HR 95％CI：0．71～0．93）。结论bet家族基因高表达提示胃癌及部分乳腺癌患者预后不良．但在肺癌及卵巢癌中并不提示生存期下降。

关键词： bet家族胃癌肺癌乳腺癌卵巢癌总生存期

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溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对人乳腺癌细胞的作用

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武汉大学学报（医学版） 2015年第3期36卷 378-381页

作者：师柳谢丛华武汉大学中南医院放化疗科湖北武汉430071

目的:研究bet家族小分子抑制剂JQ1对乳腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响及其作用机制。方法:JQ1作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7,采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,MTT法测定细胞存活曲线,克隆形成法测定细胞抑制率,re... 详细信息

目的:研究bet家族小分子抑制剂JQ1对乳腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响及其作用机制。方法:JQ1作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7,采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,MTT法测定细胞存活曲线,克隆形成法测定细胞抑制率,real-time PCR检测c-MYC的基因表达水平变化。Western blotting方法检测c-MYC及BRD4蛋白表达水平的变化。结果:乳腺癌细胞MDA-MB-231对BRD4抑制剂JQ1敏感,而MCF-7则对JQ1耐受。JQ1可以诱导MDA-MB-231细胞G1期阻滞和凋亡,相同的处理因素作用于MCF-7后,则无明显的细胞周期及凋亡水平的改变。JQ1作用于MDA-MB-231细胞后可以显著下调c-MYC基因及蛋白表达水平,而JQ1作用于耐药的MCF-7后,c-MYC的基因的表达水平升高,而蛋白表达水平无明显改变。结论:bet抑制剂提供了一个潜在的治疗乳腺癌的靶点。

关键词： bet家族 BRD4 JQ1 乳腺癌

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bet蛋白抑制剂JQ1增强索拉非尼对肝癌细胞的增殖抑制研究

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安徽医科大学学报 2020年第8期55卷 1185-1188页

作者：王宇范璐璐安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科合肥230022

目的探讨bet家族小分子抑制剂JQ1联合索拉非尼对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测索拉非尼、JQ1以及JQ1联合索拉非尼作用于人肝癌细胞HepG2和Bel-7402的增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western... 详细信息

目的探讨bet家族小分子抑制剂JQ1联合索拉非尼对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测索拉非尼、JQ1以及JQ1联合索拉非尼作用于人肝癌细胞HepG2和Bel-7402的增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot方法检测c-MYC、Bcl-2、BIM蛋白表达水平的变化。结果与索拉非尼、JQ1单独用药比较,JQ1联合索拉非尼作用于肝癌细胞的增殖抑制率增加,凋亡率也增加,JQ1联合索拉非尼作用于肝癌细胞后可以下调c-MYC、Bcl-2蛋白表达水平并且上调BIM蛋白表达水平。结论一定浓度JQ1能增强索拉非尼对肝癌细胞的增殖抑制及凋亡作用,其作用机制可能与降低c-MYC、Bcl-2表达,上调BIM表达相关。

关键词： bet家族 BRD4 JQ1 索拉非尼肝细胞癌

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bet蛋白抑制剂JQ1增强索拉非尼对肝癌细胞的增殖抑制作用及机制

BET蛋白抑制剂JQ1增强索拉非尼对肝癌细胞的增殖抑制作用及机制

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作者：王宇安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景肝细胞癌是临床上常见的恶性肿瘤,居恶性肿瘤的第5位,在全世界与肿瘤相关的死亡中排第3位。肝细胞癌(HCC)是肝癌的主要组织学亚型,占原发性肝癌的90%,遗传和表观遗传学改变,慢性乙型病毒感染或丙型肝炎病毒感染,黄曲霉毒素暴露... 详细信息

