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24-脱氢胆固醇还原酶对Aβ25-35诱导的BV-2细胞极化状态的影响

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神经解剖学杂志 2020年第5期36卷 560-564页

作者：祖恒兵刘新颖姚恺复旦大学附属金山医院神经内科上海201508 复旦大学附属金山医院内镜中心上海201508

目的:研究24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)在β淀粉样蛋白毒性片段(Aβ25-35)诱导的BV-2细胞极化状态中的调控作用。方法:利用表达DHCR24的重组慢病毒(Lenti-DHCR24)感染BV-2细胞,Western Blot检测DHCR24蛋白的表达;进一步利用Aβ25-35诱导... 详细信息

目的:研究24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)在β淀粉样蛋白毒性片段(Aβ25-35)诱导的BV-2细胞极化状态中的调控作用。方法:利用表达DHCR24的重组慢病毒(Lenti-DHCR24)感染BV-2细胞,Western Blot检测DHCR24蛋白的表达;进一步利用Aβ25-35诱导BV-2细胞极化,通过Western Blot方法检测Lenti-DHCR24对BV-2细胞中诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)表达的影响,用ELISA法检测Lenti-DHCR24对BV-2细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)和转化生长因子-β(TGF-β)水平的影响。结果:Aβ25-35显著地上调BV-2细胞中i NOS、IL-1β和TNF-α表达,降低Arg-1、IL-4和TGF-β的水平(P 24所逆转(P 24可以抑制BV-2细胞向M1型小胶质细胞转化,促进其向M2型转化。

关键词：阿尔茨海默病 24-脱氢胆固醇还原酶 Aβ25-35 BV-2细胞

24-脱氢胆固醇还原酶抗氧化应激作用的功能结构域鉴定

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中国生物工程杂志 2009年第5期29卷 50-54页

作者：芦秀丽刘剑利曹向宇侯芳芳高兵辽宁大学生命科学院沈阳110036 沈阳医学院基础医学院沈阳110034

24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)具有抗氧化应激引起的细胞凋亡的作用,但其机制尚不清楚。先前的实验数据显示在细胞水平DHCR24可能具有清除过氧化氢的作用。在生物信息学方法预测的基础上,构建了以pIVEX2.4a为载体的人DHCR24基因及其两种... 详细信息

24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)具有抗氧化应激引起的细胞凋亡的作用,但其机制尚不清楚。先前的实验数据显示在细胞水平DHCR24可能具有清除过氧化氢的作用。在生物信息学方法预测的基础上,构建了以pIVEX2.4a为载体的人DHCR24基因及其两种功能域缺失的突变型重组表达载体pIVEX2.4a-DHCR24(野生型)、pIVEX2.4a-ORD(预测氧化还原功能域保留型)和pIVEX2.4a-CTR(碳端保留型),通过体外快速翻译表达系统RTS500进行体外大量表达,经提纯得到各种DHCR24纯化蛋白。Fluoro CatalaseTM荧光过氧化氢酶体外检测实验首次证明野生型DHCR24具有较强的过氧化氢清除能力,且DHCR24-ORD突变型具有与野生型同等强度的过氧化氢清除活性,而DHCR24-CTR突变型则失去了此能力,提示DHCR24的氧化还原功能域在其清除过氧化氢作用方面起着重要作用。为了进一步研究其抗氧化应激作用的生理学意义,利用双重免疫荧光染色法对DHCR24在细胞内的定位情况进行了调查。结果表明,DHCR24定位于内质网,提示其内质网的定位可能与其抗氧化应激作用有关。

关键词： 24-脱氢胆固醇还原酶抗氧化应激功能域鉴定细胞内定位

24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

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中国比较医学杂志 2010年第1期20卷 36-40页

作者：全雄志董伟曹兴水张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴... 详细信息

目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴定Dhcr24转基因小鼠的基因型,RT-PCR和Western Blot检测基因表达水平,血生化检测仪检测转基因小鼠血生化指标的改变。结果建立了2个不同表达水平的Dhcr24转基因小鼠品系,转入的Dhcr24基因在肝和脾组织中的表达高于内源的Dhcr24。血生化检测证实:乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和血肌酐(SCr)较野生型小鼠明显降低,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和碱性磷酸酶(ALP)较野生型小鼠明显增加,并且Dhcr24转基因雌鼠的体重比野生型小鼠明显降低,均有显著差异。但Dhcr24转基因雄鼠各项指标与野生型小鼠相比没有显著差异。结论成功建立了全身表达Dhcr24转基因小鼠,并证实Dhcr24基因对雌性小鼠的体重和血生化指标,包括LDH,TP,Alb,SCr,HDL-c and ALP具有明显的影响。

关键词： 24-脱氢胆固醇还原酶转基因小鼠血生化指标

24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

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24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

载脂蛋白M通过B类Ⅰ型清道夫受体上调24-脱氢胆固醇还原酶发挥抗氧化应激作用

实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：全雄志董伟曹兴水张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

关键词： 24-脱氢胆固醇还原酶转基因小鼠血生化指标

来源： cnki会议评论

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载脂蛋白M通过B类Ⅰ型清道夫受体上调24-脱氢胆固醇还原酶发挥抗...

