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miR-29a up-regulation in ar42j cells contributes to apoptosis via targeting TNFRSF1A gene

World journal of Gastroenterology 2016年第20期22卷 4881-4890页

作者： Qiang Fu Tao Qin Lin Chen Chuan-jiang Liu Xu Zhang Yu-Zhu Wang Ming-Xing Hu Hao-Yuan Chu Hong-Wei Zhang Department of Hepatobiliary Pancreatic Surgery People’s Hospital of Zhengzhou University School of Medicine Zhengzhou University

AIM: To investigate the expression of mi R-29 a in rat acute pancreatitis and its functional role in ar42 j cell ***: Twelve SD rats were divided into a control group and an acute edematous pancreatitis(AEP) group randomly. AEP was induced by intraperitoneal injection of L-arginine(150 mg/kg) in the AEP group and equal volume of 0.9% Na Cl was injected in the control group. The apoptosis of acinar cells in pancreatic tissue was determined by TUNEL assay. mi RNA chip assay was performed to examine the expression of mi RNAs in two groups. Besides, to further explore the role of mi R-29 a in apoptosis in vitro, recombinant rat TNF-α(50 ng/m L) was administered to treat the rat pancreatic acinar cell line ar42 j for inducing ar42 j cell apoptosis. Quantitative real-time PCR(q RT-PCR) was adopted to measure mi R-29 a expression. Then, mi RNA mimic, mi RNA antisense oligonucleotide(AMO) and control vector were used to transfect ar42 j cells. The expression of mi R-29 a was confirmed by q RT-PCR andthe apoptosis rate of ar42 j cells was detected by flow cytometry analysis. Western blot was used to detect the expression of activated caspase3. Moreover, we used bioinformatics software and luciferase assay to test whether TNFRSF1 A was the target gene of mi R-29 a. After transfection, q RT-PCR and Western blot was used to detect the expression of TNFRSF1 A in ar42 j cells after ***: The expression of mi R-29 a was much higher in the AEP group compared with the control group as displayed by the mi RNA chip assay. After inducing apoptosis of ar42 j cells in vitro, the expression of mi R-29 a was significantly increased by 1.49 ± 0.04 times in comparison with the control group. As revealed by q RT-PCR assay, the expression of mi R-29 a was 2.68 ± 0.56 times higher in the mi R-29 a mimic group relative to the control vector group, accompanied with an obviously increased acinar cell apoptosis rate(42.83 ± 1.25 vs 24.97 ± 0.15, P < 0.05). Moreover, th

关键词： Acute edematous pancreatitis mi R-29a Apoptosis ar42j Target gene TNFRSF1A

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稳定沉默GRP78基因的胰腺腺泡细胞株ar42j的建立

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四川大学学报（医学版） 2012年第5期43卷 645-650页

作者：刘勇李园陈珂玲周斌杨烈晏会周总光四川大学华西医院胃肠外科中心成都610041 四川大学华西医院消化外科研究室成都610041

目的设计并构建编码大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的短发夹样RNA(shRNA)慢病毒载体,用以建立稳定沉默GRP78基因的大鼠胰腺腺泡细胞株ar42j。方法设计并合成3条编码大鼠GRP78mRNA的shRNA质粒表达载体,用三质粒包装系统包装成慢病毒,并以... 详细信息

目的设计并构建编码大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的短发夹样RNA(shRNA)慢病毒载体,用以建立稳定沉默GRP78基因的大鼠胰腺腺泡细胞株ar42j。方法设计并合成3条编码大鼠GRP78mRNA的shRNA质粒表达载体,用三质粒包装系统包装成慢病毒,并以相应慢病毒转导大鼠胰腺腺泡细胞株ar42j。经流式细胞分选术(FCAS)筛选出绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞,采用real-time PCR及Western blot方法检测GRP78基因的mRNA和蛋白表达。结果测序证实,成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3。慢病毒转导ar42j细胞后,经荧光显微镜和FCAS证实转导效率>85%。经real-time PCR验证,与未处理组相比,LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3处理组对GRP78mRNA表达的沉默效率分别为69.4%±1.42%、74.7%±1.69%和86.6%±1.73%(Parget对照组与未处理组相比,GRP78mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示各组GRP78蛋白表达与mRNA表达趋势一致。结论成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体,建立了稳定沉默GRP78基因的胰腺腺泡细胞株ar42j,为探讨GRP78基因在急性胰腺炎发病机制中的作用提供了新的细胞模型。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 RNA干扰慢病毒急性胰腺炎 ar42j

