检索结果-南通市图书馆

睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996类固醇脱氢酶3α-HSD的高效表达与纯化

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业大学学报 2013年第1期18卷 142-146页

作者：肖琳薛强邹明强冯叙桥韦娜何田田孙芳芳沈阳农业大学食品学院沈阳110161 中国检验检疫科学研究院北京100123

利用分子克隆的方法扩增与克隆睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996的3α-HSD基因,构建以pET-15b为载体的表达工程菌,IPTG诱导蛋白表达,通过优化表达菌的最佳表达条件得到最大表达量的目的蛋白。诱导后将工程菌裂解,通过硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层... 详细信息

利用分子克隆的方法扩增与克隆睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996的3α-HSD基因,构建以pET-15b为载体的表达工程菌,IPTG诱导蛋白表达,通过优化表达菌的最佳表达条件得到最大表达量的目的蛋白。诱导后将工程菌裂解,通过硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析,分子筛分离进行纯化,并测定纯化后蛋白的酶活性。结果表明:1)克隆获得了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因并实现了异源表达;2)工程菌的最佳表达条件为:37℃培养,0.6mmol/L IPTG诱导4h,培养基中Zn2+终浓度为0.1mmol/L;3)表达工程菌裂解后用60%硫酸铵沉淀,亲和层析和分子筛分离后得到了纯度高达99%的目的蛋白,纯化后的蛋白保持酶活性。本试验成功克隆表达了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因,建立了3α-HSD的高效表达与纯化方法,为相应抗体的制备与水资源中的类固醇激素检测方法的建立提供基础。

关键词：睾丸酮丛毛单胞菌 3α-HSD 诱导表达纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

反义3α-HSD/CR基因转化水稻的研究

反义3α-HSD/CR基因转化水稻的研究

作者：符雷福建农林大学

学位级别：硕士

随着植物细胞全能性的发现和转基因技术的迅猛发展，越来越多的转基因植物出现在人们的视野里，在关注转基因植物带来的巨大经济效益的时候，同时也出现了一些转基因植物安全性方面的问题，加上至今转基因植物的安全性还没有科学的定论... 详细信息

随着植物细胞全能性的发现和转基因技术的迅猛发展，越来越多的转基因植物出现在人们的视野里，在关注转基因植物带来的巨大经济效益的时候，同时也出现了一些转基因植物安全性方面的问题，加上至今转基因植物的安全性还没有科学的定论，其安全性问题更加受到人们的重视。目前有关转基因植物安全性基础研究的数据十分有限，且在安全性方面主要是以预防为主，而在转基因植物出现安全性问题后进行及时治理方面的基础研究数据几乎是空白。本研究将本实验室已构建的含反义3α-HSD/CR基因的农杆菌，利用农杆菌介导法转入到含正义3α-HSD/CR基因且遗传性状稳定的水稻中，同时用本实验室已构建的3α-HSD/CR基因的原核表达载体来获得蛋白和多克隆抗体，并对转基因水稻中的3α-HSD/CR蛋白的表达量和其降解胆固醇效率进行分析检查。得到以下结果： 1、对农杆菌介导法浸染水稻明恢86愈伤体系中的乙酰丁香酮（AS）和培养温度进行优化，优化后的AS浓度为300μg/L;培养温度为31℃。 2、优化含pET29a-3α-HSD/CR载体的大肠杆菌表达体系，优化后的条件为：IPTG的诱导浓度为0.6mmol/L;诱导温度为31℃;培养时间为12h。 3、对获得的多克隆抗体进行效价检测，效价达到1:5000。 4、对转基因水稻的根进行ELISA检测，以非转基因水稻为对照，检测结果：水稻A的表达量为对照的2.4倍;水稻B的表达量与对照差异不显著;水稻C的表达量与对照差异不显著。 5、通过对转基因水稻进行胆固醇降解实验，严格设立阴性对照，检测结果：水稻A的降解率约为对照的27倍;水稻B的降解率与对照差异不显著;水稻C的降解率与对照差异不显著。

