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非小细胞肺癌患者抑癌基因aspp1，aspp2表达的研究

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非小细胞肺癌患者抑癌基因ASPP1，ASPP2表达的研究

非小细胞肺癌患者抑癌基因aspp1，aspp2表达的研究

2008年中国病理生理学会第十一届肿瘤和第十二届免疫专...

作者：李士军郭连英施广霞大连医科大学病理生理教研室

＜正＞[目的]研究非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者癌组织和外周血单个核细胞aspp1和aspp2 mRNA表达情况以探讨aspp家族的表达与NSCLC发生及治疗反应的关系。

关键词：非小细胞肺癌 aspp1 aspp2 实时定量PCR检测

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非小细胞肺癌患者抑癌基因ASPP1，ASPP2表达的研究

aspp1、aspp2、iaspp在乳房及乳房外Paget病中的表达及临床意义

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：李士军张明芳张明霞肖晓光施广霞大连医科大学附属第一医院

目的建立检测抑癌基因aspp1和aspp2 mRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,并应用该方法探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织和血液aspp1,aspp2 mRNA表达的意义。方法分离对照组和患者组血液标本单个核细胞,提取组织和单个核细胞标本的tot... 详细信息

目的建立检测抑癌基因aspp1和aspp2 mRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,并应用该方法探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织和血液aspp1,aspp2 mRNA表达的意义。方法分离对照组和患者组血液标本单个核细胞,提取组织和单个核细胞标本的total RNA,应用实时荧光定量RT-PCR的方法检测目的基因表达量。结果构建定量用标准品,得到较好的扩增曲线和标准曲线,并且融解曲线峰型单一,具有良好的稳定性与重复性。NSCLC患者肺组织标本与血液标本aspp1、aspp2表达比较均具有差异(P均aspp1、aspp2在肺组织和相应血液中mRNA表达不同,具有组织分布不同的特点。患者血液与对照组比较,NSCLC发生时两基因的表达均下降,血液中aspp1和aspp2 mRNA的表达可以反映NSCLC疾病的状况,表明aspp家族的表达与肿瘤的发生发展密切相关。

关键词： aspp1 aspp2 非小细胞肺癌实时荧光定量PCR

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ASPP1、ASPP2、iASPP在乳房及乳房外Paget病中的表达及临床意义

作者：王皓敏大连医科大学

学位级别：硕士

背景Paget病（Paget`s disease,PD）在皮肤恶性肿瘤中较为少见,常表现为红斑、糜烂破溃、瘙痒等湿疹样症状,又称湿疹样癌,临床上分为乳房Paget病（mammary Paget`s disease,MPD）和乳房外Paget病（extramammary Paget`s disease,EMPD）[1]。P53是与人类相关性最多的肿瘤抑制蛋白,其主要作用是诱导细胞的凋亡和细胞生长的停滞。P53凋亡刺激蛋白基因家族（apoptosis stimulating proteins of P53,aspp）包括aspp1（apoptosis stimulating proteins of P531）、aspp2（apoptosis stimulating proteins of P532）以及iaspp（inhibitory member of the aspp family）,均能与P53特异性结合促进或阻止其促凋亡作用[2],因此推测aspp1、aspp2以及iaspp的异常表达可能与多种疾病,特别是肿瘤的发生与发展有关。迄今为止,aspp家族在EMPD及MPD中的表达情况国内外均未见报道。目的用免疫组化SP法检测在EMPD和MPD中aspp1、aspp2以及iaspp的表达水平,分析这三个因子在EMPD和MPD发病过程中的临床意义及三者的相关性。方法应用免疫组化检测20例EMPD组织、20例MPD组织及10例正常皮肤组织中aspp1、aspp2以及iaspp的表达水平。结果应用SPSS 25.0数据软件进行统计及计算,其中用方差分析描述aspp1、aspp2以及iaspp在EMPD、MPD及正常皮肤组织的表达情况,用Pearson分析aspp1、aspp2以及iaspp各自在EMPD、MPD及正常皮肤组织中两两之间的相关性,a=0.05为检验水准,P＜0.05有显著性差异。结果1、aspp1在三种组织中的表达情况:EMPD组织（4.104±0.948）,MPD组织（4.265±0.673）,正常组织（3.818±0.700）。三组间无显著性差异（F=1.041,P＞0.05）。2、aspp2在三种组织中的表达情况:EMPD组织（3.095±1.079）,MPD组织（3.397±0.728）,正常组织（3.318±0.376）。三组间无显著性差异（F=0.668,P＞0.05）。3、iaspp在三种组织中的表达情况:EMPD组织（6.340±0.594）,MPD组织（8.701±0.699）,正常组织（3.296±0.532）。三组间差异有统计学意义（F=226.473,P＜0.001）:iaspp在EMPD组织中的表达显著高于正常组织,显著低于MPD组织（P均＜0.01）。4、Pearson相关性分析:在EMPD组织、MPD组织、正常皮肤组织中,aspp1、aspp2及iaspp的表达两两之间均无相关性（P＞均0.05）。结论1、aspp1、aspp2在EMPD、MPD及正常皮肤组织中均低表达,且三种组织中的表达无显著性差异,提示aspp1、aspp2可能不参与EMPD和MPD的发生;2、iaspp在EMPD及MPD中高表达,且在MPD中的表达高于EMPD,提示iaspp可能参与并促进了EMPD和MPD的发生发展。

