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癌变．畸变．突变 2014年第3期26卷 199-203页

作者：陈颖李莹管隽王忠辉贾玉玲周莉孙祖越上海市计划生育科学研究所药理毒理学研究室中国生育调节药物毒理学检测中心上海200032

目的:建立ames波动试验的标准化方法,为其应用于化合物的遗传毒性检测奠定基础。方法:应用4种已知具有遗传毒性的阳性化合物敌克松(Dexon)、叠氮钠(SA)、环磷酰胺(CP)和2-氨基芴(2-AF)进行ames波动试验。比较2种不同的增菌方法和2种指示... 详细信息

目的:建立ames波动试验的标准化方法,为其应用于化合物的遗传毒性检测奠定基础。方法:应用4种已知具有遗传毒性的阳性化合物敌克松(Dexon)、叠氮钠(SA)、环磷酰胺(CP)和2-氨基芴(2-AF)进行ames波动试验。比较2种不同的增菌方法和2种指示剂,建立ames波动试验的方法。Dexon采用0.1、1和10μg/mL,SA采用0.01、0.1、1μg/mL在非活化条件下与相应的溶剂对照进行试验;CP采用10、100、1 000μg/mL,2-AF采用0.1、1和10μg/mL在活化条件下与相应的溶剂对照进行试验;观察记录阳性孔数,根据情况调整阳性化合物的剂量,直到经统计分析后阳性孔数与溶剂对照组相比,差异有统计学意义(P试验3次,保证试验系统稳定可靠。结果:确定了ames波动试验4种阳性化合物的剂量。在不加S9代谢活化系统的条件下,Dexon 3μg/mL和SA 0.05μg/mL,3块平行96孔板与溶剂对照组相比差异均有统计学意义(P试验方法:包括对受试物剂量的标准化,改进了增菌培养的方法,并确定了指示剂。结论:建立了ames波动试验方法,对已知阳性化合物测定结果的稳定性良好,并在研究中优化了实验条件。

关键词： ames波动试验诱变试验标准化遗传毒性

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应用ames波动试验比较4种马兜铃酸组分的致突变作用

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癌变．畸变．突变 2016年第5期28卷 398-402页

作者：曹易懿刘倩奚晶马雷雷刘晓健栾洋上海交通大学医学院虹桥国际医学研究院/公共卫生学院上海200025 上海诗丹德生物技术有限公司上海201203 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032

目的:比较4种马兜铃酸组分(AA-I、AA-II、AA-III和AA-IV)的致突变作用,初步考察其毒性作用与分子结构之间的关系。方法:应用鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100菌株对马兜铃酸4个组分采用ames波动试验方法在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件... 详细信息

目的:比较4种马兜铃酸组分(AA-I、AA-II、AA-III和AA-IV)的致突变作用,初步考察其毒性作用与分子结构之间的关系。方法:应用鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100菌株对马兜铃酸4个组分采用ames波动试验方法在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下进行细菌回复突变试验。结果:试验结果显示,AA-I与AA-II在-S9和+S9条件下对TA98和/或TA100菌株的回复突变孔数与阴性对照组相比明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。AA-II的回复突变孔数呈剂量依赖性增加,且在多个剂量下回复突变孔数超过基线值的倍数大于AA-I。AA-III和AA-IV对2株菌株的回复突变孔数未见明显增加,但AA-IV在+S9条件下对TA100菌株在各个剂量下的回复突变孔数呈剂量依赖性增加。结论:AA-I和AA-II均显示出较强的致突变作用,且AA-II致突变作用强于AA-I。AA-IV在+S9条件下可能有潜在的致突变作用;AA-III对2株菌株均未见致突变作用。4种马兜铃酸组分的致突变毒性程度不同,认为可能与其化学结构及代谢特征不同有关。

关键词：马兜铃酸 ames波动试验遗传毒性致突变

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一套不同遗传终点短期遗传毒性试验组合方法的建立

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期 575-576页

作者：施畅马华智石富江孙艳丽于永生王全军丁日高军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心

目的在本中心建立ames波动试验、CHL细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(MLA)方法,作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物的诱变性能力。方法 ames波动试验:以TA100沙门氏菌作为试验菌株进行96孔板的ames波动试验,非活化... 详细信息