关键词： 3α-HSD 转基因水稻反义基因转基因安全性

转3α-HSD基因水稻后代对甾体化合物的降解以及蛋白质组学研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

转3α-HSD基因水稻后代对甾体化合物的降解以及蛋白质组学研究

作者：郭建超福建农林大学

学位级别：硕士

以转入降解甾类物质关键酶基因3α-HSD的水稻为试验材料，进行降解甾类物质能力的检测，研究转基因水稻在灌浆期籽粒淀粉、蛋白的积累情况和农艺性状的变化，以及转基因水稻孕穗期时进行蛋白质组学分析，主要结果如下： 1.通过测定水稻... 详细信息

以转入降解甾类物质关键酶基因3α-HSD的水稻为试验材料，进行降解甾类物质能力的检测，研究转基因水稻在灌浆期籽粒淀粉、蛋白的积累情况和农艺性状的变化，以及转基因水稻孕穗期时进行蛋白质组学分析，主要结果如下： 1.通过测定水稻不同生长时期甾类物质的降解情况表明：各世代不同株系降解甾类物质的能力都显著高于CK，T株系降解能力最高(18.10%);孕穗期水稻降解能力最高，抽穗期水稻降解能力最弱;T在分蘖期(23.83%)和孕穗期(25.84%)时降解力都最强。 2.通过检测根部3α-HSD蛋白的表达量发现T代显著高于T和T代，分蘖期表达量显著高于孕穗期和抽穗期，四个株系目的蛋白表达量都显著高于CK，T株系根部3α-HSD蛋白表达量最高为2.36mg/g。 3.研究灌浆期各株系籽粒中淀粉和蛋白含量的变化发现：T、T和T株系淀粉变化趋势与CK基本一致，其它株系与CK变化趋势都有不同的差异;最终淀粉含量除了T和T显著高于CK以外，其它株系跟CK无显著差异;T、T株系蛋白变化和CK相似，其他株系与CK都有不同程度的差异;最终株系3和株系5的蛋白含量都高于CK，株系1和株系6均低于CK。 4.对转基因水稻部分农艺性状的研究，发现都有不同程度的变异。剑叶长和总粒数的变异不明显，株高变异较大，所有株系都有矮化趋势。在T7代许多农艺性状都优于CK。 5.对转基因水稻高世代进行降解能力测试，发现T株系降解能力显著高于CK和其它株系，从蛋白质组学发现该材料根系蛋白与CK有22个表达差异点(20个被鉴定)，蛋白点11和17在T中的表达丰度呈下调趋势，其余点为上调表达。这些差异蛋白中，参与物质和能量代谢相关的蛋白有9个，防御反应相关的蛋白有5个，与抗性相关的蛋白有2个，跟活性甲基循环和转移相关的蛋白有2个。

关键词： 3α-HSD 转基因水稻甾类物质降解表达量

转3α-HSD基因水稻后代降解胆固醇的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

转3α-HSD基因水稻后代降解胆固醇的研究

作者：侯黎丽福建农林大学

学位级别：硕士

以转入降解甾类物质关键酶基因3α-HSD的水稻为试验材料,进行降解胆固醇能力的检测;研究转基因水稻在添加胆固醇后农艺性状及品质性状的变化,以及转基因水稻差异蛋白质组学分析,得出主要结果如下: 1.本试验通过对转基因水稻后代及... 详细信息

