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中国组织工程研究 2022年第26期26卷 4199-4204页

作者：覃勤夏天李月发张铃羚秦海霞广西中医药大学广西壮族自治区南宁市530023

背景:枢经热疗是在中医枢经学说理论指导下的外治法,已有研究证明其对神经病理性疼痛可能有较好疗效,但具体疗效证据及作用机制尚不明确。目的:以神经病理性疼痛大鼠模型为观察对象,根据行为学指标和分子生物学指标观察枢经热疗对大鼠... 详细信息

背景:枢经热疗是在中医枢经学说理论指导下的外治法,已有研究证明其对神经病理性疼痛可能有较好疗效,但具体疗效证据及作用机制尚不明确。目的:以神经病理性疼痛大鼠模型为观察对象,根据行为学指标和分子生物学指标观察枢经热疗对大鼠的镇痛作用,探讨其相关作用机制。方法:健康雄性SD大鼠80只,随机分成空白对照组、模型对照组、热疗组、中药热疗组,每组20只。后3组采用L5脊神经结扎术制备神经病理性疼痛大鼠模型,热疗组使用45℃盐水浸泡棉垫热敷大鼠双侧足少阳胆经循行部位;中药热疗组使用45℃中药液浸泡棉垫热敷大鼠双侧足少阳胆经循行部位。治疗1次/d,每次热敷15 min后开始行为学检测,分别测定机械缩足阈值和热缩足潜伏期;连续治疗14 d后取材,检测大鼠脊髓组织2型囊泡膜谷氨酸转运体和Toll样受体4蛋白表达水平。结果与结论:①行为学指标方面,治疗第7,14天后,热疗组和中药热疗组的机械缩足阈值显著高于模型对照组,热缩足潜伏期显著长于模型对照组(P2型囊泡膜谷氨酸转运体和Toll样受体4表达水平均显著低于模型对照组(P0.05);③提示枢经热疗对于神经病理性疼痛大鼠具有明显的镇痛作用,其作用机制可能与2型囊泡膜谷氨酸转运体/Toll样受体4信号通路的抑制有关。

关键词：神经病理性疼痛枢经热疗镇痛 2型囊泡膜谷氨酸转运体 Toll样受体4 中药大鼠

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减重步行训练对脊髓损伤大鼠脚桥核及巨细胞网状核的可塑性影响

减重步行训练对脊髓损伤大鼠脚桥核及巨细胞网状核的可塑性影响

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作者：冯杰扬南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种高致残率的疾病,常导致患者损伤平面以下的运动、感觉、自主神经及括约肌等的功能障碍;不仅给患者及其家庭带来灾难性的影响,而且极大地增加社会的经济负担。因此,世界各地学者们... 详细信息