关键词： Paget病 aspp1 aspp2 iaspp

白藜芦醇诱导乳腺癌细胞凋亡过程中aspp1、aspp2基因的表达

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临床与实验病理学杂志 2013年第9期29卷 957-960页

作者：史玉洁龚智泉宋晓霞刘秋雨孔令非河南省人民医院病理科

目的检测白藜芦醇作用MCF-7(野生型p53)和MDA-MB-231(突变型p53)乳腺癌细胞后aspp1和aspp2的表达。方法采用MTT法检测白藜芦醇对乳腺癌细胞增殖的影响,采用Western blot法检测经白藜芦醇处理后,MCF-7、MDA-MB-231和MCF-7/Caspase3细胞株... 详细信息

目的检测白藜芦醇作用MCF-7(野生型p53)和MDA-MB-231(突变型p53)乳腺癌细胞后aspp1和aspp2的表达。方法采用MTT法检测白藜芦醇对乳腺癌细胞增殖的影响,采用Western blot法检测经白藜芦醇处理后,MCF-7、MDA-MB-231和MCF-7/Caspase3细胞株PARP的蛋白水平变化。采用RT-PCR、Western blot法检测经白藜芦醇处理后,MCF-7、MDA-MB-231细胞中aspp1和aspp2的mRNA和蛋白表达变化。结果白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB231的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性。MCF-7和MDA-MB-231细胞中aspp1和aspp2的mRNA和蛋白表达均较低,与MDA-MB-231相比,MCF-7细胞中aspp2的蛋白表达更低。白藜芦醇作用于细胞后,与对照组相比,aspp1和aspp2的mRNA和蛋白表达均升高,且随药物浓度增高而表达增高;aspp1和aspp2的mRNA和蛋白表达与肿瘤细胞的凋亡呈正相关。结论白藜芦醇诱导乳腺癌细胞aspp1、aspp2基因高表达。

关键词：乳腺肿瘤白藜芦醇 aspp1 aspp2 凋亡

人脑胶质瘤中aspp1和aspp2蛋白的表达及其与细胞凋亡的相关性

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广东医学 2012年第13期33卷 1964-1968页

作者：朱泳鹏王东军何友虎广东三九脑科医院神经外科广州510510 广东医学院第二临床学院外科学教研室广东湛江524023

目的研究P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,aspp)家族成员aspp1、aspp2蛋白在神经胶质瘤中的表达及其与细胞凋亡情况的相关性。方法通过免疫组化的方法联合检测60例人脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中aspp1、aspp2... 详细信息