以转入降解甾类物质关键酶基因3α-HSD的水稻为试验材料,进行降解胆固醇能力的检测;研究转基因水稻在添加胆固醇后农艺性状及品质性状的变化,以及转基因水稻差异蛋白质组学分析,得出主要结果如下: 1.本试验通过对转基因水稻后代及对照降解胆固醇能力的研究表明:在不同浓度下,转基因水稻对胆固醇降解的总趋势基本一致,都是呈先增加后降低的趋势,而且均在分蘖时期达到最高降解率。转基因水稻对添加3mg/L胆固醇的降解效果最好,对2mg/L胆固醇的降解效果次之,对1mg/L胆固醇的降解效果最弱。转基因水稻6个株系的降解率均显著高于对照,其中株系3、5的降解效果最好。 2.胆固醇影响下转基因水稻后代农艺性状的研究表明:胆固醇浓度对农艺性状影响比较大,而且农艺性状的变异也比较复杂。胆固醇浓度为3mg/L时,植株表现为株高较高,剑叶长势好,分蘖数和有效分蘖最多,但结实率偏低。当胆固醇浓度低于3mg/L时,植株株型较小,但结实率、千粒重较高。当胆固醇浓度高于3mg/L时,植株株型较小,但结实率、千粒重偏低。转基因水稻6个株系的株高、穗长、剑叶长、千粒重都低于对照。 3.胆固醇影响下转基因水稻后代品质性状的研究表明:转基因水稻主要品质性状由于胆固醇的影响都发生了不同程度的变化。特别是转基因水稻各株系籽粒的谷甾醇含量随外界胆固醇浓度的增加而增加,但是均显著低于对照,这与3α-HSD基因的功能特性有关,是本试验所希望得到的。同时,由于胆固醇浓度的增加,籽粒中可溶性蛋白的含量也发生了变化,但除个别株系外,转基因水稻与对照间无显著差异。 4.根据双向电泳分析结果,从双向电泳凝胶上找出9个差异点,进行MALDI-TOF-MS/MS分析,共有6个蛋白得到鉴定。按其功能分为4类:第一类,参与光合反应;第二类,防卫蛋白;第三类,参与抗性反应;第四类,参与能量代谢。

关键词：转基因水稻 3α-HSD 胆固醇降解

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD的研究进展

天津农业科学 2014年第6期20卷 54-59页

作者：吴兴海刘靖靖王建华山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心山东青岛266002

3α-HSD(3α-hydroxysteroid dehydrogenase)是睾丸酮丛毛单胞菌在以类固醇为唯一碳源时,产生的一种类固醇脱氢酶,也是降解类固醇的关键酶。本文对睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因的调控、酶蛋白结构与功能等生物学特点进行阐述,总结了3α-... 详细信息

3α-HSD(3α-hydroxysteroid dehydrogenase)是睾丸酮丛毛单胞菌在以类固醇为唯一碳源时,产生的一种类固醇脱氢酶,也是降解类固醇的关键酶。本文对睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因的调控、酶蛋白结构与功能等生物学特点进行阐述,总结了3α-HSD蛋白的两种获得途径:天然提取和人工诱导表达途径。从技术可行性、实用性和成本控制等几个方面,分析比对二者的优势和不足。介绍和展望了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD在血清总胆汁酸测定、转基因生物工程、环境或食品中类固醇类激素检测及环境修复等领域的研究现状和应用前景。

关键词：睾丸酮丛毛单胞菌 3α-HSD 研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

3α-HSD单克隆抗体的制备及其鉴定

天津农业科学 2014年第5期20卷 31-35页

作者：杨伟克吴兴海王建华山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心山东青岛266002

为制备抗3α-HSD蛋白单克隆抗体(MAb),以已表达纯化的高纯度3α-HSD蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,经过免疫和细胞融合后筛选出特异性的抗3α-HSD蛋白单克隆抗体,成功冻存35株IgG类型阳性杂交瘤细胞株。对14号和20号Ant... 详细信息

为制备抗3α-HSD蛋白单克隆抗体(MAb),以已表达纯化的高纯度3α-HSD蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,经过免疫和细胞融合后筛选出特异性的抗3α-HSD蛋白单克隆抗体,成功冻存35株IgG类型阳性杂交瘤细胞株。对14号和20号Anti-3α-HSD进行亲和性测试,发现其与可溶性抗原蛋白的亲和常数分别为3.7E+09和4.2E+09,二者可与抗原牢固结合,具有良好的亲和性。

