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自噬相关基因Beclin1和atg5在宫颈癌中的表达及临床意义

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中国妇幼保健 2020年第7期35卷 1328-1330页

作者：伍桂荣崔彬姜汉国廉江市人民医院广东廉江524400

目的探讨良、恶性宫颈癌及正常宫颈组织中自噬相关基因Beclin1和atg5的表达情况,分析其在宫颈癌病程发生发展中的作用。方法将广东省廉江市人民医院收治的91例患者分为宫颈癌组、上皮内瘤变组和正常宫颈组,分别取各组宫颈组织并通过west... 详细信息

目的探讨良、恶性宫颈癌及正常宫颈组织中自噬相关基因Beclin1和atg5的表达情况,分析其在宫颈癌病程发生发展中的作用。方法将广东省廉江市人民医院收治的91例患者分为宫颈癌组、上皮内瘤变组和正常宫颈组,分别取各组宫颈组织并通过western blot、免疫组化及PCR法检测Beclin1和atg5的表达情况。结果Beclin1和atg5在宫颈癌组中mRNA和蛋白表达水平均显著低于正常宫颈组和上皮内瘤变组。结论宫颈癌组织中Beclin1和atg5表达较正常宫颈组织显著下降,提示宫颈癌的发生发展可能与自噬相关基因Beclin1和atg5的活性降低有关。

关键词：宫颈癌自噬 Beclin1 atg5

自噬相关基因atg5的原核表达及多克隆抗体制备

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生物技术通讯 2009年第4期20卷 482-484页

作者：赵勇栗文彬师长宏张彩勤缪珊白冰张海第四军医大学实验动物中心陕西西安710032 第四军医大学药物研究所陕西西安710032

目的:克隆自噬相关基因atg5,在大肠杆菌中重组表达后制备抗atg5多克隆抗体。方法:用RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆atg5基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白;目... 详细信息

目的:克隆自噬相关基因atg5,在大肠杆菌中重组表达后制备抗atg5多克隆抗体。方法:用RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆atg5基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白;目的蛋白纯化后,以100μg/kg纯化的蛋白免疫新西兰兔,制备抗atg5多克隆抗体;提取RAW264.7细胞总蛋白,以制备的抗atg5多抗进行Western blot反应,检测多抗的生物学活性。结果:克隆了atg5基因,在大肠杆菌中表达了重组atg5,SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子质量与预期值一致,Western blot结果证明该产物具有较高的生物学活性,纯化蛋白免疫动物后制备了抗atg5多克隆抗体。结论:在大肠杆菌中表达了重组atg5,制备了抗atg5多克隆抗体,为自噬的检测和研究提供了工具。

关键词： atg5 原核表达自噬多克隆抗体

自噬相关蛋白atg5和LC3在婴幼儿血管瘤中的表达

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中国美容整形外科杂志 2016年第6期27卷 343-346页

作者：米萱孙峰仇利红石定余州杨力第四军医大学西京医院全军整形外科研究所陕西西安710032

目的研究自噬相关蛋白在婴幼儿血管瘤中的表达,初探自噬在婴幼儿血管瘤发生发展中的作用。方法根据患儿临床表现判断其瘤体处于增殖期还是消退期;将石蜡包埋的婴幼儿血管瘤(IH)标本经HE染色后,于光学显微镜下观察不同时期IH内血管内皮... 详细信息

