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中国病原生物学杂志 2017年第7期12卷 619-622,626页

作者：罗语思刘兴德牟荣董敏俊罗靓孙泽华张科贵州医科大学附属医院急诊科重症监护病房贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院心内科贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室浙江大学医学院附属邵逸夫医院肿瘤外科浙江大学医学院附属邵逸夫医院消化内科美国国立犹太健康中心内科学系

目的以BALB/c小鼠作为动物模型筛选高毒性人呼吸道合胞病毒鼠适应株。方法以连续传代法经小鼠下呼吸道接种临床株人呼吸道合胞病毒hRSV-A-GZ08-0,确认8月龄BALB/c雄鼠作为人呼吸道合胞病毒动物模型较3周龄BALB/c小鼠和8月龄BALB/c雌鼠... 详细信息

目的以BALB/c小鼠作为动物模型筛选高毒性人呼吸道合胞病毒鼠适应株。方法以连续传代法经小鼠下呼吸道接种临床株人呼吸道合胞病毒hRSV-A-GZ08-0,确认8月龄BALB/c雄鼠作为人呼吸道合胞病毒动物模型较3周龄BALB/c小鼠和8月龄BALB/c雌鼠更佳后,以8月龄BALB/c雄鼠为动物模型,将hRSV-A-GZ08-0连续传代50代,分离获得1株鼠适应株hRSV-A-GZ08-P50-4,该株病毒与临床株hRSV-A-GZ08-0分别接种8月龄BALB/c雄鼠后第3d以TCID50方法测定鼠肺灌洗液中的病毒滴度,并作鼠肺病理切片比较两株病毒感染的不同。结果8月龄BALB/c雄鼠作为人呼吸道合胞病毒动物模型较3周龄BALB/c小鼠和8月龄BALB/c雌鼠更佳。与临床株hRSV-AGZ08-0比较,hRSV-A-GZ08-P50-4为高毒性hRSV鼠适应株。结论 8月龄BALB/c小鼠,特别是8月龄BALB/c雄鼠,可作为动物模型筛选高滴度hRSV鼠适应株。筛选到的高毒性hRSV鼠适应株hRSV-A-GZ08-P50-4致病力较强。

关键词：人呼吸道合胞病毒鼠适应株连续传代法

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应用季节性流感病毒H3N2鼠适应株建立小鼠模型

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中国比较医学杂志 2019年第6期29卷 22-26页

作者：姜静吕琦李枫棣戚菲菲王顺意王冠澎徐艳峰鲍琳琳中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所

目的应用季节性流感病毒H3N2鼠适应株建立小鼠模型,并阐述适应株致病力变化的分子机制。方法 A/Aichi/2/68(H3N2)(WT)在小鼠体内多次适应获得鼠适应株(MA-7),MA-7经鼻感染BALB/c小鼠,根据临床症状、体重下降率、病毒复制和组织病理等... 详细信息

目的应用季节性流感病毒H3N2鼠适应株建立小鼠模型,并阐述适应株致病力变化的分子机制。方法 A/Aichi/2/68(H3N2)(WT)在小鼠体内多次适应获得鼠适应株(MA-7),MA-7经鼻感染BALB/c小鼠,根据临床症状、体重下降率、病毒复制和组织病理等关键指标判断小鼠模型构建成立,分析适应株致病力变化的分子机制。结果小鼠感染WT后无明显症状且未检测到病毒复制。MA-7感染后小鼠9 d内全部死亡,体重下降率超过30%,多组织内均能检测到病毒复制,肺组织中滴度高达10 5.5 TCID 50并出现间质性肺炎。基因比对发现MA-7在HA、NA、PA和NP基因上有5个位点发生突变。结论成功建立了H3N2适应株小鼠模型,可用于研究H3N2流感病毒发病机制及其药物、疫苗、抗体评价等,其适应株致病力增强可能与5个突变位点有关。

关键词：季节性流感病毒H3N2 小鼠模型鼠适应株分子机制

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非RBD突变远程增强N501Y介导SARS-CoV-2跨种传播小鼠

非RBD突变远程增强N501Y介导SARS-CoV-2跨种传播小鼠

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作者：朱一超军事科学院

学位级别：硕士

研究背景:新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-Co V-2)传播已近三年,对人民生命财产和健康带来严重威胁,对世界经济造成巨大损失。截至2023年3月7日,全球确诊超7.5亿,死亡超686万例。SARS-Co V-2具有... 详细信息