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RND3对雨蛙素诱导的大鼠ar42j细胞损伤的影响

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中国免疫学杂志 2024年第9期40卷 1822-1826,1832页

作者：张瑜高华复旦大学附属中山医院厦门医院厦门361006

目的:观察干预RND3对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞ar42j损伤的影响,并探究RND3在急性胰腺炎(AP)中的调控机制。方法:分别构建RND3沉默和过表达的雨蛙素诱导的ar42j细胞AP模型,共6组(NC对照组、雨蛙素处理组、si-con阴性对照组、pcDNA... 详细信息

目的:观察干预RND3对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞ar42j损伤的影响,并探究RND3在急性胰腺炎(AP)中的调控机制。方法:分别构建RND3沉默和过表达的雨蛙素诱导的ar42j细胞AP模型,共6组(NC对照组、雨蛙素处理组、si-con阴性对照组、pcDNA阴性对照组、si-RND3沉默组和pcDNA-RND3过表达组)。qRT-PCR和Western blot分别在雨蛙素给药后的0 h、4 h、8 h、12 h和24 h检测ar42j细胞中RND3 mRNA、蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞的存活情况和LDH漏出量,流式细胞术检测ar42j细胞的凋亡率,qRT-PCR检测相关炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18)的mRNA表达水平,Western blot检测ar42j细胞中凋亡相关蛋白(GSDMD、NLRP3、Cleaved caspase-1和caspase-1)表达。结果:雨蛙素诱导的ar42j细胞能抑制RND3 mRNA和蛋白表达,且随着雨蛙素处理时间延长,其对RND3的抑制作用越显著;相比NC对照组,siRND3组、雨蛙素处理组大鼠ar42j细胞中的相关炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18表达上调(Par42j的炎症反应和细胞凋亡,其作用机制与NLRP3/caspase-1/GSDMD通路的活性有关。

关键词： RND3 ar42j 急性胰腺炎炎症反应细胞凋亡 NLRP3/caspase-1/GSDMD通路

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大黄素对脱氧胆酸诱导的ar42j细胞损伤的调节

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世界华人消化杂志 2012年第9期20卷 771-775页

作者：张桂信陈海龙纪军吴圆圆尚东张利大连医科大学附属第一医院普外科辽宁省大连市116011 大连市中心医院中心实验室辽宁省大连市116033

目的:研究大黄素(Emodin)对脱氧胆酸(deoxy-cholicacid,DCA)诱导的胰腺腺泡细胞损伤的调节作用.方法:以大鼠ar42j胰腺腺泡系为研究对象,分为5组,分别为CON组、0.4mmol/LDCA刺激组、0.4mmol/LDCA刺激+Emodin(20mg/L)干预组、0.8mmol/LDCA刺激组、0.8mmol/LDCA刺激+Emodin(20mg/L)干预组.利用流式细胞术AV/PI双染法检测各组细胞凋亡/坏死率,提取细胞浆蛋白,并分别检测各组细胞培养液上清与细胞浆淀粉酶的活性.结果:0.4mmol/LDCA诱导ar42j胰腺腺泡细胞损伤以凋亡为主,0.8mmol/LDCA诱导ar42j细胞损伤则以坏死为主.20μmol/LEmodin可以明显减少0.4mmol/LDCA诱导的ar42j胰腺腺泡细胞的晚期凋亡(27.9%vs34.1%),并明显降低0.8mmol/LDCA诱导的ar42j细胞坏死(38.1%vs45.4%).大黄素对DCA诱导下ar42j胰腺腺泡细胞培养液上清及细胞浆淀粉酶活性均没有明显变化.结论:Emodin对胆汁酸诱导的胰腺腺泡细胞损伤有一定的保护性作用,对细胞淀粉酶的合成与分泌功能没有明显影响.