研究背景及目的脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种高致残率的疾病,常导致患者损伤平面以下的运动、感觉、自主神经及括约肌等的功能障碍;不仅给患者及其家庭带来灾难性的影响,而且极大地增加社会的经济负担。因此,世界各地学者们都在积极寻找有效的治疗方法,帮助SCI患者早日康复。目前尚未能找到一种可以完全恢复SCI后患者各方面功能的治疗方法。超过50%SCI患者存在运动功能障碍,其中步行能力障碍对患者的影响尤为明显。.减重步行训练(Body Weight Support Treadmill Training,BWSTT)是一种针对下肢功能障碍,提高、改善步行能力的新的康复治疗技术,动物研究显示这一康复治疗技术可增强脊髓步行中枢模式发生器(central pattern generator,CPG)可塑性。然而,BWSTT对脊髓上神经中枢的影响却鲜有文献报道,本研究将针对大鼠脚桥核和巨细胞网状核这两个特殊脊髓上神经中枢结构进行探索,旨在1、明确BWSTT对不完全脊髓损伤大鼠中脑脚桥核和巨细胞网状核可塑性的影响;2、中脑脚桥核和巨细胞网状核可塑性在不完全脊髓损伤大鼠运动功能恢复中的作用。方法本研究包括两部分实验:1.实验一 BWSTT对不完全脊髓损伤大鼠中脑运动区脚桥核可塑性变化:将3月龄雌性SD大鼠30只,体重250-280g,分为BWSTT组、未训练组和假手术组,每组10只,用美国NYU脊髓冲击损伤仪制作大鼠T10脊髓不完全损伤模型。采用正电子发射型电子计算机断层显像结合X射线计算机断层成像技术(positron emission tomography/computed tomography,PET/CT)、免疫荧光染色及 Basso Beattie Bresnahan Locomotor Rating Scale(BBB 评分)观察BWSTT对不完全脊髓损伤大鼠中脑运动区脚桥核可塑性变化和后肢运动功能的改善,以及两者之间的关系。2.实验二BWSTT对脊髓损伤大鼠延髓巨细胞网状核可塑性变化:将45只雌性SD大鼠,体重为250-280g,分为假手术组、BWSTT组和未训练组。继续利用NYU脊髓打击器制作不完全脊髓损伤模型,对BWSTT组利用电动跑台进行减重步行训练干预6周,并采用免疫荧光染色、苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)、尼氏染色及BBB运动功能评分观察BWSTT对不完全脊髓损伤大鼠延髓巨细胞网状核的可塑性变化,以及运动评分与该核团可塑性变化的关系。结果第一部分实验结果:1.各组大鼠BBB评分BWSTT组大鼠的后肢运动功能BBB评分在造模后4周、7周两个时间点的分值均较未训练组高(P20.67±0.52、21.00、21.00)均明显高于训练组(分别为1.50±0.55、8.42±0.80、12.92±0.66)和未训练组(分别为 1.83±0.75、7.17±0.41、10.08±0.58;P2.各组大鼠脚桥核代谢虽然训练组18F-氟脱氧葡萄糖([18F]fluoro-2-deoxy-D-glucose,18F-FDG)的标准摄取值(standard uptake value,SUV)的平均值(1.94±0.63)较未训练组(1.82±0.19)增高,而且假手术组的SUV值(2.20±0.60)最高,但三组SUV值的差异不具有统计学意义(P>0.05)。3.各组大鼠脚桥核免疫荧光染色神经元特异性核抗原(neuron-specific nuclear,NeuN)免疫荧光染色检测显示训练组、未训练组、假手术组三组间大鼠脚桥核的神经元数量差异无统计学意义(P>0.05),而脚桥核2型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2)的积分光密度值(integrated optical density,IOD)比较,假手术组IOD表达最高,训练组较未训练组明显增强(P2的IOD值与BBB评分之间存在明显的相关性(r=0.989,P谷氨酸能神经递质表达增强而提高。第二部分实验结果:1.减重步行训练对各组大鼠BBB评分的影响造模后第28天,BWSTT组大鼠BBB评分(8.38±0.74)与未训练组(6.67±0.58)比较出现显著差异(P2.脊髓HE染色损伤段脊髓切片HE染色发现,假手术组脊髓切片

关键词：不完全脊髓损伤减重步行训练脚桥核巨细胞网状核 2型囊泡膜谷氨酸转运体

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枢经推拿对慢性神经病理性疼痛大鼠VGLUT2及炎症因子表达的影响

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广西中医药大学学报 2022年第4期25卷 39-44页

作者：王雄将梁英业卢栋明唐宏亮夏天广西中医药大学广西南宁530200 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023 防城港市中医医院广西防城港538000

[目的]从2型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT2)角度探讨枢经推拿对L5脊神经结扎(SNL)模型的神经病理性疼痛大鼠的镇痛机制。[方法]将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术对照组、SNL模型组各16只,以及慢病毒干扰组、假推拿组、枢经推拿组各8... 详细信息