目的研究自噬相关蛋白在婴幼儿血管瘤中的表达,初探自噬在婴幼儿血管瘤发生发展中的作用。方法根据患儿临床表现判断其瘤体处于增殖期还是消退期;将石蜡包埋的婴幼儿血管瘤(IH)标本经HE染色后,于光学显微镜下观察不同时期IH内血管内皮细胞的增生程度、形态;切片经TUNEL法染色后,根据标记凋亡细胞计数比较不同时期IH凋亡率差异;免疫组化染色观察不同时期IH中atg5的表达水平差异;免疫荧光标记法分析不同时期IH中LC3-Ⅱ的表达水平变化。结果 Tunel凋亡检测显示,消退期IH细胞凋亡率明显高于增殖期IH(Patg5的表达水平高于消退期IH(P<0.01);免疫荧光显示增殖期IH中的LC3-Ⅱ阳性细胞多于消退期IH。结论消退期IH凋亡细胞比增殖期明显增多;增殖期自噬活性较强,消退期自噬下调;自噬的下调有可能促进增殖期IH向消退期转化。

关键词：婴幼儿血管瘤凋亡自噬增殖期消退期 atg5 LC3-Ⅱ 自噬相关蛋白

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湖南中医药大学学报 2016年第7期36卷 20-24页

作者：彭霞黄政德成细华任婷孙彦波饶春梅湖南中医药大学湖南长沙410208

目的探讨加味丹参饮预处理是否通过调节Beclin-1和atg5表达调控自噬抗缺血再灌注损伤大鼠心肌。方法将60只健康SD大鼠随机分为空白对照(control group,C)组、假手术(sham,S)组、缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)组、IRI... 详细信息

目的探讨加味丹参饮预处理是否通过调节Beclin-1和atg5表达调控自噬抗缺血再灌注损伤大鼠心肌。方法将60只健康SD大鼠随机分为空白对照(control group,C)组、假手术(sham,S)组、缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)组、IRI+加味丹参饮(Jiawei Danshen Yin,JDY)组、IRI+JDY+自噬抑制剂(inhibitor,I)组,每组12只。通过结扎-放松大鼠左冠状动脉前降支制备心肌IRI模型。通过氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察心肌梗死面积率;在透射电镜下观察自噬泡;采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测心肌Beclin-1和atg5 m RNA表达;采用蛋白质印迹(western blot)法检测心肌Beclin-1蛋白表达变化。结果 IRI+JDY组心肌梗死面积率显著低于IRI组及IRI+JDY+I组(Patg5 m RNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较SG组显著升高(Patg5 m RNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较IRI组显著降低(Patg5 m RNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较IRI+JDY+I组显著升高(Patg5表达适度,调控缺血再灌注心肌细胞发生适度自噬,从而发挥细胞保护作用。

关键词：加味丹参饮心肌缺血再灌注自噬 Beclin-1 atg5 丹参檀香川芎

上皮性卵巢癌组织中atg5、Beclin1与P53的表达及相关性研究

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河南医学研究 2015年第10期24卷 1-4页

作者：曹蒙赵书君郭欢欢刘星烁韩会会张敏李红雨郑州大学第三附属医院妇产科河南郑州450052

目的检测自噬相关基因atg5、Beclin1与凋亡相关基因P53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达情况,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性及意义。方法应用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测25例正常卵巢、25例良性卵巢肿瘤及34例... 详细信息

目的检测自噬相关基因atg5、Beclin1与凋亡相关基因P53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达情况,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性及意义。方法应用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测25例正常卵巢、25例良性卵巢肿瘤及34例上皮性卵巢癌组织中atg5、Beclin1、P53蛋白及mRNA的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果 1atg5、Beclin1的表达主要在细胞质内,P53主要表达在胞核内。atg5、Beclin1在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中的表达阳性率两两比较,差异均有统计学意义(P5)。P53在卵巢癌组织中的表达阳性率与良性卵巢组织、正常卵巢组织相比,差异有统计学意义(P0.05)。不同临床分期、病理分期的卵巢癌组织中atg5、Beclin1及P53的表达比较,差异均有统计学意义(P5)。Spearman相关性分析显示,上皮性卵巢癌组织中atg5与Beclin1蛋白表达呈正相关,atg5与P53、Beclin1与P53蛋白表达均呈负相关(P5)。2经RT-PCR检测,上皮性卵巢癌组织中atg5、Beclin1的表达低于良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织,良性卵巢组织低于正常卵巢组织,差异均具有统计学意义(P5)。上皮性卵巢癌组织中P53的表达高于良性卵巢组织及正常组织(P5),但良性卵巢组织与正常卵巢组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论上皮性卵巢癌的发病、进展可能与自噬相关基因Beclin1和atg5自噬活性的抑制有关;自噬相关基因atg5、Beclin1与凋亡相关基因P53在上皮性卵巢癌的发生发展中起拮抗作用,对其联合检测有利于了解和判断上皮性卵巢癌的进展程度、预后情况及指导治疗。

