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长时间低温处理有助于加强黄瓜花叶病毒CMV-bF 2b基因的多态性

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植物病理学报 2010年第6期40卷 561-567页

作者：侯焱张兴桃庄木李艳红首都师范大学生命科学学院北京100048 中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081

将被黄瓜花叶病毒CMV-bF株系侵染的三生烟(Nicotiana tabacum *** NN)的不同单株分成两组分别置于高温(30±5℃)和低温(10±5℃)条件下,观察和分析CMV-bF侵染30、80 d时植株的症状表现及CMV2b基因的序列变异规律。结果表明:侵染30d时,... 详细信息

将被黄瓜花叶病毒CMV-bF株系侵染的三生烟(Nicotiana tabacum *** NN)的不同单株分成两组分别置于高温(30±5℃)和低温(10±5℃)条件下,观察和分析CMV-bF侵染30、80 d时植株的症状表现及CMV2b基因的序列变异规律。结果表明:侵染30d时,在高温环境中的植株表现出畸形叶片较多、病毒症状较严重的现象,而低温培养的植株细弱,部分叶片大面积白化;2b基因DNA序列的多态性也以高温处理组略高于低温组,但差异未达到显著水平。侵染80 d时,高温组植株的病毒症状有所恢复,畸形叶片减少,而低温组植株除白化现象更严重外,畸形叶片增多;2b基因的多态性以低温处理组明显高于高温组,且达到显著水平(PbF2b基因的多态性,而且2b基因的多态性可能与植株的病毒症状表现相关。

关键词：黄瓜花叶病毒 2b基因多态性病毒症状低温

重组黄瓜花叶病毒2b基因PVX侵染性载体的稳定性分析

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植物病理学报 2006年第5期36卷 420-425页

作者：庄木王晓武方智远谢丙炎中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081

本研究利用北京甘蓝CMV分离物(CMV-bG)全长2b基因,构建了含其正义和反义序列的PVX侵染性载体pVX2bS和pVX2bAS,并进行了它们与PVX侵染性载体间的共侵染稳定性实验。结果表明:pVX2bS和pVX2bAS能侵染本氏烟、SR1、Sam sun NN烟草、Shepody... 详细信息

本研究利用北京甘蓝CMV分离物(CMV-bG)全长2b基因,构建了含其正义和反义序列的PVX侵染性载体pVX2bS和pVX2bAS,并进行了它们与PVX侵染性载体间的共侵染稳定性实验。结果表明:pVX2bS和pVX2bAS能侵染本氏烟、SR1、Sam sun NN烟草、Shepody马铃薯和中蔬5号番茄,与pSfinx相比,表现不同程度的症状延迟效应;pVX2bS和pVX2bAS在22℃/16℃(昼/夜温度)条件下,接种SR1烟草45d仍可检测到重组载体的存在;pVX2bS和pVX2bAS菌液混合接种15d后只能检测到正义或反义一种载体的随机表达,二者交互接种,后接种的一方不能表达。

关键词：黄瓜花叶病毒 2b基因 PVX侵染性载体侵染稳定性

口蹄疫病毒2b基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2008年第9期21卷 756-758页

作者：崔丽瑾王兴龙梅英武任林柱闫广谋张辉郎需龙段小宇路浩吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2b基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在bHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2b基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染bHK-21细胞,检测绿色荧光... 详细信息

目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2b基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在bHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2b基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染bHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2b基因转录水平。结果经双酶切及PCR鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2b基因的转录。结论已成功构建了FMDV2b基因GFP融合表达质粒,并在bHK-21细胞中获得了表达。

关键词：口蹄疫病毒 2b基因绿色荧光蛋白融合表达

侵染广东辣椒的黄瓜花叶病毒的CP及2b基因序列分析

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华南农业大学学报 2006年第1期27卷 51-54页

作者：许东林周国辉宋晓兵华南农业大学植物病毒研究室广东广州510642

对侵染广东省阳西县田间辣椒的黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic wirus，CMV）的CP及2b基因进行序列分析，结果表明其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为90.9％～93.8％和76.1％～76．9％。氨基酸同源率分别为92．... 详细信息

对侵染广东省阳西县田间辣椒的黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic wirus，CMV）的CP及2b基因进行序列分析，结果表明其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为90.9％～93.8％和76.1％～76．9％。氨基酸同源率分别为92．7％～97．7％和72．4％～78．1％；其2b基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ之间的核苷酸同源率分别为83．9％～90．2％和64．0％～67．7％，氨基酸同源率分别为79．3％～85．7％和50.5％～53.5％,由此确认该CMV分离物属于亚组Ⅰ成员．此外，CMV亚组Ⅰ成员的CP及2b基因中分别具有一段长为102bp及54bp的高度保守序列，这为转基因诱导寄主转录后基因沉默（post-transcriptional gene silencing，PTGS）CMV育种研究提供了参考．

关键词：辣椒黄瓜花叶病毒 CP基因 2b基因序列分析

短发夹结构RNA对口蹄疫病毒2b基因瞬时表达的抑制

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中国兽医学报 2008年第5期28卷 532-535页

作者：崔丽瑾王兴龙任林柱伍晓慧郎需龙张辉梅英武李晓燕卜朝阳吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 河北农业大学海洋学院河北秦皇岛066003

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(FMDV)2b基因的抑制作用,针对WFL株FMDV的2b基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2b融合表达质粒瞬时共转... 详细信息