[目的]从2型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT2)角度探讨枢经推拿对L5脊神经结扎(SNL)模型的神经病理性疼痛大鼠的镇痛机制。[方法]将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术对照组、SNL模型组各16只,以及慢病毒干扰组、假推拿组、枢经推拿组各8只,除空白组和假手术对照组外,余组均以结扎L5脊神经致神经病理性痛的方法建立SNL模型。造模7 d后分别从空白组、假手术对照组、SNL模型组中各随机选取8只进行行为学检测及取材。慢病毒干扰组、假推拿组、枢经推拿组均在造模7 d后开始干预,空白组、假手术对照组和SNL模型组不进行干预。慢病毒干扰组:将抑制VGLUT2的慢病毒一次性注入到大鼠脊髓;假推拿组:轻轻抚摸大鼠的背部,每天1次,每次18 min,共10 d;枢经推拿组:用按摩推拿手法模拟仪依次刺激大鼠双侧的环跳穴、风市穴和阳陵泉穴,每法每穴1 min,每次18 min,共10 d;干预结束后全部组别均进行行为学检测及取材,检测脊髓腰膨大节段中VGLUT2蛋白及血清中IL-6、TNF-α的表达水平。[结果]造模7 d后,与空白组比较,SNL模型组的热痛觉阈值、机械刺激痛觉阈值、斜板试验角度均显著降低(P2表达及IL-6、TNF-α的水平显著升高(P型组比较,枢经推拿组与慢病毒干扰组的热痛觉阈值、机械刺激痛觉阈值均显著升高(P2表达及IL-6、TNF-α的水平显著降低(P2的表达,进而抑制机体释放炎症因子以缓解疼痛症状。

关键词：枢经推拿神经病理性疼痛 2型囊泡膜谷氨酸转运体炎症因子

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大鼠VGLUT2基因shRNA慢病毒载体的构建、鉴定及转染原代培养神经元对VGLUT2表达的影响

大鼠VGLUT2基因shRNA慢病毒载体的构建、鉴定及转染原代培养神经...

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中国神经科学学会第十届全国学术会议

作者：方相春葛顺楠张春奎唐君李志红张婷李金莲第四军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室暨梁銶琚脑研究中心

目的构建可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2）shRNA的慢病毒载体,探讨新构建的慢病毒载体能否有效地感染大鼠皮层和脊髓原代培养神经元,并鉴定其对培养神经元内VGLUT2基因的特异性干扰效果... 详细信息

目的构建可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2）shRNA的慢病毒载体,探讨新构建的慢病毒载体能否有效地感染大鼠皮层和脊髓原代培养神经元,并鉴定其对培养神经元内VGLUT2基因的特异性干扰效果。方法（1）在体外合成四对互补并靶向作用于编码大鼠VGLUT2序列四个位点的特异性短发卡RNA序列（VGL,UT2-shRNA-1,2,3,4）和一个阴性对照的寡核苷酸,克隆到pGCSIL-GFP质粒载体内,经酶切及测序鉴定正确后,将其与辅助质粒共转染T293细胞,包装得到病毒颗粒。（2）将各组病毒载体分别转染原代培养的大鼠皮层和脊髓神经元,感染实验共分为以下6组:1-4组分别为pGCSIL-GFP-VGLUT2-shRNA-1组、2组、3组、4组;pGCSIL-GFP-VGLUT2-shRNA-阴性对照组和空白对照组。运用免疫荧光和Western blot方法检测各组蛋白的表达水平,并筛选出下调效果最佳的病毒载体。结果（1）pGCSIL-GFP质粒克隆得到的VGLUT2 shRNA序列正确,包装得到的病毒可以有效地感染大鼠皮层和脊髓原代培养神经元;（2）免疫荧光检测结果显示:pGCSIL-GFP-VGLUT2-shRNA-1、2、3、4组和阴性对照组共5组皮层和脊髓原代培养神经元均能观察到明显的GFP荧光,表明这些神经元已被慢病毒载体高效转染;其中第3组和第4组神经元VGLUT2的免疫荧光强度明显低于1、2组、正常组和阴性对照组,表明第3、4组能够更有效地降低原代培养神经元内VGLUT2的免疫荧光强度。（3）Western blot结果显示:pGCSIL-GFP-VGLUT2-shRNA-1、2、3、4组的VGLUT2蛋白的表达量与正常组和阴性对照组相比明显有所下降,分别占正常组的63.9±5.82%,73.8±3.18%,39.1.8±1.99%和35.1.8±1.72%;且pGCSIL-GFP-VGLUT2-shRNA-3、4组的VGLUT2蛋白的表达量明显低于pGCSIL-GFP-VGLUT2-shRNA-1、2组（P＜0 05）;但阴性对照组与正常组相比亦无明显差异（P＞0.05）。结论本研究成功构建出表达针对大鼠VGLUT2基因shRNA的慢病毒载体,并可有效下调VGLUT2的表达,为进一步在体研究VGLUT2的功能提供了有力的工具。

关键词： 2型囊泡膜谷氨酸转运体慢病毒载体原代培养神经元

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