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Nested RT-PCR in detection of blood afpmrna in animal model of human hepatocellular carcinoma

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Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International 2003年第3期2卷 414-417页

作者： Yang Liu Meng-Chao Wu Guang-Xiang Qian Bai-He Zhang the Hospital of Eastern Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China Hospital of Eastern Hepatobiliary Surgery Second Military Medical University Shanghai 200433 China. liuyang@***

OBJECTIVES: To detect blood afpmrna in the nude mice bearing with human hepatocellular carcinoma (HCC) by using nested reverse transcriptase polymerase chain reaction (nested RT-PCR), and assess its significance in HCC distant metastasis. METHOD: We detected 20 blood samples from the nude mice bearing with human HCC by nested RT-PCR to find out afpmrna. RESULT: afpmrna was detected in 6 blood samples from the nude mice hearing with human HCC (30. 0%), in which 4 mice developed distant metastasis. CONCLUSION: afpmrna may be used as an efficient and sensitive marker to detect blood spread of HCC cells. It can predict the occurrence of HCC distant metastasis.

关键词： hepatocellular carcinoma RT-PCR afpmrna nude mice

肝癌切除手术前后周围静脉血液中afpmrna的变化及其意义

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中华实验外科杂志 1998年第5期15卷 410-411页

作者：刘扬张柏和钱光相陈汉吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438

目的探讨肝癌切除手术前后周围静脉血液中afpmrna的变化及其意义。方法应用巢式RT-PCR检测术后48小时、72小时及术后1周肝癌患者周围静脉血液中afpmrna,并观察变化。结果28例术前血液中afpmrna阴性的肝癌患者中有4例术后48小时转为阳性(... 详细信息

目的探讨肝癌切除手术前后周围静脉血液中afpmrna的变化及其意义。方法应用巢式RT-PCR检测术后48小时、72小时及术后1周肝癌患者周围静脉血液中afpmrna,并观察变化。结果28例术前血液中afpmrna阴性的肝癌患者中有4例术后48小时转为阳性(14.30%),但术后1周时复转阴性;而16例术前血液中afpmrna阳性的肝癌患者中有4例(25.00%)术后72小时转为阴性。结论手术操作可引起肿瘤细胞播散人血循环,但它不增加手术危险性。术后短期适量应用γ-干扰素或白介素2(IL-2)是必要的。

关键词：肝细胞瘤肝肿瘤 afpmrna 切除术

高强度聚焦超声治疗前后肝癌患者外周血afpmrna的变化

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中国超声医学杂志 2003年第11期19卷 42-45页

作者：金成兵伍烽王智彪陈文直朱辉黎克全重庆医科大学附属第二医院肿瘤治疗中心重庆医科大学医学超声工程研究所重庆市 400010 重庆医科大学附属第二医院肿瘤治疗中心

目的 :探讨高强度聚焦超声 (HIFU)是否促进原发性肝癌患者的血源性转移。方法 :巢式逆转录聚合酶链式反应方法测定 10例肝癌患者 HIFU治疗前后外周血甲胎蛋白信使核糖核酸 (AFPm RNA)的表达。结果 :10例肝癌患者治疗前外周血 AFPm RNA表... 详细信息

目的 :探讨高强度聚焦超声 (HIFU)是否促进原发性肝癌患者的血源性转移。方法 :巢式逆转录聚合酶链式反应方法测定 10例肝癌患者 HIFU治疗前后外周血甲胎蛋白信使核糖核酸 (AFPm RNA)的表达。结果 :10例肝癌患者治疗前外周血 AFPm RNA表达 8例阳性、 2例阴性 ;HIFU治疗后 8例阳性、 2例阴性 ,治疗前后外周血 AFPm RNA阳性例数无显著性差异 (P>0 .0 5)。结论 :HIFU治疗肝癌不会促进肿瘤的血源性转移

关键词：高强度聚焦超声原发性肝癌转移 afpmrna

原发性肝癌检测r-谷氨酰转移酶mRNA-H亚型及afpmrna的临床分析

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中国实验诊断学 2009年第12期13卷 1768-1769页

作者：张锐李晓峰吉林省肝胆病医院吉林长春130062 吉林省人民医院

研究表明人体内γ-谷氨酰转移酶(GGT)在肝细胞癌变时重新大量表达[2],我们采用荧光定量PCR技术检测HCC患者外周血GGTmRNA-H亚型,同时检测患者的甲胎蛋白mRNA (afpmrna)水平,探讨检测外周血GGT mRNA-H亚型和afpmrna对肝癌诊断的意义.