关键词： ar42j 大黄素急性胆源性胰腺炎脱氧胆酸凋亡坏死

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ar42j细胞自分泌Shh信号参与雨蛙素诱导的急性胰腺炎

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泸州医学院学报 2015年第6期38卷 533-536页

作者：周翔宇陈霞黄娟曾凡才四川医科大学附属第一医院血管甲状腺外科四川医科大学附属第一医院消化内科四川医科大学附属第一医院病理科四川医科大学生物化学教研室四川泸州646000

目的:观察Hedgehog信号在急性胰腺炎(AP)体外模型中的表达变化。方法:不同浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞株ar42j,构建AP体外细胞模型,重组Shh作用于ar42j细胞。采用RT-PCR、Western-blot分别检测细胞Shh信号分子表达;ELISA检测上清... 详细信息

目的:观察Hedgehog信号在急性胰腺炎(AP)体外模型中的表达变化。方法:不同浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞株ar42j,构建AP体外细胞模型,重组Shh作用于ar42j细胞。采用RT-PCR、Western-blot分别检测细胞Shh信号分子表达;ELISA检测上清Shh水平。结果:与对照组相比,雨蛙素诱导组Shh的m RNA和蛋白水平表达明显升高,细胞自分泌Shh水平也明显升高,呈雨蛙素浓度依赖性。重组Shh刺激后,Shh相关信号Shh、Gli1和Ptch1表达呈浓度依赖性地升高。结论:在雨蛙素诱导的ar42j细胞,自分泌的Shh信号参与急性胰腺炎的发病机制。

关键词：雨蛙素 ar42j 急性胰腺炎 Sonic Hedgehog信号

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miR-146a靶向TRAF6继而抑制ar42j细胞的增殖及凋亡

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中国处方药 2022年第2期20卷 33-35页

作者：郑传明王振杰杜召辉窦贺贺蚌埠医学院第一附属医院急诊外科安徽蚌埠233000

目的探究miR-146a对胰腺腺泡细胞ar42j增殖及凋亡的影响。方法通过雨蛙素诱导ar42j细胞构建急性胰腺炎模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中淀粉酶、TNF-α、IL-6含量验证模型构建,qRT-PCR与Western blot分别检测各组中miR-146... 详细信息

目的探究miR-146a对胰腺腺泡细胞ar42j增殖及凋亡的影响。方法通过雨蛙素诱导ar42j细胞构建急性胰腺炎模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中淀粉酶、TNF-α、IL-6含量验证模型构建,qRT-PCR与Western blot分别检测各组中miR-146a和TRAF6表达量的改变。转染敲低ar42j细胞中miR-146a表达量,采用Edu检测细胞敲低后增殖改变,流式细胞术检测凋亡能力改变。结果与未处理组相比,雨蛙素组细胞miR-146a表达量显著降低(Par42j细胞增殖能力明显降低,凋亡能力明显升高。结论miR-146a可能通过抑制TRAF6表达从而降低ar42j细胞凋亡并促进细胞增殖能力。

关键词： miR-146a TRAF6 ar42j 急性胰腺炎增殖凋亡

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Parimal Chowdhury's work on smoking related pancreatic disorders

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World journal of Gastrointestinal Pathophysiology 2011年第3期2卷 57-60页

作者： Parimal Chowdhury Department of Physiology and Biophysics Faculty of MedicineUniversity of Arkansas for Medical Sciences4301 W Markham StreetLittle RockAR 72205 United States

Cigarette smoking is a known risk factor for the development of numerous diseases. The role of nicotine in the induction of pancreatic inflammation and pancreatic cancer as a result of cigarette smoking has been recognized and reported in the literature. The mechanism by which nicotine induces such pathologies is as yet unknown. An understanding of the proliferative potential of nicotine in primary and tumor cells of the pancreas will allow us to develop measures that will ultimately lead to intervention,prevention and treatment of these diseases. Studies show that nicotine can increase the cell numbers of certain cancer cell lines,suggesting that exposure to nicotine can lead to the disruption of the dynamic balance between cell death and proliferation,which is required for normal functioning of cells. We hypothesize that nicotine induces oxidative stress in pancreatic acinar cells and thus contributes to this disruption. We have used the ar42j cell line in our study because of its stability as an immortal tumor cell line and its known physiological similarity to primary acinar cells. Our studies show that mitogen activated protein kinase signaling is induced bynicotine in ar42j cells,causing an increase in lipid peroxidation and a subsequent decrease in cell function. Our data suggest that exposure to nicotine induces oxidative stress,leading to cell injury and compromised function,thus implicating cigarette smoking as a plausible mechanism.