作者：张友浦苏州大学

学位级别：硕士

目的:载脂蛋白M(apoM)是高密度脂蛋白(HDL)的组成部分之一,且前期研究表明apoM可能通过24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)途径抑制TNF-α诱导的白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达。本研究旨在探究apoM是否通过DHCR24... 详细信息

目的:载脂蛋白M(apoM)是高密度脂蛋白(HDL)的组成部分之一,且前期研究表明apoM可能通过24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)途径抑制TNF-α诱导的白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达。本研究旨在探究apoM是否通过DHCR24途径发挥抗炎作用。方法:(1)应用阴性对照慢病毒和携带apoM基因的慢病毒分别转染***926细胞。获得稳定表达apoM的细胞株后提取总RNA和蛋白,检测携带apoM基因的慢病毒感染的***926细胞(apoM细胞)和阴性对照慢病毒感染的***926细胞(apoM细胞)中apoM mRNA与蛋白表达水平。(2)将病毒转染后的apoM细胞和apoM细胞传代培养,并各以6×10个/ml的密度均匀铺入两块六孔板中(即对照组与实验组),待细胞完全贴壁后,对照组与实验组中分别加入PBS与10ng/ml的TNF-α处理3h、6h,均提取总RNA检测B类Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)、DHCR24以及IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平。(3)将病毒转染后的apoM细胞和apoM细胞传代培养,并各以6×10个/ml的密度均匀铺入四块六孔板中(即对照组A、B与实验组C、D),待细胞完全贴壁后,对照组A、实验组C与对照组B、实验组D中分别加入无水乙醇与10 uM的BLT-1(SR-B1抑制剂)处理12h,然后在所有的对照组与实验组中均加入10 ng/ml的TNF-α处理6h,均提取总RNA检测DHCR24、IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平。结果:(1)apoM细胞中apoM mRNA和蛋白表达水平显著高于apoM细胞。(2)生理情况下或炎症刺激作用下,apoM细胞中SR-B1、DHCR24 mRNA表达水平显著高于apoM细胞;生理情况下,apoM细胞与apoM细胞的IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平无统计学意义;炎症刺激作用下,apoM细胞中IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平显著低于apoM细胞。(3)apoM细胞中DHCR24 mRNA表达水平显著高于apoM细胞;apoM细胞经BLT-1处理12后,DHCR24 mRNA表达水平显著下降,而IL-1β、MCP-1的mRNA表达水平并无统计学意义。结论:apoM能显著增加SR-B1和DHCR24的表达,并且通过SR-B1受体上调DHCR24的表达,然而并非通过该途径抑制TNF-α诱导的IL-1β、MCP-1的表达,即apoM可能通过其他途径发挥其抗炎作用。apoM可通过SR-B1上调DHCR24发挥抗氧化应激作用。

关键词：载脂蛋白M 24-脱氢胆固醇还原酶 B类Ⅰ型清道夫受体白细胞介素-1β 单核细胞趋化蛋白-1

以DHCR24为靶点的新型降胆固醇药物的筛选及药效的初步研究

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以DHCR24为靶点的新型降胆固醇药物的筛选及药效的初步研究

作者：赵琳琳辽宁大学

学位级别：硕士

人体内胆固醇含量过高会引起许多疾病,尤其是心血管疾病。胆固醇主要由内源性合成而来,占总体的80%。内源性合成的最后一步反应为链甾醇还原为胆固醇,催化此反应的酶为DHCR24(3β-脱氢胆固醇-Δ24还原酶)。DHCR24基因的突变(单点突变E1... 详细信息