目的研究P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,aspp)家族成员aspp1、aspp2蛋白在神经胶质瘤中的表达及其与细胞凋亡情况的相关性。方法通过免疫组化的方法联合检测60例人脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中aspp1、aspp2蛋白表达。采用TUNEL法检测胶质瘤组织与正常脑组织标本中的细胞凋亡情况,分析aspp1、aspp2蛋白表达与细胞凋亡情况的相关性。结果 aspp1和aspp2蛋白在正常脑组织和胶质瘤组织中均有表达,且它们在不同级别胶质瘤中的阳性表达率比较差异有统计学意义(Paspp2蛋白在人脑神经胶质瘤组织中的表达与细胞凋亡的发生呈正相关(rs=0.596,Paspp1蛋白在人脑神经胶质瘤组织中的表达与细胞凋亡的发生无相关性(rs=0.197,P>0.05)。结论联合检测aspp1、aspp2蛋白及细胞凋亡情况可较准确评价人脑神经胶质瘤的病理特征,对判断神经胶质瘤的恶性程度有重要的临床价值,为探讨人脑神经胶质瘤的可能发病机制提供分子实验依据,以aspp1、aspp2蛋白或其亚型为靶点的胶质瘤治疗研究将具有广阔的前景。

关键词：脑胶质瘤 aspp1 aspp2 凋亡 TUNEL法免疫组织化学

非小细胞肺癌患者组织和血液中aspp1和aspp2 mRNA表达的临床研究

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非小细胞肺癌患者组织和血液中ASPP1和ASPP2 mRNA表达的临床研究

作者：张明芳大连医科大学

学位级别：硕士

目的:建立检测抑癌基因p53凋亡刺激蛋白aspp1和aspp2 mRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,并应用该方法检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织和外周血液aspp1、aspp2 mRNA表达情况,从中进一步了解在NSCLC发生发展及诊断治疗过程中两基因... 详细信息

目的:建立检测抑癌基因p53凋亡刺激蛋白aspp1和aspp2 mRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,并应用该方法检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织和外周血液aspp1、aspp2 mRNA表达情况,从中进一步了解在NSCLC发生发展及诊断治疗过程中两基因表达量的变化,研究两基因的表达与NSCLC治疗方法敏感性的关系。方法:1、根据已知序列设计特异性引物,合成引物后进行反应性确认。2、分别制作aspp1、aspp2和β-Actin标准品。体外构建高浓度aspp1质粒DNA作为实验用标准品;培养HL-60细胞,提取纯化高浓度的RNA作为aspp2和β-Actin的标准品。3、收集、分离对照组和患者组血液标本单个核细胞,提取单个核细胞标本的total RNA,同时收集患者手术后病理证实为NSCLC的肿瘤组织,提取组织total RNA。检测所提取RNA的含量、纯度以及完整性。4、应用实时荧光定量RT-PCR的方法检测两目的基因和管家基因β-Actin mRNA表达水平,计算校正值及相对值进行统计分析结果。5、监测患者血液aspp1和aspp2的表达情况,观察治疗效果,并且探讨两抑癌基因表达水平与治疗的关系,用以评价放化疗敏感性。结果:1、实验证实设计的引物特异性较好,在适当的反应条件下未出现非特异性反应。2、体外构建的aspp1质粒DNA标准品和培养HL-60提取的total RNA标准品经重复实验,均得到较好的扩增曲线和标准曲线,并且融解曲线峰型单一,具有良好的稳定性与重复性。3、所提取待测标本total RNA含量及纯度均较高,且具有良好的完整性。4、NSCLC患者肺组织标本与相应血液标本aspp1、aspp2相对值比较均具有显著性差异(P均﹤0.05);患者血液与对照组血液两基因表达也具有显著性差异(P均﹤0.05)。5、aspp1和aspp2表达量与肿瘤标志物细胞角质素片断抗原(CYFRA21-1,简称C21-1)和癌胚抗原(CEA)相关性分析,P均aspp mRNA与肿瘤标志物有相关性。6、不同患者在治疗过程中aspp1和aspp2 mRNA表达对化疗药物敏感性亦是不同。结论:标准品构建成功,可应用于定量检测。应用实时荧光定量RT-PCR的方法检测目的基因aspp1和aspp2的敏感性和特异性均较高,稳定性好。结果分析显示aspp1、aspp2在肺组织和相应血液中mRNA表达不同,具有组织分布不同的特点。患者血液与对照组比较,NSCLC发生时两基因的表达均下降,血液中aspp1和aspp2 mRNA的表达水平可以反映NSCLC疾病的状况,aspp家族的表达与肿瘤的发生发展密切相关。在NSCLC患者治疗过程中,两种抑癌基因表达与化疗药物的敏感性相关。初步分析发现,应用化疗药物后,aspp1和aspp2表达升高的患者治疗效果更佳,说明该类型肺癌患者对所应用的化疗药物更敏感。这对分子水平继续研究肿瘤的治疗具有重大意义,此研究将会在NSCLC的治疗起到指导作用,在肺癌治疗敏感性上具有突出意义。