关键词： mRNA-H亚型 γ-谷氨酰转移酶 PCR技术检测 afpmrna 原发性肝癌临床分析肝细胞癌变荧光定量

HBV所致肝癌前病变的中医辨证分型与AFP-L3及afpmrna相关性研究

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中国中医基础医学杂志 2012年第12期18卷 1363-1365页

作者：付修文徐春军首都医科大学中医药学院北京100069 首都医科大学附属北京中医医院北京100009

我国总体人群乙肝病毒（HBV）流行率为57．63％，HBV携带者（ASC）约1亿人，慢性乙型肝炎患者（CHB）约3千万例，CHB和乙肝后肝硬化患者中每年约有1．17％和2．05％发展成肝癌，每年死于肝细胞癌（HCC）约15万人。全球60％～80％的HCC由... 详细信息

我国总体人群乙肝病毒（HBV）流行率为57．63％，HBV携带者（ASC）约1亿人，慢性乙型肝炎患者（CHB）约3千万例，CHB和乙肝后肝硬化患者中每年约有1．17％和2．05％发展成肝癌，每年死于肝细胞癌（HCC）约15万人。全球60％～80％的HCC由HBV引起，HBV持续感染比非感染者的HCC发生率高100倍以上。。鉴于肝癌的危害性，

关键词：乙肝病毒乙肝携带者辨证分型 AFP—L3 afpmrna

平调饮对原发性肝癌患者afpmrna、MAGE-1mRNA表达影响的研究

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平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达影响的研究

作者：杨丹黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究平调饮对原发性肝癌患者afpmrna、MAGE-1mRNA表达的作用,和对原发性肝癌患者肝功能、生活质量的影响,为平调饮的临床应用提供试验依据。方法:原发性肝癌患者60例,随机分为治疗组和对照组,分别给予平调饮和华蟾素注射液两个疗程... 详细信息

目的:研究平调饮对原发性肝癌患者afpmrna、MAGE-1mRNA表达的作用,和对原发性肝癌患者肝功能、生活质量的影响,为平调饮的临床应用提供试验依据。方法:原发性肝癌患者60例,随机分为治疗组和对照组,分别给予平调饮和华蟾素注射液两个疗程,采用RT-PCR技术检测原发性肝癌患者治疗前、后外周血afpmrna、MAGE-1mRNA的表达,并取30例健康志愿者血样作为参考对照,同时将患者治疗前后的肝功指标、体力状况评分进行比较,结果用SPSS13.0软件统计分析。结果:①平调饮使原发性肝癌患者的afpmrna、MAGE-1mRNA表达明显降低,两组治疗前后比较均具有显著性差异(P 0.05)。③平调饮组体力状况改善率为43.33%,高于对照组(36.67%),但两组间在改善率、稳定率及降低率方面比较无统计学差异(P>0.05 )。结论:①平调饮能明显降低原发性肝癌患者afpmrna、MAGE-1mRNA的表达。②平调饮能明显降低原发性肝癌患者血清AST、ALT水平。③平调饮能改善中晚期原发性肝癌患者体力状况,提高患者生活质量。

关键词：平调饮原发性肝癌 MAGE-1mRNA afpmrna

平调饮对原发性肝癌患者afpmrna、GPC-3mRNA影响的研究

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平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、GPC-3mRNA影响的研究

作者：孙轶男黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:本研究旨在观察: 1)平调饮对原发性肝癌患者afpmrna,GPC-3mRNA的影响2)平调饮对原发性肝癌患者肝脏功能的影响3)平调饮对原发性肝癌患者生存质量的改善。研究方法:选取原发性肝癌患者(60例),随机分为治疗组和对照组各30例。选... 详细信息

研究目的:本研究旨在观察: 1)平调饮对原发性肝癌患者afpmrna,GPC-3mRNA的影响2)平调饮对原发性肝癌患者肝脏功能的影响3)平调饮对原发性肝癌患者生存质量的改善。研究方法:选取原发性肝癌患者(60例),随机分为治疗组和对照组各30例。选取健康志愿者15例作为空白对照组。治疗组和对照组均采用常规保肝治疗,对照组静点华蟾素15ml,日一次,每三周一疗程,休息一周,共两个疗程;治疗组口服平调饮,每日一付,每三周一疗程,休息一周,共两个疗程。观察用药前后afpmrna、GPC3mRNA表达及肝功能、及生存质量的变化。结果:1)治疗后治疗组及对照组AFP mRNA、GPC-3mRNA表达均显著下降,在降低afpmrna表达方面治疗组与对照组无显著差异;降低GPC-3mRNA表达方面治疗组明显优于对照组2)两组比较肝功改善情况无显著差异3)治疗后两组患者卡氏评分均有提高,两组比较无显著差异。结论:1)平调饮能够有效降低肝癌患者AFP mRNA、GPC-3mRNA的表达2)平调饮能够改善患者的肝脏功能3)平调饮能有效提高患者的生存质量。

关键词：原发性肝癌平调饮 afpmrna GPC-3mRNA

一、血清AFP、GGT-Ⅱ及sICAM-1联合检测诊断肝细胞性肝癌的价值二、检测肝细胞性肝癌患者外周血中afpmrna的意义

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一、血清AFP、GGT-Ⅱ及sICAM-1联合检测诊断肝细胞性肝癌的价值 ...

