一套不同遗传终点短期遗传毒性试验组合方法的建立

作     者：施畅 马华智 石富江 孙艳丽 于永生 王全军 丁日高 

作者机构：军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心 

出 版 物：《中国药理学与毒理学杂志》 (Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology)

年 卷 期：2013年第3期

页      面：575-576页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：重大新药创制科技重大专项(2013ZX09302303,2012ZX09301-003-008) 国家自然基金项目(81001254) 

主　　题：Ames波动试验 体外微核试验 小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验 

摘      要：目的在本中心建立Ames波动试验、CHL细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(MLA)方法,作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物的诱变性能力。方法 Ames波动试验:以TA100沙门氏菌作为试验菌株进行96孔板的Ames波动试验,非活化条件下以敌克松(1.6,8.0,40.0和200.0μ***-1)和叠氮钠(0.01,0.05,0.25和1.25μ***-1)、活化条件下以环磷酰胺(4.0,20.0,100.0和500.0μ***-1)染毒处理,并设溶媒对照,培养72 h后加溴麝香草酚蓝,计数阳性孔数并进行卡方检验。CHL细胞体外微核试验:CHL细胞培养至对数增长期,非活化条件下用丝裂霉素C(0.02,0.2,2.0和20.0μ***-1)分别染毒处理4和24 h,活化条件下用环磷酰胺(0.2,2.0,20.0和200.0μ***-1)染毒4 h,另设空白对照。收获细胞制片、染色后油镜下计数含微核的细胞数(2000个细胞中),并进行卡方检验。小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验:小鼠淋巴瘤细胞经清除自发突变后,非活化条件下用丝裂霉素C(0.25,0.5,1.0和2.0μ***-1)、活化条件下用环磷酰胺(1.0,2.0,3.0和4.0μ***-1)分别染毒处理3h,同时设溶剂对照组,按照MLA标准操作规程制备平板,计算相对存活率(RS)、相对悬浮增长率(RSG)、相对总增长率(RTG)、平板效率PE0、PE2、突变率(MF)、小集落比例(SC)。结果 Ames波动试验:叠氮钠(-S9)各浓度下阳性结果显著(P6.63),且有明显量效关系;敌克松(-S9)在高浓度(200.0μ***-1)下因对TA100有较强毒性导致阳性孔明显减少,其余各浓度也均获得显著阳性结果(P6.63);环磷酰胺(+S9)各浓度下阳性结果显著(P6.63),且有明显量效关系。CHL细胞体外微核试验:丝裂霉素C(4 h,24 h,-S9)和环磷酰胺(4 h,+S9)各浓度均引起微核率显著升高(P6.63),且量效关系明显。小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验:丝裂霉素C(4 h,24 h,-S9)和环磷酰胺(4 h,+S9)各浓度下均引起L5178Y3.7.2C-tk+/-细胞的接种效率、相对存活率、相对悬浮增长率和总相对增长率呈剂量依赖性下降,诱发的突变率MF呈剂量依赖性升高,高出溶剂对照的2倍以上。结论此三种短期遗传毒性试验方法,所用指示生物包括原核生物和真核生物,采用代谢活化和非代谢活化两种条件,检出的遗传学作用终点从点突变到大的染色体损伤。三者组合使用可互为补充、相互验证,提高检出受试品遗传毒性的准确性,有望得到进一步推广应用,在食品、药品、环境等安全性检测中发挥重要作用。