关键词：抑癌基因 aspp1 aspp2 非小细胞肺癌实时荧光定量PCR

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低氧抑制aspp1表达的分子机制研究

低氧抑制ASPP1表达的分子机制研究

作者：张淼淼哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

中国肿瘤调查研究报告显示,我国每年新增癌症患者数高达350万,每年癌症死亡人数达250万,在部分地区,其实癌症已超过心脑血管疾病,成为威胁人类健康的第一大杀手。在肿瘤研究领域,肿瘤微环境缺氧一直是一个热点的研究方向,因为实体瘤缺... 详细信息

中国肿瘤调查研究报告显示,我国每年新增癌症患者数高达350万,每年癌症死亡人数达250万,在部分地区,其实癌症已超过心脑血管疾病,成为威胁人类健康的第一大杀手。在肿瘤研究领域,肿瘤微环境缺氧一直是一个热点的研究方向,因为实体瘤缺氧是肿瘤的一个关键特征,从这一特征入手,探究低氧微环境对肿瘤相关基因的调控作用及机制对于寻找潜在的肿瘤治疗靶点具有十分重要的意义。目前关于aspp1作为抑癌基因在肿瘤细胞中发挥的促凋亡等作用已被报道,但其在肿瘤中具体调控机制研究的尚不透彻,并且目前关于低氧导致aspp1表达水平改变的具体调控机制仍需继续研究。本课题前期研究发现低氧抑制aspp1表达,并且该现象依赖于HIF-1α。通过实时定量PCR,蛋白质印迹分析、核质分离等实验分别从转录水平和蛋白水平对低氧抑制aspp1表达的具体调控机制进行探究。结果显示,低氧条件下,aspp1表达下调可能是通过泛素蛋白酶体降解;进一步的研究显示aspp1被K48链泛素化并且SKP2是aspp1发生泛素化的E3泛素连接酶。本研究为更好的解释低氧调控基因表达的机制,并为寻找肿瘤治疗的潜在靶点提供新思路。