关键词：上皮性卵巢癌 atg5 Beclin1 P53 免疫组化 RT-PCR 自噬凋亡

自噬相关基因atg5在嗜热四膜虫细胞核程序性降解中的功能分析

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自噬相关基因ATG5在嗜热四膜虫细胞核程序性降解中的功能分析

外周血Beclin-1、atg5表达与老年脓毒症患者预后的相关性

中国生物化学与分子生物学会2019年全国学术会议暨学会...

作者：薄涛刘亚许静王伟化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所

自噬是真核生物中一种必不可少且高度保守的细胞内组分降解过程,通过溶酶体机制响应营养饥饿或其他恶劣环境以维持细胞稳态。根据自噬对底物是否具有选择性,可分为非选择自噬和选择性自噬。嗜热四膜虫有性生殖过程中亲本大核程序性降解(... 详细信息

自噬是真核生物中一种必不可少且高度保守的细胞内组分降解过程,通过溶酶体机制响应营养饥饿或其他恶劣环境以维持细胞稳态。根据自噬对底物是否具有选择性,可分为非选择自噬和选择性自噬。嗜热四膜虫有性生殖过程中亲本大核程序性降解(programmed nuclear death,PND)是一种独特的细胞核选择性自噬过程。自噬相关蛋白atg8,Vps34是PND的重要调控因子。然而,其他自噬相关蛋白如何参与调控PND的分子机制还未知。通过同源序列比对,嗜热四膜虫中存在自噬相关蛋白atg5,基因表达谱分析atg5在有性生殖时期10 h有表达峰值,蛋白相互作用预测atg5与atg8-2存在相互作用,暗示atg5可能参与调控PND过程。间接免疫荧光定位分析表明atg5在anlagen之前定位于细胞质中,anlagen时期atg5定位于亲本大核上。经Cd2+诱导高效表达后,不影响四膜虫核发育形态以及亲本大核的正常酸化,但延缓了亲本大核的凝缩降解。anlagen时期,敲减atg5阻碍了亲本大核向细胞底部的迁移,同时亲本大核无法正常凝缩降解,无法正常酸化,有性生殖36 h时仍存在未降解的亲本大核。上述结果表明atg5参与调控亲本大核PND过程,与亲本大核向细胞底端的移动以及酸化相关。

关键词：自噬四膜虫亲本大核程序性降解 atg5

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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重庆医学 2022年第6期51卷 949-953,958页

作者：王佳高恒波林雪容罗肖宇陈丽君韩树池河北北方学院附属第一医院急诊科河北张家口075000 河北医科大学第二医院急诊科石家庄050000

目的研究外周血自噬相关蛋白Beclin-1、自噬相关基因5(atg5)表达与老年脓毒症患者预后的相关性。方法选择2015年3月至2019年10月河北北方学院附属第一医院收治的136例老年脓毒症患者作为脓毒症组,选取同期一般资料匹配的55例受试者作为... 详细信息