关键词： Nicotine ar42j cell Effect on mechanisms Lipid peroxidation MAPK signaling Cell function

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自噬在急性胰腺炎发病过程中的作用

自噬在急性胰腺炎发病过程中的作用

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作者：白槟第四军医大学

学位级别：硕士

背景急性胰腺炎是外科常见的急腹症，其发病原因尚不清楚，总体死亡率约为5%，其中重症坏死性胰腺炎死亡率高达350%。目前大多研究者认为胰酶原在胰腺细胞内非正常激活，是造成急性胰腺炎发生的原因。然而胰腺细胞内的胰酶原又是如何... 详细信息

背景急性胰腺炎是外科常见的急腹症，其发病原因尚不清楚，总体死亡率约为5%，其中重症坏死性胰腺炎死亡率高达350%。目前大多研究者认为胰酶原在胰腺细胞内非正常激活，是造成急性胰腺炎发生的原因。然而胰腺细胞内的胰酶原又是如何激活的，目前也没有明确阐明，有研究报道自噬参与到该过程中，可是，自噬在该过程中究竟是起到保护作用还是损害作用，尚存在很大争议。目的探索自噬在急性胰腺炎发病过程中的作用，阐述急性胰腺炎的发病机制。方法 1.动物体内观察胰腺炎时自嗜的改变：采用C57小鼠腹腔间断注射雨蛙素诱导急性胰腺炎模型，检测血清淀粉酶、干湿重和胰腺组织病理变化评价胰腺炎损伤度，通过Western-blot检测自噬特异蛋白LC3及胰腺组织透射电镜检测，对比正常及饥饿组小鼠，观察自噬在胰腺炎中的变化。2.建立胰腺炎细胞模型，观察其自嗜的改变：雨蛙素刺激ar42j细胞诱导胰腺炎细胞模型，通过Western-blot及免疫荧光检测自噬特异蛋白LC3，观察雨蛙素作用于腺体细胞后自噬的改变。3.雨蛙素诱导自噬对胰腺炎细胞模型的影响：不同浓度雨蛙素刺激胰腺细胞或者同一雨蛙素浓度刺激胰腺细胞不同时间后，观察细胞毒性、细胞活性及凋亡等细胞状态。4.自噬对胰酶活化的影响：不同浓度雨蛙素刺激胰腺细胞或者同一雨蛙素浓度刺激胰腺细胞不同时间，并给予3甲基腺嘌呤、羟氯喹、E64D在三个不同环节抑制自噬后，采用BZiPar(胰酶荧光底物)，检测胰酶活化情况，了解胰酶活化与自嗜的关系;5.观察不同严重程度胰腺炎小鼠模型自嗜变化间断腹腔注射CR，通过不同的注射次数，诱导出不同严重程度的急性胰腺炎动物模型，用Western-blot检测自噬特异蛋白LC3，观察自噬同胰腺炎严重程度的关系。结果 1.胰腺炎动物模型自噬体数目增多，包绕酶原颗粒并降解。2.雨蛙素诱导胰腺炎细胞模型，自噬体增加，自噬功能障碍。3.雨蛙素刺激并不能直接引起ar42j细胞坏死或凋亡，相反，雨蛙素反而会促进ar42j细胞增殖，这种增殖作用是可以通过抑制自噬来抑制的。4.在雨蛙素的刺激下，ar42j细胞的胰酶原部分活化，酶原活化并不能随时间的延长而累积，也不随雨蛙素浓度增加而提高;不同环节抑制自噬，均可抑制胰酶活化。5.自噬障碍程度同胰腺炎的严重程度呈明显正相关，当胰腺炎表现越重，自噬障碍越明显。结论本研究证实了自噬障碍参与急性胰腺炎胰酶原的活化，但单纯自噬障碍引起的胰酶活化，并不能进一步引起胰腺细胞凋亡或坏死;然而雨蛙素诱导的急性胰腺炎动物模型，胰腺组织可出现坏死，并且自噬障碍程度同疾病的严重程度呈明显正相关。因此我们推测，当自噬障碍后，能通过某种机制(可能是激活炎症系统)，而非胰酶活化，损伤胰腺组织，进一步加重疾病病情。

关键词：急性胰腺炎自噬雨蛙素 ar42j

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沉默Beclin1基因对雨蛙素诱导急性胰腺炎细胞模型的炎症反应及自噬的影响

沉默Beclin1基因对雨蛙素诱导急性胰腺炎细胞模型的炎症反应及自...