人体内胆固醇含量过高会引起许多疾病,尤其是心血管疾病。胆固醇主要由内源性合成而来,占总体的80%。内源性合成的最后一步反应为链甾醇还原为胆固醇,催化此反应的酶为DHCR24(3β-脱氢胆固醇-Δ24还原酶)。DHCR24基因的突变(单点突变E191K、N294T、K306N、Y471S和两点突变N294T/K306N)会导致酶活性降低,从而使细胞胆固醇的含量下降。本实验研究以DHCR24蛋白为靶点,以期寻找到通过抑制DHCR24酶活性从而降低细胞胆固醇的新型降胆固醇药物。传统的药物筛选研发成本高并且周期很长,本研究利用计算机虚拟筛选联合细胞平台筛选技术,以达到节约时间和成本,并且提高筛选阳性率的目的。此外,本研究选用现有药物小分子数据库,可以提高候选药物的安全性,进一步为研发药物节约时间与成本,提高筛选效率。本实验首先通过同源建模和分子动力学技术建立、优化并确定DHCR24蛋白结构模型。然后利用分子对接及虚拟筛选技术,在DrugBank数据库中进行初步筛选,得到可能能够竞争性抑制DHCR24与底物desmosterol结合的小分子药物,选取其中打分最优的50个现有药物小分子候选药物。接下来对这50个候选药物进行AutoDock 4精确对接,并进行聚类分析。然后根据其易获得性进行进一步筛选,最终确定了4个候选药物(OND1,OND2,OND3,OND4)。我们利用人肝癌细胞株HepG2细胞培养平台联合高效液相色谱法(HPLC),验证筛选出的4种药物抑制DHCR24酶活性从而降低细胞胆固醇含量的效果。实验结果证明,这四种药物组以及一组阳性对照组U18666A(已知的DHCR24抑制剂)在给定剂量下都能显著降低细胞胆固醇的含量,初步证明了虚拟筛选结果的准确性。接下来,我们利用固醇荧光染色法(非律平)再次验证四种小分子药物的降胆固醇效果。结果显示四种药物降胆固醇的效果均非常显著。最后,我们利用分子动力学模拟的方法,对四种候选药物抑制DHCR24酶活性的具体机制进行了初步研究。综上,本研究发现了四种新型DHCR24抑制剂,并经过初步的细胞水平实验,证明其有降低细胞胆固醇的效果,为将其进一步开发为以DHCR24为靶点的新型降胆固醇药物奠定了坚实的基础。本研究的完成为以DHCR24为靶点开发新型降胆固醇药物提供了新的思路。

关键词：胆固醇 24-脱氢胆固醇还原酶虚拟筛选老药新用分子模拟

DHCR24转基因小鼠的性别特异性自主活动和应激反应

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中国现代医药杂志 2009年第1期11卷 1-5页

作者：梁虹宋铭晶施海霞潘思丹张连峰中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室 100021

目的测定α-MHC24-脱氢胆固醇还原酶基因(DHCR24)转基因小鼠的行为学特征,研究该基因对小鼠活跃性和探究行为的影响。方法构建α-MHC DHCR24转基因表达载体,显微注射法获得C57BL/6背景DHCR24转基因小鼠,PCR鉴定小鼠基因型,选择DHCR24转... 详细信息

目的测定α-MHC24-脱氢胆固醇还原酶基因(DHCR24)转基因小鼠的行为学特征,研究该基因对小鼠活跃性和探究行为的影响。方法构建α-MHC DHCR24转基因表达载体,显微注射法获得C57BL/6背景DHCR24转基因小鼠,PCR鉴定小鼠基因型,选择DHCR24转基因和同窝阴性鼠进行旷场、modified SHIRPA和Rota-Rod转轮实验。结果DHCR24转基因雌鼠对新环境的恐惧感较小,但自主活动性低于对照鼠,而DHCR24转基因雄鼠的自主活动性和在胁迫环境下的应激性高于对照组,DHCR24转基因鼠的行为变化具有显著的性别差异。另外,本研究中雌鼠的活跃性、运动协调性和平衡能力均显著高于雄鼠,对胁迫环境的应激性也大于雄鼠。结论心脏特异表达DHCR24基因转基因小鼠自主活动和应激性的变化具有性别差异。

关键词： 24-脱氢胆固醇还原酶转基因小鼠自主活动

心脏特异表达Dhcr24转基因小鼠的建立和表型分析

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中国比较医学杂志 2008年第5期18卷 1-4,I0001页

作者：宋铭晶董伟全雄志施海霞黄澜张连峰中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的建立心脏特异表达小鼠24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠,研究该基因在心脏中表达对小鼠心脏发育,形态和功能维持中的作用。方法RT-PCR法克隆小鼠24-脱氢胆固醇还原酶基因,把Dhcr24基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表... 详细信息

目的建立心脏特异表达小鼠24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠,研究该基因在心脏中表达对小鼠心脏发育,形态和功能维持中的作用。方法RT-PCR法克隆小鼠24-脱氢胆固醇还原酶基因,把Dhcr24基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24 C57BL/6J转基因小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,RT-PCR和Western Blotting检测基因表达水平,光学显微镜和超声检测不同月龄Dhcr24转基因小鼠心脏的组织结构改变。结果建立了2个品系的心脏特异表达Dhcr24转基因小鼠。转入的Dhcr24基因在心脏组织的表达水平超过内源性Dhcr24的3倍。心脏组织学和超声检查证实:Dhcr24转基因小鼠的心室壁变厚,心腔变小,但心脏功能保持正常。结论成功建立了心脏特异表达Dhcr24转基因小鼠,Dhcr24基因在心脏组织的过度表达对小鼠心脏发育和功能维持中的作用需要进一步探讨。

关键词： 24-脱氢胆固醇还原酶转基因小鼠心脏超声

胆固醇缺失小鼠胚胎纤维细胞中胆固醇含量对窖蛋白家族成员含量的不同影响

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胆固醇缺失小鼠胚胎纤维细胞中胆固醇含量对窖蛋白家族成员含量的...