目的研究外周血自噬相关蛋白Beclin-1、自噬相关基因5(atg5)表达与老年脓毒症患者预后的相关性。方法选择2015年3月至2019年10月河北北方学院附属第一医院收治的136例老年脓毒症患者作为脓毒症组,选取同期一般资料匹配的55例受试者作为对照组,检测外周血Beclin-1、atg5的表达水平。根据脓毒症组28 d预后情况分为存活和死亡患者,比较存活和死亡患者临床资料的差异并采用COX回归模型分析预后的影响因素,采用Kaplan-Meier曲线和受试者工作特征(ROC)曲线分析Beclin-1、atg5对预后的评估价值。结果脓毒症组外周血Beclin-1、atg5的表达水平低于对照组,且死亡患者外周血Beclin-1、atg5的表达水平低于存活患者(P5)。经COX回归分析,中性粒细胞/淋巴细胞比值、单核细胞/淋巴细胞比值、Beclin-1、atg5、急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)是脓毒症组患者预后的影响因素(P5);经Kaplan-Meier曲线和ROC曲线分析,Beclin-1、atg5对脓毒症组患者的预后具有评估价值;在logistic模型中生成Beclin-1联合atg5评估预后的新指标,该指标预测预后的曲线下面积为0.672,优于单一指标。结论老年脓毒症患者外周血Beclin-1、atg5水平降低且与预后恶化有关,Beclin-1联合atg5用于预后评估的价值优于单一指标。

关键词：老年人脓毒症自噬 Beclin-1 atg5 预后

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atg5介导内皮细胞外泌体调控平滑肌细胞增殖

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安徽医科大学学报 2020年第11期55卷 1718-1724页

作者：李征远胡培周琳单勐也郭兴荣湖北医药学院生物医药研究院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室十堰442000 湖北医药学院附属太和医院生命科学研究所十堰442000 湖北医药学院附属太和医院检验科十堰442000

目的探究atg5介导人脐静脉内皮细胞外泌体对小鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法利用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注消化法获得原代人脐静脉内皮细胞;利用组织块贴壁法分离原代小鼠胸主动脉平滑肌细胞;利用超速离心法提取内皮细胞外泌体;利用... 详细信息

目的探究atg5介导人脐静脉内皮细胞外泌体对小鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法利用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注消化法获得原代人脐静脉内皮细胞;利用组织块贴壁法分离原代小鼠胸主动脉平滑肌细胞;利用超速离心法提取内皮细胞外泌体;利用共聚焦高内涵成像分析仪示踪平滑肌细胞摄取内皮细胞外泌体;利用siRNA干扰内皮细胞atg5蛋白表达;利用高内涵DPC成像模式分析平滑肌细胞增殖能力。结果成功得到活性好、纯度高的人脐静脉内皮细胞和小鼠胸主动脉平滑肌细胞。超速离心法获得的内皮细胞外泌体经免疫印迹鉴定,呈Hsp70、TSG101、CD9和CD63阳性。高内涵示踪结果显示平滑肌细胞在共培养30 min后开始摄取内皮细胞外泌体,共培养4 h后,平滑肌细胞摄取的外泌体明显增多。高内涵监测结果显示,与对照组比较,atg5干扰组内皮细胞分泌的外泌体在浓度为200μg/ml时能够明显抑制平滑肌细胞的增殖。结论atg5可通过介导内皮细胞外泌体调控平滑肌细胞增殖。

关键词：人脐静脉内皮细胞小鼠胸主动脉平滑肌细胞外泌体 atg5

Airway epithelial atg5 suppresses asthmatic inflammation in mice

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China Medical Abstracts(Internal Medicine) 2019年第1期36卷 33-33页

作者：王绍斌 Dept Respir & Critical Care Med 2nd Affil HospZhejiang Univ Med Sch

Objective To explore the role and mechanisms of airway epithelium-localized atg5 in asthmatic airway injury and inflammation. Methods CC10-rtTA/( tetO )7- cre-atg5^f/f ( atg5^△/△) mice and atg5^+/+ mice were randomly assigned to control and asthma groups, respectively. Mice of the asthma group were treated with house dust mite extract ( HDM ).

关键词： atg5 HDM