研究背景:新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-Co V-2)传播已近三年,对人民生命财产和健康带来严重威胁,对世界经济造成巨大损失。截至2023年3月7日,全球确诊超7.5亿,死亡超686万例。SARS-Co V-2具有广泛的宿主嗜性,在动物感染方面,SARS-Co V-2不仅可在水貂、仓鼠、白尾鹿物种内部进行传播,还可以通过动物回传给人。因此国内外对SARS-Co V-2动物感染性关注密切。小鼠是许多传染病的传播载体,例如鼠疫,流行性出血热等。而且小鼠存在面广且难以控制,在卫生条件差的地区更是如此,如果SARS-Co V-2可以在小鼠间传播,并可以回传给人,那将会造成灾难性的影响。研究已表明SARS-Co V-2刺突蛋白(Spike protein,S)上的N501Y突变可打破跨种传播障碍,使SARS-Co V-2在实验室小鼠中建立有效的感染。这一形势下,研究自然突变中有哪些突变位点可以造成SARS-Co V-2向小鼠跨种传播以及突变位点造成SARS-Co V-2向小鼠跨种传播的可能机制具有重要意义。除此之外,通过SARS-Co V-2流行株,如奥密克戎(Omicron)突变株,对解析的突变位点在SARS-Co V-2流行株对小鼠的感染性中的作用进行验证,从而对SARS-Co V-2流行株的跨种传播风险进行预警。研究目的:随着新冠持续流行,SARS-Co V-2基因组所产生突变越来越多,其中某些突变会增强SARS-Co V-2跨物种传播能力,使中间宿主成为新的传播源头,导致疫情有再次爆发的风险。研究已表明N501Y突变可以介导SARS-Co V-2感染小鼠,且受体结合域(Receptor binding domain,RBD)内部的突变对N501Y介导SARS-Co V-2跨种传播到小鼠的能力具有增强作用,但RBD外突变是否也具有此功能尚不清楚,因此本研究拟探索非RBD突变对N501Y介导SARS-Co V-2跨种传播到小鼠的能力的影响及相关机制。研究方法:1.筛选SARS-Co V-2向小鼠跨物种传播突变位点:目前存在人为将SARSCo V-2野生株在小鼠体内连续传代进行驯化得到的鼠适应株,通过反向遗传学技术获得的鼠适应株以及SARS-Co V-2野生株自然突变后鉴定得到的鼠适应株,通过文献调研比较分析SARS-Co V-2鼠适应株上存在的突变,筛选潜在的介导SARS-Co V-2向小鼠跨物种传播的突变位点。***-Co V-2感染性分析:(1)S蛋白表达载体的构建:通过限制性内切酶酶切,点突变,同源重组等分子生物学方法构建SARS-Co V-2鼠适应株及其相关突变的S蛋白表达载体,通过测序挑选出正确的目的质粒。(2)感染性分析:通过转染试剂将SARS-Co V-2鼠适应株及其相关突变的S蛋白表达载体转染至稳定表达人血管紧张素转化酶2(human angiotensin converting enzyme 2,h ACE2)的293T细胞(293T-h ACE2)和稳定表达小鼠ACE2(mouse angiotensin converting enzyme 2,m ACE2)的293T细胞(293T-m ACE2)中,以野生型SARS-Co V-2 S蛋白作为对照,通过统计合胞体形成率比较SARS-Co V-2鼠适应株及其相关突变S蛋白介导细胞融合的能力,利用蛋白免疫印迹(Western bolt,WB)检测S2亚基,利用免疫沉淀法(Immunoprecipitation,IP)检测S蛋白与受体结合能力,利用逆转录病毒三质粒系统包装SARS-Co V-2鼠适应株及其相关突变体的假病毒,感染细胞后利用萤火虫荧光素酶报告基因检测来评估感染水平。***-Co V-2跨物种传播机制解析:S蛋白是SARS-Co V-2入侵宿主细胞的关键蛋白,S蛋白突变后其与受体ACE2的相互作用会发生改变。用已解析的SARS-Co V-2 S蛋白结构为模板利用SWISS-MODEL的三维算法进行三维建模,并在三维结构上分析病毒突变对病毒传播能力的影响。***-Co V-2流行株验证:挑选与解析的突变位点相关的SARS-Co V-2流行株进行验证,通过限制性内切酶酶切,点突变,同源重组等分子生物学手段获得SARS-Co V-2流行株S蛋白表达载体,通过测序挑选出正确的目的质粒。对需验证的突变位点进行回复突变,通过合胞体形成实验检测膜融合能力变化,通过假病毒感染实验评估感染性变化,从而对SARS-Co V-2流行株是否具有向小鼠跨种传播的风险提供理论支撑并进行预警。研究结果:1.通过文献调研比较分析SARS-Co V-2鼠适应株突变位点,筛选分析得到一

关键词：新型冠状病毒刺突蛋白鼠适应株奥密克戎

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古典H1N1亚型猪流感病毒在哺乳动物体内毒力增强的分子机制研究

古典H1N1亚型猪流感病毒在哺乳动物体内毒力增强的分子机制研究

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作者：刘晓敏中国农业科学院

学位级别：硕士

基因突变或重组引发的病毒毒力与宿主适应性的改变是流感病毒早期演化的驱动因素。古典H1N1亚型猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)自首次分离以来一直存在于世界各地,多次跨越种间屏障感染人,甚至造成了致人死亡的严重后果。古典H... 详细信息

基因突变或重组引发的病毒毒力与宿主适应性的改变是流感病毒早期演化的驱动因素。古典H1N1亚型猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)自首次分离以来一直存在于世界各地,多次跨越种间屏障感染人,甚至造成了致人死亡的严重后果。古典H1N1亚型SIV在我国猪群中属于优势毒株,一旦跨越种间屏障适应新宿主,就极有可能在人群中引发新一轮的流感大流行。目前国内外对古典H1N1亚型SIV跨宿主感染哺乳动物的宿主适应与致病机制还不清楚。本研究以BALB/c小鼠为哺乳动物模型,模拟了古典H1N1亚型SIV跨越种间屏障适应哺乳动物新宿主的过程,将一株低致病性的古典H1N1亚型SIV野生株(G11-WT)在小鼠体内连续传13代,得到了病毒毒力明显增强的鼠适应株(G11-MA),G11-MA(MLD=3.3logTCID)的毒力比G11-WT(MLD>6.5logTCID)至少增加了10倍。为探究古典H1N1亚型SIV适应哺乳动物新宿主后对机体产生的不同影响,本研究利用RNA-seq技术对不同病毒感染小鼠后的肺组织进行了mRNA转录组差异性分析。结果表明,本次测序共检测到47719个基因,按照基因差异表达显著性筛选标准:FDR

关键词：古典H1N1亚型SIV 鼠适应株炎性反应致病机制协同作用

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