检索结果-南通市图书馆

作者：尚新达郑州大学

学位级别：硕士

L-酪氨酸(L-tyrosine，Tyr)属芳香族氨基酸，在生物体内代谢产物丰富多样，其中许多具有重要生理功能和药理特性，而且在发酵食品中其产物种类和含量会对食品的安全和生理效应产生重要影响，因此深入研究微生物对L-酪氨酸的转化产物很... 详细信息

L-酪氨酸(L-tyrosine，Tyr)属芳香族氨基酸，在生物体内代谢产物丰富多样，其中许多具有重要生理功能和药理特性，而且在发酵食品中其产物种类和含量会对食品的安全和生理效应产生重要影响，因此深入研究微生物对L-酪氨酸的转化产物很有必要。同时，通过微生物转化的研究可以开发L-酪氨酸代谢产物更为清洁高效的生物酶生产方法，对于推动其重要代谢产物在食品、医药、饲料、化工、疾病检测等领域的广泛应用具有重要研究价值和实践意义。本研究从自然界富集得到106株菌株，通过初筛、复筛和重复对比实验，筛选得到菌株ZL-20，在不同条件下可转化得到8个产物。16S rDNA分子鉴定和系统发育进化树显示与Bacillus megaterium同源率高达99.0%，结合其生理生化试验综合分析后鉴定为巨大芽孢杆菌。通过对其产酶培养基和转化条件等的优化，得到了其中3个主要产物各自单一产生的条件，并使转化率和转化浓度得到较大幅度提高。其中，产物①优化后24h转化率达到65%以上，较优化前提高21%左右;产物②36h转化率达到75%以上，较优化前提高33%左右;产物③48h转化率高达98%，较优化前提高25%左右。在此基础上，通过转化液预处理、有机溶剂萃取、离子交换树脂分离、Prep-HPLC制备等对目标产物进行分离提取，并运用等电点冷却结晶、浓缩结晶以及重结晶等方法进一步纯化，经HPCE和HPLC纯度检测，产物①晶体纯度达98%以上，产物②达96%以上，产物③达95%以上。最后采用NMR和MS技术分别对三个转化产物进行结构鉴定，并结合ZL-20菌株16S rDNA分子鉴定结果和KEGG Pathway Database中L-酪氨酸代谢通路进行综合分析。结果表明：产物①为L-多巴，化学式为C9H11NO4，属于黑色素途径，L-酪氨酸经多酚氧化酶等羟基化而生成;产物②为4-羟基-烯醇-苯酮酸，化学式C9H8O4，属于氧化分解途径，首先经天冬氨酸转氨酶等作用生成对羟苯基丙酮酸，再经苯丙氨酸互变异构酶催化生成;产物③为对羟基苯乙胺，化学式C8H11NO，也属于氧化分解途径的一个分支，是L-酪氨酸在酪氨酸脱羧酶等作用下氧化脱羧生成。其中，苯丙氨酸互变异构酶在NCBI的Gene数据库中已知的菌属类型并没有芽孢杆菌。因此推测，该酶可能是在芽孢杆菌中未被发现的一种新酶。综上，本研究筛得的菌株ZL-20稳定性好，转化产物丰富;经条件优化和分离提取，对其中三个产物顺利完成了分析鉴定，建立起了一套L-酪氨酸代谢产物分析研究的有效方法。为后续更多新产物的发现、具有工业应用潜力酶资源的开发及发酵类食品安全性评估等的进一步研究奠定了坚实的基础。

关键词： L-酪氨酸微生物转化 16srdna分子鉴定正交优化分离提取 NMR、MS结构鉴定

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梨轮纹病生防菌株的筛选及其防治作用的研究

梨轮纹病生防菌株的筛选及其防治作用的研究

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作者：丁芳兵南京农业大学

学位级别：硕士

梨轮纹病在我国大部分梨果产区均有发生危害,利用生物防治控制梨轮纹病能有效减少化学药剂的使用数量和缓解病菌的抗药性,本文以梨轮纹病为靶标病原菌,开展了如下研究内容：从南京、高邮和仪征3地梨园分别采集梨树根际土壤、病果、病叶... 详细信息