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(FMDV)2b基因的抑制作用,针对WFL株FMDV的2b基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2b融合表达质粒瞬时共转染bHK-21细胞,以荧光显微镜和流式细胞仪检测荧光表达量的变化,以实时定量RT-PCR法检测对2b基因mRNA的抑制作用。结果表明,本试验所构建的针对2b基因的shRNA表达载体可以在bHK-21细胞中抑制2b基因的瞬时表达。

关键词： FMDV RNA干扰 2b基因

我国不同CMV分离物2b基因片段的RT-PCR扩增及其序列比较

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植物病理学报 2003年第2期33卷 146-150页

作者：庄木王晓武谢丙炎郑文光冯兰香方智远中国农业科学院蔬菜花卉研究所生物技术室北京100081

本研究根据黄瓜花叶病毒2b基因的保守序列设计引物,利用一步RT-PCR技术对多个不同寄主和不同地理来源的黄瓜花叶病毒分离物的2b基因片段进行扩增,获得了含该基因全长约90％的cDNA片段(300bp)。序列测定与比较分析结果表明,国内不同CMV... 详细信息

本研究根据黄瓜花叶病毒2b基因的保守序列设计引物,利用一步RT-PCR技术对多个不同寄主和不同地理来源的黄瓜花叶病毒分离物的2b基因片段进行扩增,获得了含该基因全长约90％的cDNA片段(300bp)。序列测定与比较分析结果表明,国内不同CMV分离物2b基因片段核酸序列同源性达93％以上,推测的氨基酸序列同源性超过90％,且均属于亚组Ⅰ。

关键词： CMV分离物 2b基因基因片段 RT-PCR扩增黄瓜花叶病毒氨基酸序列同源性

口蹄疫病毒2b基因的生物信息学分析及其siRNA真核表达系统的建立

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畜牧与兽医 2010年第5期42卷 51-54页

作者：崔丽瑾王兴龙段小宇刘铠党源郎需龙李晓艳军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 吉林大学人兽共患病研究所吉林长春130062 吉林省华康牧业有限责任公司吉林四平136100 内蒙古民族大学内蒙古通辽028000 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2b基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2b基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫2b基因的真核表达系统,为进一步研究靶向2b基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 2b基因序列分析 siRNA 真核表达系统

黄瓜花叶病毒2b基因在大肠杆菌中的表达及其自激活特性检测

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热带作物学报 2010年第7期31卷 1115-1119页

作者：王小明王健华冯团诚张雨良吴育鹏刘志昕海南大学环境与植物保护学院海南儋州571737 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101

2b蛋白是黄瓜花叶病毒与植物寄主相互作用的一种重要多功能蛋白。用PCR方法扩增目的基因2b,经酶切、连接将其克隆至带有λcI基因的pbT载体上,构建与λcI基因融合的表达载体pbT-CMV 2b,转化大肠杆菌XL1-blue MRF′报告菌株,用IPTG诱导表... 详细信息

2b蛋白是黄瓜花叶病毒与植物寄主相互作用的一种重要多功能蛋白。用PCR方法扩增目的基因2b,经酶切、连接将其克隆至带有λcI基因的pbT载体上,构建与λcI基因融合的表达载体pbT-CMV 2b,转化大肠杆菌XL1-blue MRF′报告菌株,用IPTG诱导表达黄瓜花叶病毒2b基因。Western blot分析结果表明,2b-λcI融合蛋白已成功表达,大小约为38 ku,与预期大小一致。pbT-CMV 2b与空质粒pTRG共转化XL1-blue MRF′报告菌株,同时以pbT空质粒和pTRG-Gal11p共转化作为对照。结果显示,CMV 2b蛋白未产生自激活作用,从而为利用大肠杆菌双杂交系统筛选与2b蛋白相互作用的蛋白质研究奠定基础。

关键词：黄瓜花叶病毒 2b基因自激活大肠杆菌双杂交

沉默抑制子CMV 2b基因的克隆及其反向重复植物表达载体的构建

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激光生物学报 2010年第3期19卷 347-352页

作者：宋培培李爽檀根甲贾琳丁菲江彤安徽农业大学植物保护学院安徽合肥230036

从安徽亳州采集表现明显CMV症状的烟草样本,取ELISA检测阳性反应最强的样本提取总RNA。设计特异性引物扩增CMV RNA2部分片段,克隆并测序。其中包含的2b基因全长336个核苷酸,编码111个氨基酸。将来源于安徽烟草的CMV 2b基因与其它CMV 2b... 详细信息

从安徽亳州采集表现明显CMV症状的烟草样本,取ELISA检测阳性反应最强的样本提取总RNA。设计特异性引物扩增CMV RNA2部分片段,克隆并测序。其中包含的2b基因全长336个核苷酸,编码111个氨基酸。将来源于安徽烟草的CMV 2b基因与其它CMV 2b基因进行序列比对,结果表明,来源于安徽烟草的CMV2b基因与来源于韩国的2b基因AF033667的核苷酸序列相似性最高,达98.8%。构建2b基因系统关系树,也表明来源于安徽烟草的CMV 2b基因与AF033667亲缘关系最近。以安徽CMV 2b为模板,分别扩增大小约为300 bp的正向片段CMV 2b(r)和反向片段CMV 2b(i)。先后将反向片段CMV 2b(i)和正向片段CMV 2b(r)分别插入载体pSK-In所含intron两侧,获得重组质粒pSK-2b(r)-In-2b(i)。再将含intron的正反向片段插入pbIN438,最终得到含CMV 2b部分序列反向重复的植物表达载体pbIN-2b(r)-In-2b(i)。

关键词： CMV 2b基因沉默抑制子反向重复表达载体构建