目的在本中心建立ames波动试验、CHL细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(MLA)方法,作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物的诱变性能力。方法 ames波动试验:以TA100沙门氏菌作为试验菌株进行96孔板的ames波动试验,非活化条件下以敌克松(1.6,8.0,40.0和200.0μ***-1)和叠氮钠(0.01,0.05,0.25和1.25μ***-1)、活化条件下以环磷酰胺(4.0,20.0,100.0和500.0μ***-1)染毒处理,并设溶媒对照,培养72 h后加溴麝香草酚蓝,计数阳性孔数并进行卡方检验。CHL细胞体外微核试验:CHL细胞培养至对数增长期,非活化条件下用丝裂霉素C(0.02,0.2,2.0和20.0μ***-1)分别染毒处理4和24 h,活化条件下用环磷酰胺(0.2,2.0,20.0和200.0μ***-1)染毒4 h,另设空白对照。收获细胞制片、染色后油镜下计数含微核的细胞数(2000个细胞中),并进行卡方检验。小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验:小鼠淋巴瘤细胞经清除自发突变后,非活化条件下用丝裂霉素C(0.25,0.5,1.0和2.0μ***-1)、活化条件下用环磷酰胺(1.0,2.0,3.0和4.0μ***-1)分别染毒处理3h,同时设溶剂对照组,按照MLA标准操作规程制备平板,计算相对存活率(RS)、相对悬浮增长率(RSG)、相对总增长率(RTG)、平板效率PE0、PE2、突变率(MF)、小集落比例(SC)。结果 ames波动试验:叠氮钠(-S9)各浓度下阳性结果显著(P6.63),且有明显量效关系;敌克松(-S9)在高浓度(200.0μ***-1)下因对TA100有较强毒性导致阳性孔明显减少,其余各浓度也均获得显著阳性结果(P6.63);环磷酰胺(+S9)各浓度下阳性结果显著(P6.63),且有明显量效关系。CHL细胞体外微核试验:丝裂霉素C(4 h,24 h,-S9)和环磷酰胺(4 h,+S9)各浓度均引起微核率显著升高(P6.63),且量效关系明显。小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验:丝裂霉素C(4 h,24 h,-S9)和环磷酰胺(4 h,+S9)各浓度下均引起L5178Y3.7.2C-tk+/-细胞的接种效率、相对存活率、相对悬浮增长率和总相对增长率呈剂量依赖性下降,诱发的突变率MF呈剂量依赖性升高,高出溶剂对照的2倍以上。结论此三种短期遗传毒性试验方法,所用指示生物包括原核生物和真核生物,采用代谢活化和非代谢活化两种条件,检出的遗传学作用终点从点突变到大的染色体损伤。三者组合使用可互为补充、相互验证,提高检出受试品遗传毒性的准确性,有望得到进一步推广应用,在食品、药品、环境等安全性检测中发挥重要作用。

关键词： ames波动试验体外微核试验小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验

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Z24系列化合物毒性的优化筛选

Z24系列化合物毒性的优化筛选

作者：秦爱平中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

新药研发是一项高投入、高回报、高风险的产业。在整个新药研发过程中，毒理学研究和临床试验是最主要和最重要的两大组成部分，其中毒理学研究几乎贯穿于新药研发的整个过程。为了降低新药研发费用，加快研发进程，应在药物研发早期尽... 详细信息