关键词： 3α-HSD 单克隆抗体制备鉴定

抗3α-HSD单克隆抗体制备方法的初步研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

长春理工大学学报（自然科学版） 2013年第5期36卷 157-160页

作者：王雅文陈华林王维马帅王一东冀伟长春理工大学生命科学技术实验中心长春130022

为了利用杂交瘤技术制备抗3α-HSD单克隆抗体,用表达纯化的3α-HSD作为抗原免疫Balb/c小鼠,获得针对该抗原致敏的B淋巴细胞,并用获得的B淋巴细胞与SP2/0进行细胞融合,得到杂交瘤细胞株,在ELISA间接法筛选出阳性孔的基础上,进行亚克隆,... 详细信息

为了利用杂交瘤技术制备抗3α-HSD单克隆抗体,用表达纯化的3α-HSD作为抗原免疫Balb/c小鼠,获得针对该抗原致敏的B淋巴细胞,并用获得的B淋巴细胞与SP2/0进行细胞融合,得到杂交瘤细胞株,在ELISA间接法筛选出阳性孔的基础上,进行亚克隆,筛选出能稳定分泌抗3α-HSD单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果得到能分泌抗3α-HSD单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备过程中发现很多特殊的现象,如杂交瘤细胞上清与单抗腹水效价过低,但多抗血清效价较高等。文章对在单抗的制备过程中遇到的问题做了初步分析,为之后制备抗3α-HSD单克隆抗体的研究提供技术支持。

关键词： 3α-HSD 杂交瘤技术单克隆抗体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

3α-HSD基因的克隆和表达

3α-HSD基因的克隆和表达

作者：田甜吉林大学

学位级别：硕士

3α-羟类固醇脱氢酶（3α-hydroxysteroid dehydrogenase, 3α-HSD）是睾酮丛毛单胞菌分泌的一种类固醇脱氢酶,临床上用3α-HSD作为工具酶来测定人血清中的总胆汁酸（TBA）浓度。本实验首先从睾酮丛毛单胞菌中得到DNA,经PC... 详细信息

3α-羟类固醇脱氢酶（3α-hydroxysteroid dehydrogenase, 3α-HSD）是睾酮丛毛单胞菌分泌的一种类固醇脱氢酶,临床上用3α-HSD作为工具酶来测定人血清中的总胆汁酸（TBA）浓度。本实验首先从睾酮丛毛单胞菌中得到DNA,经PCR获得大量3α-HSD DNA,将目的基因插入原核表达载体pET28a（+）的启动子下游,构建了原核表达质粒pET28a（+）-3α-HSD。重组质粒pET28a（+）-3α-HSD用氯化钙法转化入宿主菌BL21（DE3）中,筛选出含重组质粒的基因工程菌。工程菌经IPTG诱导表达和酶活性测定,证明原核重组表达质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中表达了目的蛋白,经IPTG诱导后,其菌的裂解液具有3α-羟类固醇脱氢酶的活性。

关键词： 3α-HSD 基因克隆基因表达

睾丸酮诱导下的不同菌种中3α-HSD的表达及含量检测

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

长春理工大学学报（自然科学版） 2007年第4期30卷 63-65页

作者：于源华刁昱文马德章于航熊光明侯玥长春理工大学生命科学技术学院长春130022

3-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)是睾酮丛毛单胞菌分泌的一种类固醇脱氢酶。本实验利用已构建的pET-3α-HSD转化BL21,得到BL21pET-3α-HSD,经IPTG诱导表达提纯3α-HSD蛋白,建立了3α-HSD蛋白标准曲线。应用... 详细信息

3-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)是睾酮丛毛单胞菌分泌的一种类固醇脱氢酶。本实验利用已构建的pET-3α-HSD转化BL21,得到BL21pET-3α-HSD,经IPTG诱导表达提纯3α-HSD蛋白,建立了3α-HSD蛋白标准曲线。应用ELISA方法检测在睾丸酮的诱导下,三种工程菌C.testosterone,Ca3,BL21PET-3 hsd对3α-HSD的表达量,经过对比研究发现,在三种工程菌中,C.testosterone更宜适合作为检测环境中载体类化合物的指示菌种,并且得出3α-HSD是C.testosterone和Ca3在降解载体化合物的关键酶,在检测中可作为目标蛋白。

关键词： 3α-HSD 睾丸酮诱导表达 ELISA