关键词：肺癌 HIF-1α 低氧 aspp1 泛素化降解

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EGR-1对aspp1基因调控机制的研究

EGR-1对ASPP1基因调控机制的研究

作者：赵坤明哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

aspp1是新发现的蛋白家族aspps中的一个抑癌基因,其表达量在许多种类的癌症组织中下调,因此揭示其上游调控机制对解释其表达量下降具有重要的意义。目前已发现的主要是表观遗传水平的调控,而在转录水平上调控aspp1基因的转录因子现已有... 详细信息

aspp1是新发现的蛋白家族aspps中的一个抑癌基因,其表达量在许多种类的癌症组织中下调,因此揭示其上游调控机制对解释其表达量下降具有重要的意义。目前已发现的主要是表观遗传水平的调控,而在转录水平上调控aspp1基因的转录因子现已有报道的仅有E2F家族的成员。本文就EGR-1对aspp1的调控机制以及它们在槲皮素诱导下所发挥的生物学功能进行了研究。通过外源过表达、RNAi技术初步探究表明,EGR-1与aspp1基因在转录水平以及蛋白水平上存在明显的相关性。初步实验得到两个基因相关性后即进行调控机制的研究,首先利用双荧光素酶报告系统实验(Luciferase assay),外源过表达、下调内源性EGR-1的表达量可以正向调控aspp1基因(-1040—+88)启动子区,发现其调控的核心区域为(-284—+88);染色质免疫共沉淀的实验(Ch IP)结果表明转录因子EGR-1确实可以结合在aspp1(-284—+88)这一区域内,与Luciferase assay结果一致,证明了EGR-1可作为转录因子正向调控aspp1基因的表达。槲皮素作为天然植物提取物,已被许多文献报道具有促进细胞凋亡的作用,而槲皮素的这一功能的具体机制还尚未明确,在前期的实验结果中发现EGR-1和aspp1的表达量均可以被槲皮素诱导而上升。这些现象提示,作为肿瘤抑制因子的aspp1蛋白可能被EGR-1调控参与槲皮素促进细胞凋亡这一现象。经过后期ChIP实验表明,受到槲皮素处理后的HCT116细胞中,EGR-1与aspp1启动子区的结合能力增强,表明EGR-1激活了aspp1基因的表达。通过RNAi下调了EGR-1和aspp1蛋白后,发现槲皮素降低细胞活性的能力明显降低。经过流式细胞仪检测验证,这种细胞活力的上升主要是由于细胞凋亡水平被抑制而产生的。本文发现了转录因子EGR-1可以通过结合aspp1启动子来调控其表达,这为aspp1的表达调控机制提供了新的解释,也为研究槲皮素引起细胞凋亡的发生机制提供了新的思路和方向。总之,这些发现为了更好的解肿瘤细胞的发生和发展机制,为肿瘤的防治提供了新的靶点和理论基础。

关键词：槲皮素 EGR1 aspp1 细胞凋亡

喉癌中aspp1、iaspp和P53的表达及其相互关系的研究

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喉癌中ASPP1、iASPP和P53的表达及其相互关系的研究

作者：唐江华重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过检测喉癌组织中aspp1、iaspp与p53蛋白的表达,探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)中aspp1、aspp2蛋白表达规律及其与p53表达状态的相关性。方法:收集40例LSCC标本(LSCC组)和40例声带息肉标本(对照组)共80例用于试验研究。采用免疫组织化... 详细信息

目的:通过检测喉癌组织中aspp1、iaspp与p53蛋白的表达,探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)中aspp1、aspp2蛋白表达规律及其与p53表达状态的相关性。方法:收集40例LSCC标本(LSCC组)和40例声带息肉标本(对照组)共80例用于试验研究。采用免疫组织化学方法检测喉鳞状细胞癌组织、声带息肉组织中aspp1、aspp2蛋白表达及p53表达。结果: P53阴性状态下,免疫组织化学检测结果显示aspp1、iaspp蛋白在喉癌癌组织、声带息肉组织中表达比较有显著性差异。在p53阴性时,癌组织aspp1表达显著低于声带息肉组织;iaspp表达显著高于声带息肉组织。喉癌组织、声带息肉组织中aspp1、iaspp表达与p53表达状态无相关性。结论:p53阴性状态下,LSCC癌组织aspp1表达降低,iaspp表达增高,aspp1、iaspp的表达状态与LSCC的发生密切相关。

关键词：喉鳞状细胞癌 aspp1 iaspp P53