新药研发是一项高投入、高回报、高风险的产业。在整个新药研发过程中，毒理学研究和临床试验是最主要和最重要的两大组成部分，其中毒理学研究几乎贯穿于新药研发的整个过程。为了降低新药研发费用，加快研发进程，应在药物研发早期尽早匹配进行相关毒理学研究。发现毒理学研究即在新药研发早期，对新化学实体进行毒性筛选，及早发现和淘汰因毒性问题不适于继续开发的化合物，指导合成更安全的同类化合物，帮助选择候选新药。加入WTO后，随着我国新药研发由仿制到创新的重大转变，在新药研发过程中，研究和建立适合我国国情的发现毒理学体系势在必行，而短期毒性优化筛选系统是发现毒理学的主要内容之一。鉴于此，本研究的目的之一在于建立适用于对新化学实体进行全面筛选的短期毒性优化筛选系统，为今后各类候选新药的早期发现提供技术平台。本系统包括对新化学实体进行一般毒性和特殊毒性的筛选与检测。一般毒性包括急性毒性和细胞毒性，特殊毒性包括遗传毒性和生殖毒性。急性毒性以上下法检测;细胞毒性以MTT比色法和长期蛋白合成抑制试验检测;遗传毒性以ames波动试验，SOS显色试验，双核细胞微核试验检测;生殖毒性以中脑细胞微团培养试验检测。以Z24为代表的5种新化学实体(编号为Z24，SU5416，L1，L3，L4)是基于Bcl-2蛋白三维结构、通过计算机辅助设计的Bcl-2蛋白拮抗剂，其作用机理是通过拮抗Bcl-2蛋白的功能来诱导肿瘤细胞的凋亡，因而有可能成为一种全新机制的抗癌新药。本研究的目的之二在于用建立的短期毒性优化筛选系统对Z24系列化合物进行毒性优化筛选，为从Z24系列化合物中选择出的具有良好开发前景的候选新药提供毒理学实验依据。现将主要研究结果报道如下：一般毒性实验结果 1．急性毒性试验：本研究将上下法引入新化学实体急性毒性的筛选，利用该方法实验动物、试剂消耗量少，且能测得受试物LD值等优点，进行了Z24系列化合物急性毒性的检测，其结果为：Z24，SU5416，L1，L3，L4的LD值分别为669.2，＞2000，532.0，232.0，627.7mg/kg。上述结果表明除化合物L3为中等毒性物质外， 224系列化合物毒性的优化筛选中文摘要其他4种化合物均为低毒物质。在低毒物质中，224的毒性最低。 2.细胞毒性试验:在新化学实体合成之后，为了使用微量样品就能及早地了解它们的细胞毒性，本研究采用消耗受试物较少的M竹比色法检测了224系列化合物对CHL细胞的细胞毒性。结果表明:224，SU5416，Ll，L3，L4的ICS。值分别为0.072、0.064、0.062、0.036、0.019mM。结果显示:224的细胞毒性最小， L4最大。在双核细胞微核试验中，用细胞计数法检测了224系列化合物对CHL 的细胞毒性，其结果同样表明224的细胞毒性最小。在中脑细胞微团培养试验中，用中性红比色法检测了224系列化合物对大鼠胚胎中脑细胞的细胞毒性，其结果同样显示:224对胚胎中脑神经细胞的毒性最小，L4最大。为了探讨和预测化合物的长期毒性，本研究以体外长期毒性实验代替体内长期毒性实验检，采用长期蛋白合成抑制试验检测了毒性较小的224对HeP GZ细胞的长期毒性，结果表明: 在224染毒6w过程中，HePGZ细胞数量逐渐减少，提示224对Hep GZ细胞的毒性逐渐增强。224染毒6w后，其24h半数蛋白抑制浓度(P 15024h一)低于染毒前的24h半数蛋白抑制浓度(P巧飞4启，说明HePGZ细胞对224的敏感性进一步升高。特殊毒性实验结果 1.遗传毒性试验:本研究设计了一套涵盖不同毒性作用终点的遗传毒性试验方法，并对224系列化合物的遗传毒性进行了检测。首先利用ames波动试验检测了224系列化合物对鼠伤寒沙门氏菌的诱变性，其结果显示在59活化条件下，在测试浓度范围内，5种化合物均未显示有致突变性;无59活化条件下，除224 外，其它4种化合物均显示了致突变性。本研究同时采用Ame，试验检测了224 系列化合物的诱变性，ames试验仅检测到化合物Ll有致突变性，上述结果提示 ames波动试验比ames试验更敏感，因而适用于新化学实体弱诱变性的初筛。 505显色试验能快速检测受试物所引起的大肠杆菌DNA原发性损伤，其结果显示:无论有无59活化系统，5种化合物全部为阴性结果，即未引起大肠杆菌DNA 原发损伤作用。双核细胞微核试验结果显示:在s9活化条件下，5种化合物的检测结果均为阴性;无59活化时，除224外，其他4种化合物在测试浓度范围内，均可诱发CHL细胞微核率的显著增加，并有剂量反应关系。上述遗传毒性实验结果提示:SU5416，Ll，L3，L44种化合物经s9代谢活化后，未显示有遗传毒性;第2页共6

关键词：发现毒理学 Z24系列化合物 ames波动试验 SOS显色试验双核细胞微核试验 MTT比色法长期蛋白合成抑制试验上下法中脑细胞微团培养试验

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多遗传学终点的遗传毒性试验组合的建立

癌变．畸变．突变 2013年第6期25卷 465-469页

作者：马华智施畅石富江孙艳丽于永生吴纯启王全军丁日高军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心北京100850

目的:建立ames波动试验、中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(MLA)方法,探讨其作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物诱变性的可能性。方法:在ames波动试验中,用TA100沙门氏菌进行96孔板的ames波动试... 详细信息

