人脑微血管内皮细胞ACTG1基因真核表达载体的构建及表达

作     者：曹树珠 马勋 陈朔 丁剑 CAO Shuzhu;MA Xun;CHEN Shuo;DING Jian

作者机构：石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 

出 版 物：《石河子大学学报（自然科学版）》 (Journal of Shihezi University(Natural Science))

年 卷 期：2016年第34卷第6期

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学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 090601[农学-基础兽医学] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071005[理学-微生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31160506) 

主　　题：人脑微血管内皮细胞 ACTG1基因 pACGFP HEK293细胞 单增李斯特菌 

摘      要：为了构建人脑微血管内皮细胞ACTG1基因的真核表达载体及在HEK293细胞中的表达,本研究采用RT-PCR方法,以单增李斯特菌侵染的人脑微血管内皮细胞提取的总RNA为模板,扩增ACTG1基因片段,TA克隆后经Sal I和Eco R I双酶切、测序等鉴定重组质粒,重组质粒再经双酶切,与真核表达载体p ACGFP连接,酶切鉴定后,Lipofactamine 2000转染HEK293细胞,荧光显微镜检测绿色荧光;同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定。结果表明:PCR扩增得到1128 bp的ACTG1基因片段,ACTG1-p ACGFP真核表达载体构建成功,转染24 h后,在荧光显微镜下可见绿色荧光,Western-blotting检测分析,其分子量约为68 k Da的融合蛋白,与预期的大小相符合,表明重组蛋白表达成功,本研究为单增李斯特菌与脑微血管内皮细胞c DNA文库中相互作用蛋白的筛选和鉴定奠定了基础。