作者：赵威第四军医大学

学位级别：硕士

目的:我国是肝病大国,中国每年有13万患者死于肝癌,占全球肝癌死亡总数的45%。因此对于提高肝细胞性肝癌的诊断率成为当前医学发展的一项重要任务。甲胎蛋白(AFP)作为肝细胞性肝癌特异的肿瘤标志物,应用于临床诊断HCC已有20余年。它是... 详细信息

目的:我国是肝病大国,中国每年有13万患者死于肝癌,占全球肝癌死亡总数的45%。因此对于提高肝细胞性肝癌的诊断率成为当前医学发展的一项重要任务。甲胎蛋白(AFP)作为肝细胞性肝癌特异的肿瘤标志物,应用于临床诊断HCC已有20余年。它是目前诊断肝细胞性肝癌的一项重要指标。但近年来亦发现一些良性肝胆疾病患者中AFP也可呈高值,与HCC有一定程度的重叠,更重要的是有部分HCC患者AFP呈低值甚至为阴性,有的文献报道其阴性率可达30%以上。因此以单一AFP作为HCC的肿瘤标志物容易造成HCC的漏诊和误诊,故考虑将多个肝癌肿瘤标志物联合检测逐渐成为临床提高肝细胞性肝癌确诊率的趋势。本文拟对HCC患者的血清或血清中的AFP、GGT-Ⅱ、sICAM-1进行联合检测。以证明三者联合检测比其单独检测可以明显提高HCC的确诊率。实验方法:本文对220例病人及正常人(包括HCC46例,肝转移癌18例,肝硬化42例,各型肝炎30例,良性肝肿瘤38例及正常对照者46例)的血清中的AFP、GGT-Ⅱ和sICAM-1分别用荧光酶联免疫吸附法、聚丙烯酰胺阶段梯度电泳、双抗体酶联免疫吸附法进行检测。结果：1.经相关分析证明46例HCC患者的AFP、GGT-Ⅱ、sICAM-1三者两两之间无任何相关性（P>0.05）。220例患者和正常对照组的AFP、GGT-Ⅱ、sICAM-1三者两两之间亦无任何相关性(P>0.05)。表明三者之间互不影响，因此可以将三者进行联合检测。 2.由于文献报道，sICAM-1在HCC出现肝外转移时可明显升高，我们对HCC组中出现肝外转移和未出现肝外转移的患者进行了比较。发现sICAM-1在发生HCC肝外转移的患者血清中的浓度明显高于未发生肝外转移的患者，两者sICAM-1的阳性率前者（93.8％）亦明显高于后者（15.3％）。 3.单纯测定AFP、sICAM-1、GGT-Ⅱ值，HCC组的阳性率仅76％、68％、92％，特异性为95％、90％、86％。而三者联合检测后，我们看到，虽然特异性略有下降，但其HCC检出的阳性率较三者单独检测时则有明显的提高，可达96％，对于HCC的诊断有重要意义。同时我们亦可以看到，单独检测AFP、sICAM-1、GGT-Ⅱ时的正确率为85％、78％、89％，漏诊概率为10.26%、15.32%、4.24%，Youden指数为0.71、0.58、0.78。而三者联合检测后，正确率为93％，漏诊概率为1.91%，Youden指数为0.86。经卡方检验，联合检测的漏诊概率与各项单独检测的漏诊概率相比较，P0.05)。讨论：甲胎蛋白作为肿瘤标志物应用于临床血清学诊断肝细胞性肝癌已有20余年，是目前临床诊断肝癌最常用、最有价值的血清学诊断指标，由于在临床应用中，AFP单独作为诊断肝细胞性肝癌的阳性率（灵敏度）在0.4～0.8之间，同时亦有部分肝癌病人AFP呈低浓度或阴性，可导致较高的漏诊率，本实验中AFP诊断肝细胞性肝癌的阳性率仅为76％，漏诊概率达到10.26%。故在临床上不能用作肝细胞性肝癌的排除诊断依据。从我们的观察结果中可以看出，在灵敏度方面GGT-Ⅱ为92％最高，AFP其次，为76％，sICAM-1最低，为68％。特异性方面，AFP为95％,sICAM-1为86％，GGT-Ⅱ为90％。正确率是GGT-Ⅱ89％,AFP85％，sICAM-1为78％,漏诊概率AFP为10.26%、sICAM-1为15.32%、GGT-Ⅱ为4.24%，Youden指数GGT-Ⅱ为0.78，AFP为0.71,sICAM-1为0.58。综合评价，GGT-Ⅱ虽然灵敏度、正确率较高，漏诊概率最低，准确性较好，但其特异性较AFP和sICAM-1低，AFP的特异性和正确率较高，但灵敏度低，漏诊概率较高，准确性一般。而sICAM-1在诊断肝细胞性肝癌方面灵敏度、准确性最低，漏诊概率最高但其特异性好，正确率尚可。但是如将HCC分成肝外转移和无肝外转移两组，则在发生肝外转移组，sICAM-1的灵敏度可达93.8％，而在无肝外转移组其灵敏度仅为15.3％。而AFP和GGT-Ⅱ与是否存在HCC的肝外转移无显著统计学差异（P>0.05）。这表明sICAM-1对于判断HCC患者是否存在肝外转移具有重要意义。有利于临床上尽早发现肝外病灶并予以积极治疗。在AFP阴性的11例HCC患者中，其中sICAM-1阳性3例，GGT-Ⅱ阳性8例，任一项阳性的检测为85％，两项均为阳性的检出率为86％。这充分表明sICAM-1和GGT-Ⅱ对AFP检测阴性HCC具有良好的补充作用，减少了AFP的漏诊概率，因此提示有必要进行三者的联合检测。在18例肝转移癌中，AF