梨轮纹病在我国大部分梨果产区均有发生危害,利用生物防治控制梨轮纹病能有效减少化学药剂的使用数量和缓解病菌的抗药性,本文以梨轮纹病为靶标病原菌,开展了如下研究内容：从南京、高邮和仪征3地梨园分别采集梨树根际土壤、病果、病叶和健叶样品共60份,通过系列稀释分离法,平板培养获得527个细菌分离物。以梨轮纹病菌(Pnysalospora pinicola Nose)为指示菌,采用平板对峙法初筛获得24个对梨轮纹病菌有较强拮抗作用的细菌分离物,其抑菌带宽大于10mm,并且菌抑制效果稳定.选取平板试验中拮抗带宽大于6mm的132株细菌进行室内梨果的活体生防试验,结果表明：在24株平板抑制效果较强的菌株中有18株防效在40%以上,6株防效为20%-40%;108株抑制效果中等的菌株中有3株的防效在40%以上,100株为20%-40%,5株的防效在20%以下。结合生理生化试验和16srdna分子测定,对室内梨果活体试验中防治效果在40%以上的21株拮抗细菌进行鉴定。通过形态观察、生理生化测定结果表明：它们是革兰氏阳性杆菌,有芽孢,属于芽孢杆菌属。16srdna分子测序结果表明：它们与枯草芽孢杆菌模式菌株的同源性高达99%以上,可鉴定为枯草芽孢杆菌。研究了不同梨品种、不同致病力真菌和不同拮抗能力生防细菌之间的互作反应,结果表明只喷布生防细菌不会引起病变;人工制造的伤口在没有病原真菌接触的情况下梨果也不会发病;喷布生防液后接种病原真菌,2小时后再喷布生防菌悬液能够减小不同梨品种间病斑直径的差异;在致病力强的轮纹病菌处理中各个梨品种间病斑直径的差异不明显。本试验研究了枯草芽孢杆菌Nt4与化学药剂制成的粉剂和水剂在不同浓度下对田间梨轮纹病的防治效果,结果表明：粉剂1的防治效果为73.6%,粉剂2的防治效果为76.6%,水剂1的防治效果为80.0%,水剂2的防治效果为81.9%,证明该生防细菌对梨轮纹病有较好的防治效果。

关键词：梨轮纹病拮抗细菌 16srdna分子鉴定生物防治枯草芽孢杆菌

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劲酒传统发酵过程中可培养功能细菌群落的动态变化初步研究

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湖北大学学报（自然科学版） 2019年第6期41卷 572-577页

作者：李锐杨玉贤杨强陈申习还萍李华南马向东湖北大学生命科学学院省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室湖北武汉430062 劲牌有限公司劲牌研究院湖北大冶435100

运用稀释培养方法,将小曲清香型劲酒传统发酵过程中入池、发酵第四天和出窖时酒醅中的可培养细菌分为九大功能群(蛋白质降解细菌群、淀粉降解细菌群、纤维素降解细菌群、木质素降解细菌群、脂肪降解细菌群、产乙酸细菌群、产乳酸细菌群... 详细信息

运用稀释培养方法,将小曲清香型劲酒传统发酵过程中入池、发酵第四天和出窖时酒醅中的可培养细菌分为九大功能群(蛋白质降解细菌群、淀粉降解细菌群、纤维素降解细菌群、木质素降解细菌群、脂肪降解细菌群、产乙酸细菌群、产乳酸细菌群、产丁酸细菌群和产己酸细菌群),探究小曲清香型劲酒传统发酵过程中各种可培养功能细菌群的组成以及动态变化.结果表明,数量较多的优势功能细菌群为产乙酸细菌群、产乳酸细菌群和产丁酸细菌群.对分离的各功能群的细菌进行核糖体RNA亚基编码基因(16srdna)序列分析,发现小曲清香型劲酒传统发酵过程中的可培养细菌主要为乳酸菌和芽孢杆菌两大类,分别属于3个属、10个种.

关键词：小曲清香型白酒可培养功能细菌群 16srdna分子鉴定

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