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actg1基因变异致Baraitser-Winter综合征1例患儿的临床及遗传学分析

中华医学遗传学杂志 2024年第5期41卷 571-576页

作者：邱世彦李晓玲华英孙绍霞临沂市人民医院儿内科临沂276000

目的探讨1例Baraitser-Winter综合征(BWS)患儿的临床特征及遗传学病因。方法选取2022年4月8日就诊于临沂市人民医院儿科的1例BWS患儿作为研究对象。收集患儿的临床资料,采集患儿及其父母的外周血样,对患儿进行全外显子组测序(WES),用San... 详细信息

目的探讨1例Baraitser-Winter综合征(BWS)患儿的临床特征及遗传学病因。方法选取2022年4月8日就诊于临沂市人民医院儿科的1例BWS患儿作为研究对象。收集患儿的临床资料,采集患儿及其父母的外周血样,对患儿进行全外显子组测序(WES),用Sanger测序对候选变异进行家系验证,并对其进行生物信息学分析。结果患儿为5岁6个月男性,具有BWS的典型临床特征,包括先天性非肌源性睑下垂、拱形眉、宽人中、尖下巴,神经系统症状、小头畸形、发育落后、癫痫、耳聋,头颅MRI示额顶叶脑回粗大、脑白质减少、脑积水。WES显示患儿携带actg1基因c.430G>A(p.Asn144Tyr)杂合错义变异,Sanger测序显示其父母未携带相同的变异,提示为新发变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南,该变异被评级为可能致病性(PS2+PM2_Supporting+PP3_Moderate+PP4)。结论actg1基因c.430G>A(p.Asn144Tyr)杂合错义变异可能是上述患儿的遗传学病因。新变异的检出丰富了BWS的基因变异谱,为该病的临床诊断与遗传咨询提供了依据。

关键词： Baraitser-Winter综合征 actg1基因全外显子组测序

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人脑微血管内皮细胞actg1基因真核表达载体的构建及表达

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石河子大学学报（自然科学版） 2016年第6期34卷 -页

作者：曹树珠马勋陈朔丁剑石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

为了构建人脑微血管内皮细胞actg1基因的真核表达载体及在HEK293细胞中的表达,本研究采用RT-PCR方法,以单增李斯特菌侵染的人脑微血管内皮细胞提取的总RNA为模板,扩增actg1基因片段,TA克隆后经Sal I和Eco R I双酶切、测序等鉴定重组质粒... 详细信息

为了构建人脑微血管内皮细胞actg1基因的真核表达载体及在HEK293细胞中的表达,本研究采用RT-PCR方法,以单增李斯特菌侵染的人脑微血管内皮细胞提取的总RNA为模板,扩增actg1基因片段,TA克隆后经Sal I和Eco R I双酶切、测序等鉴定重组质粒,重组质粒再经双酶切,与真核表达载体p ACGFP连接,酶切鉴定后,Lipofactamine 2000转染HEK293细胞,荧光显微镜检测绿色荧光;同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定。结果表明:PCR扩增得到1128 bp的actg1基因片段,actg1-p ACGFP真核表达载体构建成功,转染24 h后,在荧光显微镜下可见绿色荧光,Western-blotting检测分析,其分子量约为68 k Da的融合蛋白,与预期的大小相符合,表明重组蛋白表达成功,本研究为单增李斯特菌与脑微血管内皮细胞c DNA文库中相互作用蛋白的筛选和鉴定奠定了基础。

关键词：人脑微血管内皮细胞 actg1基因 pACGFP HEK293细胞单增李斯特菌

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绵羊肌动蛋白γ家族基因的克隆、结构特征及组织表达分析

绵羊肌动蛋白γ家族基因的克隆、结构特征及组织表达分析

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作者：赵彩霞山东农业大学

学位级别：硕士

绵羊肌动蛋白γ家族(Actin-gamma)基因包括肌动蛋白γ1(actg1)、肌动蛋白γ2(actg2)。本试验以小尾寒羊和杜泊羊为试验材料,采用RT-PCR、RACE、生物信息学分析、荧光定量PCR、Western Blot等技术方法,克隆了绵羊actg1、actg2基因的全长... 详细信息

绵羊肌动蛋白γ家族(Actin-gamma)基因包括肌动蛋白γ1(actg1)、肌动蛋白γ2(actg2)。本试验以小尾寒羊和杜泊羊为试验材料,采用RT-PCR、RACE、生物信息学分析、荧光定量PCR、Western Blot等技术方法,克隆了绵羊actg1、actg2基因的全长序列,预测分析了其对应的蛋白序列特征和功能特性,检测了其在小尾寒羊和杜泊羊多种组织的表达,从mRNA水平和蛋白水平上探索了绵羊两个基因的表达特性。结果如下:(1)小尾寒羊actg1、actg2基因cDNA序列全长的克隆,包括保守区、3'UTR和5'UTR。编码的氨基酸长分别为375、376个氨基酸。并将所克隆的基因序列与NCBI数据库的预测序列进行了比对,actg1存在三个突变位点,actg2存在两个突变位点。(2)生物信息学分析显示,两蛋白为偏酸性蛋白,且结构比较稳定,亲水性比较好,actg1蛋白含有的异亮氨酸(7%)比actg2(8%)少,因此actg1蛋白比actg2亲水性更强。两蛋白的流动性比较大,均没有跨膜结构域,含有多个磷酸化位点和糖基化位点,预测为非分泌性蛋白质。二级结构主要以无规则卷曲为主分别占63.2%、64.9%。三级结构预测,actg1三级结构最佳模板为人类肌动球蛋白-原肌球蛋白(cytoplasmic actomyosin,ATM)复合物,actg2预测其三级结构为兔的α-骨骼肌肌动蛋白(Actin,alpha skeletal muscle)。actg2为该结构蛋白中Chain:a,b,c,d,e,f,g,h,i,j.中的b链(PDB id:3J8K.1.B)(3)多种氨基酸序列比对显示:γ肌动蛋白的氨基酸序列在所选用的比对物种中高度保守。系统进化树显示,绵羊的actg1蛋白与山羊、人类、野猪遗传距离最近。绵羊actg2蛋白与山羊、野猪、野牛、黑线仓鼠、鼹鼠、狐蝠遗传距离最小,与鸿雁遗传距离最远。上述结果表明,两蛋白均与哺乳动物中遗传关系较近。(4)采用qRT-PCR试验方法检测actg1和actg2基因在小尾寒羊和杜泊羊多个组织中的m RNA的表达水平。显示,actg1在胰脏、胃组织中高表达,显著高于其他组织(pactg1基因几乎在所有组织中均表达。actg2基因在心脏、脾脏中高表达,显著高于其他组织(pactg1蛋白,在小尾寒羊的肋间肌和臂三头肌高表达,在杜泊羊中在肋间肌、臂三头肌、肺脏组织中高表达。actg2蛋白在所有之中均表达,在背最长肌、肋间肌、肺组织表达量最高,品种间表达差异不显著。综上所述,本试验成功克隆了小尾寒羊的actg1、actg2基因的cDNA全长序列,从不同的角度对两种蛋白的结构、功能和组织表达特异性进行了分析,旨在从分子水平探究两个基因的功能特点。为后续探究基因的功能和分子育种提供基本的理论依据。

关键词：小尾寒羊杜泊羊 actg1基因 actg2基因组织表达

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