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作者：李钦芳第二军医大学

学位级别：硕士

目的:自噬是生物体进化过程中存在的高度保守的细胞内物质降解过程,细胞通过形成双层膜结构的自噬体吞噬胞内物质后转运至溶酶体中进行降解再利用。自噬在急性胰腺炎发生发展中作用的研究是当前急性胰腺炎基础研究领域的主要热点之一。... 详细信息

目的:自噬是生物体进化过程中存在的高度保守的细胞内物质降解过程,细胞通过形成双层膜结构的自噬体吞噬胞内物质后转运至溶酶体中进行降解再利用。自噬在急性胰腺炎发生发展中作用的研究是当前急性胰腺炎基础研究领域的主要热点之一。自噬相关基因Beclin1是自噬起始阶段的重要调控分子,本研究首先采用RNA干扰技术沉默大鼠胰腺腺泡细胞ar42j的Beclin1基因表达,构建稳定的Beclin1基因沉默的ar42j细胞系。通过原始细胞系与转染后细胞株的对比,我们了解Beclin1基因在ar42j细胞的增殖、凋亡、自噬及糜蛋白酶表达中的作用,并进一步探讨Beclin1基因对雨蛙素诱导的的急性胰腺炎细胞模型中炎性因子水平、凋亡、自噬及超微结构的影响。方法:1.设计并合成3种靶向大鼠Beclin1 mRNA的shRNA及阴性对照shRNA,分别插入质粒GV112,重组质粒分别命名为p-sh-Beclin1-1、p-sh-Beclin1-2、p-sh-Beclin1-3及p-shRNA-NC。应用lipo3000将重组质粒瞬转入ar42j细胞,应用RT-PCR检测细胞Beclin1 mRNA表达,筛选出沉默效率最高的质粒,在293T细胞内包装成慢病毒(LV-shBeclin1),感染ar42j细胞,应用嘌呤霉素筛选,采用RT-PCR及蛋白质印迹法分别检测病毒感染细胞Beclin1 mRNA和蛋白表达。2.采用CCK8试剂盒测定原始细胞系与转染后细胞株的生长曲线,了解Beclin1基因对ar42j细胞增殖的作用。采用流式细胞技术检测原始细胞系与转染后细胞株的凋亡情况,了解Beclin1基因对ar42j细胞凋亡的影响。采用透射电镜观察两组细胞的超微结构,了解Beclin1基因对ar42j细胞中自噬影响。采用免疫荧光技术观察两组细胞糜蛋白酶的表达情况,了解Beclin1基因对ar42j细胞中糜蛋白酶表达的影响。3.采用酶联免疫吸附实验检测雨蛙素诱导的的急性胰腺炎细胞模型不同时间点(0h、1h、4h、6h、8h、12h、24h、36h及48h)上清液中的炎性因子水平,及沉默Beclin1基因后炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平的改变,从而探讨沉默Beclin1基因对雨蛙素诱导的的急性胰腺炎细胞模型中炎性因子水平的影响。采用蛋白质印迹法检测雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型中不同时间点(0h、1h、4h、6h、8h、12h、24h及36h)的凋亡相关蛋白BCL2及自噬相关蛋白LC3表达水平,及沉默Beclin1基因后BCL2及LC3蛋白水平的改变,从而探讨沉默Beclin1基因对雨蛙素诱导的的急性胰腺炎细胞模型中凋亡及自噬的影响。采用透射电镜技术观察以1×10mol/L浓度的雨蛙素作用4h后的两组细胞中自噬水平及炎症程度,从而探讨沉默Beclin1基因对雨蛙素诱导的的急性胰腺炎细胞模型超微结构的影响。结果:1.重组质粒经琼脂糖凝胶电泳分离及测序证实shRNA序列符合预期。p-sh-Beclin1-1、p-sh-Beclin1-2、p-sh-Beclin1-3及p-shRNA-NC转染后ar42j细胞Beclin1 mRNA表达抑制率分别为(17.8±4.0)%、(30.6±2.8)%、(45.8±7.7)%、(7.0±11.8)%。3个p-sh-Beclin1转染细胞的表达抑制率均较未转染细胞的差异有统计学意义(P值均ar42j细胞,应用嘌呤霉素筛选,LV-shBeclin1感染细胞的Beclin1 mRNA表达抑制率为(86.1±1.2)%,蛋白表达抑制率为(87.9±2.8)%,均与未感染细胞无表达抑制的差异有统计学意义(P值均ar42j细胞增殖的影响并无统计学意义(P>0.05),但可以促进细胞的凋亡。沉默Beclin1基因使得ar42j细胞中自噬泡数目减少,但并不影响细胞糜蛋白酶的表达。3.酶联免疫吸附实验提示急性胰腺炎初期炎性因子水平逐步上升,6h时达最高峰后炎性因子水平逐渐下降后再次升高,368h时达到第二次高峰。沉默Beclin1基因后,相应时间点的IL-1β水平下降、IL-6水平多数无明显改变、TNF-α水平多数呈上升趋势。蛋白质印迹法提示沉默Beclin1基因使得雨蛙素诱导的急性胰腺炎中不同时间点的BCL2多数下降,而LC3蛋白多数升高。以1×10mol/L浓度的雨蛙素作用4h后,ar42j细胞中出现急性胰腺炎现象,而转染后细胞株中自噬泡明显减少,且并未观察到炎症改变。结论:成功建立Beclin1基因沉默的ar42j细胞株。Beclin1基因参与自