关键词：肝细胞性肝癌甲胎蛋白 γ-谷氨酰转肽酶同工酶-Ⅱ 可溶性细胞间黏附分子-1 微转移 RT-PCR afpmrna

围手术期检测肝细胞癌患者外周血afpmrna和GPC3mRNA的临床意义

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围手术期检测肝细胞癌患者外周血AFPmRNA和GPC3mRNA的临床意义

作者：柏凯第三军医大学

学位级别：硕士

目的:手术切除、肝移植是目前治疗原发性肝癌的主要手段,术后仍有约70%的患者存在复发转移,原因是手术前即存在未检出的微转移灶,而微转移灶的肿瘤细胞长期处于免疫抑制未被发现。因此,早期发现外周血的肝癌细胞不仅对判断肝癌的转移、... 详细信息

目的:手术切除、肝移植是目前治疗原发性肝癌的主要手段,术后仍有约70%的患者存在复发转移,原因是手术前即存在未检出的微转移灶,而微转移灶的肿瘤细胞长期处于免疫抑制未被发现。因此,早期发现外周血的肝癌细胞不仅对判断肝癌的转移、复发具有重要价值,而且对指导临床治疗亦有重要意义。随着分子生物学技术的发展,近年来,具有高敏感性RT-PC已经被用于实体瘤微转移的检测。甲胎蛋白是肝细胞癌微转移检测常见的标志物,但是其敏感性只有39%-64%,特异性为76%-91%,而且正常肝细胞、肝炎和肝硬化等非肝细胞癌患者外周血中也可能检出甲胎蛋白,故对于其在微转移检测中的意义存在争议。另外,由于肿瘤细胞存在基因异质性,原发灶和转移灶的基因表达可能不一致,因此单标志物检测肝细胞癌微转移容易出现假阴性。GPC3是近年来发现的一种具有肝癌细胞特异性的基因,在肝癌组织中表达率显著升高,在非癌组织及癌旁组织均不表达,在非肝癌组织基本无表达,是目前发现的在AFP阴性肝癌中表达率最高的基因。该特性使其有可能成为一种新的理想的肝癌分子标记物。鉴于以上肝细胞癌微转移检测中存在的问题,我们推测:采用AFP和GPC3多标志物联合检测可能有助于提高微转移检测的敏感性和特异性。本研究在围手术期联合检测了肝细胞癌患者外周血中afpmrna和GPC3mRNA,以评价多标志物联合检测肝细胞癌微转移的可行性和早期发现肝癌患者的术后复发及转移的价值。方法:研究对象分为四组病例及健康志愿者:A组:39例,组织学证实为肝细胞癌;B组:19例,组织学证实为肝炎和肝硬化;C组:10例,组织学证实为肝血管瘤;D组:10例,组织学证实为转移性肝癌;E组;19例,为健康志愿者。运用巢式RT-PCR技术分别于术前、术后7天检测各组外周血中afpmrna和GPC3mRNA的表达,并随访19例行肝癌根治性切除的患者3-10个月。结果: 1.术前外周血微转移检测 39例肝癌患者术前外周血标本中,afpmrna、GPC3mRNA的检出率分别为53.8%(21/39)、61.3%(24/39)。afpmrna及GPC3mRNA的检出率和TNM分期、远处转移临床参数密切相关。另外,当肝癌直径大于5cm、多结节、伴门静脉癌栓,afpmrna

关键词：肝细胞癌 afpmrna GPC3mRNA 复发微转移巢式RT-PCR