目的:建立ames波动试验、中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(MLA)方法,探讨其作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物诱变性的可能性。方法:在ames波动试验中,用TA100沙门氏菌进行96孔板的ames波动试验,非活化条件下以叠氮钠(SA)、活化条件下以环磷酰胺(CP)染毒处理,计数阳性孔数并进行卡方检验。在CHL细胞体外微核试验中,非活化条件下用丝裂霉素C(MMC)分别染毒处理4和24 h,活化条件下用CP染毒4 h,计数2 000个细胞中含微核的细胞数,并进行卡方检验。在MLA中,小鼠淋巴瘤细胞经清除自发突变后,非活化条件下用MMC、活化条件下用CP分别染毒处理3 h,计算相对存活率(RS)、相对悬浮增长率(RSG)、相对总增长率(RTG)、平板效率PE0、PE2、突变率(MF)、小集落比例(SC)。2结果:ames波动试验中SA和CP在各自试验条件下阳性孔数均较对照组显著增加(χ>6.63,试验中,MMC和CP在各自试验条件下均引起微核率显著升高(χ>6.63,P试验条件下均引起L5178Y 3.7.2C-tk细胞的PE、RS、RSG和RTG呈剂量依赖性下降,MF呈剂量依赖性升高,高出溶剂对照的2倍以上。结论:此3种短期遗传毒性试验方法可互为补充、相互验证,其组合应用可提高检出化合物遗传毒性的准确性,有望得到进一步推广应用。

关键词： ames波动试验体外微核试验小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验

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一套不同遗传终点短期遗传毒性试验组合方法的建立

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一套不同遗传终点短期遗传毒性试验组合方法的建立

一套不同遗传终点短期遗传毒性试验组合方法的建立

作者：施畅马华智石富江孙艳丽于永生王全军丁日高军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心

目的在本中心建立ames波动试验、CHL细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(MLA)方法,作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物的诱变性能力。方法 ames波动试验:以TA100沙门氏菌作为试验菌株进行96孔板的ames波动试验,非活化条件下以敌克松(1.6,8.0,40.0和200.0μg·ml~(-1))和叠氮钠(0.01,0.05,0.25和1.25μg·ml~(-1))、活化条件下以环磷酰胺(4.0,20.0,100.0和500.0μg·ml~(-1))染毒处理,并设溶媒对照,培养72 h后加溴麝香草酚蓝,计数阳性孔数并进行卡方检验。CHL细胞体外微核试验:CHL细胞培养至对数增长期,非活化条件下用丝裂霉素C(0.02,0.2,2.0和20.0μg·ml~(-1))分别染毒处理4和24 h,活化条件下用环磷酰胺(0.2,2.0,20.0和200.0μg·ml~(-1))染毒4 h,另设空白对照。收获细胞制片、染色后油镜下计数含微核的细胞数(2000个细胞中),并进行卡方检验。小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验:小鼠淋巴瘤细胞经清除自发突变后,非活化条件下用丝裂霉素C(0.25,0.5,1.0和2.0μg·ml~(-1))、活化条件下用环磷酰胺(1.0,2.0,3.0和4.0μg·ml~(-1))分别染毒处理3h,同时设溶剂对照组,按照MLA标准操作规程制备平板,计算相对存活率(RS)、相对悬浮增长率(RSG)、相对总增长率(RTG)、平板效率PE0、PE2、突变率(MF)、小集落比例(SC)。结果 ames波动试验:叠氮钠(-S9)各浓度下阳性结果显著(P6.63),且有明显量效关系;敌克松(-S9)在高浓度(200.0μg·ml~(-1))下因对TA100有较强毒性导致阳性孔明显减少,其余各浓度也均获得显著阳性结果(P6.63);环磷酰胺(+S9)各浓度下阳性结果显著(P6.63),且有明显量效关系。CHL细胞体外微核试验:丝裂霉素C(4 h,24 h,-S9)和环磷酰胺(4 h,+S9)各浓度均引起微核率显著升高(P6.63),且量效关系明显。小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验:丝裂霉素C(4 h,24 h,-S9)和环磷酰胺(4 h,+S9)各浓度下均引起L5178Y3.7.2C-tk~(+/-)细胞的接种效率、相对存活率、相对悬浮增长率和总相对增长率呈剂量依赖性下降,诱发的突变率MF呈剂量依赖性升高,高出溶剂对照的2倍以上。结论此三种短期遗传毒性试验方法,所用指示生物包括原核生物和真核生物,采用代谢活化和非代谢活化两种条件,检出的遗传学作用终点从点突变到大的染色体损伤。三者组合使用可互为补充、相互验证,提高检出受试品遗传毒性的准确性,有望得到进一步推广应用,在食品、药品、环境等安全性检测中发挥重要作用。

关键词： ames波动试验体外微核试验小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验

来源： cnki会议评论

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