关键词： Beclin1 iRNA 自噬急性胰腺炎 ar42j

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长链非编码RNA-MEG3在急性胰腺炎中对外分泌细胞凋亡作用及其临床意义的研究

长链非编码RNA-MEG3在急性胰腺炎中对外分泌细胞凋亡作用及其临床...

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作者：张旭郑州大学

学位级别：硕士

目的研究长链非编码RNA-MEG3(lncRNA-MEG3,lncR-MEG3)在急性胰腺炎中的临床意义,及其同系物LncR-RGD1566401对大鼠胰腺外分泌细胞的凋亡作用。方法LncR-RGD1566401是位于大鼠染色体6q32的母系印迹基因,长度为1,915bp,是母系表达基因3(ME... 详细信息

目的研究长链非编码RNA-MEG3(lncRNA-MEG3,lncR-MEG3)在急性胰腺炎中的临床意义,及其同系物LncR-RGD1566401对大鼠胰腺外分泌细胞的凋亡作用。方法LncR-RGD1566401是位于大鼠染色体6q32的母系印迹基因,长度为1,915bp,是母系表达基因3(MEG3)的同源类似物。用携带有lncR-RGD1566401目的基因的慢病毒(Lenti-LncRNA)和特异性lncR-RGD1566401抑制剂(lncRNA Smart Silencer)转染ar42j细胞系24h,转染空病毒(Lenti-NC)和特异性lncR-RGD1566401阴性抑制剂(lncRNA smart silencer negative control)作为对照;以100 nmol/L雨蛙肽(Caerulin)体外诱导正常培养ar42j及转染后ar42j的凋亡,使用药物诱导凋亡24h以后,采用流式细胞技术(Flow cytometry,FCM)检测各组ar42j细胞的凋亡率,使用实时荧光定量RT-PCR法检测各组lncR-RGD1566401的表达量,而后采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组凋亡蛋白活性Caspase-3和P53表达量的变化。同时收集郑州大学人民医院2016年1月至2017年1月的急性胰腺炎患者63例,其中重症急性胰腺炎(serve acute pancreatitis,SAP)21例,轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)42例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者入院后24h血清lncR-MEG3的表达水平,比较各组间lncR-MEG3、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(D-Dimer)浓度差异。使用SPSS22.0软件进行统计学分析获得的数据,然后制作受试者工作特征曲线(ROC曲线),进一步评价该血清学指标对SAP的诊断效能。结果雨蛙肽体外诱导ar42j凋亡的凋亡率(19.34±0.54)%较对照组(7.23±0.33)%明显升高,lncR-RGD1566401表达量较对照组升高(5.43±0.31)倍,活性Caspase-3和P53表达量明显升高;转染携带有lncR-RGD1566401目的基因的慢病毒组lncR-RGD1566401表达量较空病毒组升高(8.24±0.22)倍(par42j凋亡率(38.20±0.37)%较空病毒组(22.60±0.96)%明显升高(par42j凋亡率(13.60±0.33)%较阴性对照组(19.60±0.46)%显著降低,(par42j细胞凋亡相关;2.上调lncR-RGD1566401表达水平,ar42j细胞凋亡率增加;下调lncR-RGD1566401表达量,ar42j细胞凋亡率降低;***组患者血清lncR-MEG3表达量较SAP组lncR-MEG3表达量升高明显;4.联合lncR-MEG3、CRP、D-Dimer指标诊断急性重症胰腺炎的诊断效能显著高于单独指标或CRP与D-Dimer联合指标;***-MEG3表达水平可以在早期反映AP患者病情严重程度,lncR-MEG3可能是潜在的作为区分MAP和SAP的血清学生物标志物。

关键词：长链非编码RNA-MEG3 lncR-RGD1566401 急性胰腺炎凋亡血清标志物 ar42j

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