研究背景肝细胞癌是临床上常见的恶性肿瘤,居恶性肿瘤的第5位,在全世界与肿瘤相关的死亡中排第3位。肝细胞癌(HCC)是肝癌的主要组织学亚型,占原发性肝癌的90%,遗传和表观遗传学改变,慢性乙型病毒感染或丙型肝炎病毒感染,黄曲霉毒素暴露,吸烟,肥胖和糖尿病是肝癌的主要危险因素,肝癌预后不良的原因主要是由于高发生率的肿瘤复发和转移。目前,移植是治疗HCC的最有效方法,但由于肿瘤负担或肝功能不良,超过70%的晚期病例不适合移植。晚期不能耐受uuouuuuu手术的患者主要采取化疗,多靶点激酶抑制剂索拉非尼是FDA批准的一线靶向药物,但是也只能为晚期肝癌患者提供2.8个月的生存获益,此外由于不良反应和耐药性,使得其治疗效果尚不满意,因此努力寻找有效的药物和最优化的治疗方法是当前的研究重点。BRD4全称为bromodomain-containing protein 4,即溴结构域蛋白4,属于bet家族成员。bet溴结构域(bromodomain and extra-terminal domain)包含四种蛋白,即BRD2、BRD3、BRD4和BRDT。bet具有保守的模块化结构:包括两段N-末端串联BRD效应模块(BD1和BD2),一段额外的末端基团(ET),几组保守的区域(A,B,SEED区域)和C-末端区域(CTM)。含溴结构域的蛋白质4(BRD4)是bet家族中最重要的成员,并深入参与表观遗传学的调控。BRD4蛋白可以通过其溴结构域结合整个细胞周期中的乙酰化组蛋白,并通过募集不同的转录调节因子,来调节靶基因的表达,另外,BRD4蛋白能够与RNA聚合酶II(Pol II),正向转录延长因子(Positive transcription elongation factor,P-TEFb)结合来调节癌基因(如MYC基因等)的转录过程,从而调控细胞的增殖与凋亡。有研究显示,BRD4的表达失调与肺癌、血液系统肿瘤、乳腺癌、结肠癌以及肝癌等多种癌症疾病的形成有关。这些发现表明,BRD4在肿瘤发生和发展中起重要作用,靶向BRD4可能是一种有前途的癌症治疗策略。JQ1是bet蛋白的小分子抑制剂,可与bet溴结构域乙酰化赖氨酸残基竞争性结合,从而阻断含溴结构域的蛋白质(BRD)的功能。JQ1已经在多种癌症中(如多发性骨髓瘤、急性髓性白血病、乳腺癌等)均观察到有希望的抗增殖作用和临床意义,本研究通过观察JQ1联合索拉非尼对肝癌细胞株的增殖抑制作用,并探讨其可能的机制,为肝癌的临床治疗提供理论基础。目的通过将JQ1与索拉非尼分别作用以及联合作用于Hep G2和Bel-7402肝癌细胞,在不同的时间段观察JQ1是否增强了索拉非尼对Hep G2和Bel-7402的增殖抑制、细胞周期抑制、凋亡抑制以及对凋亡蛋白Bcl-2、BIM和癌基因c-MYC的蛋白的表达影响,来阐明BRD4抑制剂JQ1是否能增加索拉非尼在肝癌细胞的增殖抑制。方法(1)分别使用5个浓度梯度的(0.25μM、0.5μM、1μM、2μM、5μM)的JQ1和5个浓度梯度(1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM)的索拉非尼作用于Hep G2和Bel-7402肝癌细胞,MTT法分别检测不同浓度药物对肝癌细胞的增殖抑制率,绘制浓度-抑制率曲线图,计算出JQ1和索拉非尼分别作用于两种肝癌细胞的IC50值,以便选取后续实验所需药物浓度。(2)分别选用合适浓度的JQ1、索拉非尼以及二者联合作用于Hep G2和Bel-7402肝癌细胞,24h及48h后MTT法检测各组药物对肝癌细胞的增殖抑制率,并且计算出两种药物的联合用药指数CI。(3)JQ1和索拉非尼分别作用于以及二者联合作用于Hep G2和Bel-7402肝癌细胞,流式细胞仪检测各组对肝癌细胞细胞周期的影响。(4)JQ1和索拉非尼分别作用于以及二者联合作用于Hep G2和Bel-7402肝癌细胞,流式细胞仪检测各组对肝癌细胞凋亡率的影响。(5)JQ1和索拉非尼分别作用于以及二者联合作用于Hep G2和Bel-7402肝癌细胞,Western-Blot检测凋亡蛋白Bcl-2,BIM,癌基因c-MYC的表达。结果(1)MTT实验结果显示JQ和索拉非尼药物分别呈剂量依赖性抑制Hep G2和Bel-7402肝癌细胞的增殖。在Hep G2中,JQ1的IC50为3.00±0.95(μmol/L)为,索拉非尼的IC50为11.43±2.60(μmol/L)为;在Bel-7402中,JQ1的IC50为2.60±0.65(μmol/L),索拉非尼的IC50为11.68±2.19(μmol/L)。与JQ1和索拉非尼药物单独作用相比,JQ1与索拉非尼联合作用对细胞增殖抑制率明显增加,JQ1可以增加索拉非尼对肝癌细胞的增殖抑制,联合用药指数CI显示两种药物为协同作用。(2)流式细胞周期实验显示,在Hep G2和Bel-7402中,与JQ1和索拉非尼药物单独作用相

关键词： bet家族 BRD4 JQ1 索拉非尼肝细胞癌

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