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黄瓜细菌性角斑病生防贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）物理诱变育种、抑菌机理初探及应用研究

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黄瓜细菌性角斑病生防贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）物...

作者：刘世程天津农学院

学位级别：硕士

黄瓜细菌性角斑病是由扁桃假单胞流泪致病变种(Pseudomonas amygdali pv.Lachrymans)引起的病害。在我国保护地黄瓜中,该病发生面积和严重程度都在逐年扩大,危害着保护地黄瓜生产。生物防治已成为防治该病害的热点,天然微生物资源的遗... 详细信息

黄瓜细菌性角斑病是由扁桃假单胞流泪致病变种(Pseudomonas amygdali pv.Lachrymans)引起的病害。在我国保护地黄瓜中,该病发生面积和严重程度都在逐年扩大,危害着保护地黄瓜生产。生物防治已成为防治该病害的热点,天然微生物资源的遗传改造可进一步提升生物防治作用效果。本研究采用本课题组前期筛选到的一株防治黄瓜细菌性角斑病的生防贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)ZF145作为出发菌株,经紫外诱变和室温常压等离子体(Atmospheric and Room Temperature Plasma,ARTP)诱变技术进行遗传改造,结合全基因组测序和全基因组重测序技术对菌株的生防功能进行挖掘,对突变机理进行分析,开展了剂型加工和应用技术研究,为诱变菌株的产业化应用提供了理论依据。主要研究内容如下:(1)通过ARTP诱变获得一株高活性贝莱斯芽胞杆菌A561,防效提高21.83%。利用紫外和ARTP 2种方式进行诱变,分别获得诱变菌株1249株、663株。经纸碟法筛选,紫外诱变获得正突变菌株12株,失效菌株1株;ARTP诱变获得正突变菌株71株。利用纸碟法和活体盆栽试验对突变菌株进行筛选,获得一株对黄瓜细菌性角斑病防效显著提高的贝莱斯芽胞杆菌A561,对黄瓜细菌性角斑病防效为63.61%;获得一株失效贝莱斯芽胞杆菌U279,在离体和活体情况下对黄瓜细菌性角斑病均无防效。(2)通过全基因组测序分析,明确贝莱斯芽胞杆菌ZF145基因组大小为3929800bp,GC含量为46.5%,共有1条染色体;通过突变菌株重测序分析,在2株突变菌株中各存在1个非同义SNP,分别位于与生防相关的基因rfb B、deg S。菌株ZF145基因总数为3866个,其中编码基因3748个,存在Fengycin等8种次生代谢产物合成基因簇,具有丰富的生防潜力。在正突变菌株贝莱斯芽胞杆菌A561中发现1个非同义突变SNP,位于基因deg S,突变后可提高菌株定殖能力;在失效突变菌株贝莱斯芽胞杆菌U279的基因组检测到2个SNP,其中非同义突变发生于基因rfb B,该基因编码d TDP-葡萄糖脱水酶,突变后次生代谢产物合成前体的生成量减少,从而使抑菌活性丧失。(3)通过单因素试验与活体生测试验,确定发酵培养基组分为淀粉25 g/L,玉米粉25 g/L、豆粕粉40 g/L,NaHPO1 g/L,Na HPO1 g/L,最适起始p H=6.0,发酵温度28℃,发酵时间36 h。采用单因素试验确定了50%贝莱斯芽胞杆菌A561悬浮剂配方为贝莱斯芽胞杆菌A561发酵液50%,IVF-2 2%,IVF01 3%,黄原胶0.3%,硅酸镁铝0.5%,防腐剂苯甲酸钠0.10%,其余部分用水补足。经检测,该工艺制备的2.43×10CFU/m L贝莱斯芽胞杆菌A561悬浮剂各项指标均符合标准,可用于微生物菌剂的加工。

关键词：芽胞杆菌诱变 ARTP 黄瓜细菌性角斑病悬浮剂

黄瓜细菌性角斑病免疫胶体金检测试纸条的研制

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植物病理学报 2011年第2期41卷 131-138页

作者：孙艳秋赵奎华曹远银刘长远梁春浩沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866 辽宁省农业科学院植物保护研究所沈阳110161

应用免疫胶体金技术进行黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)的快速检测研究。为了研制黄瓜细菌性角斑病的免疫胶体金检测试纸条,通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金,选择25 nm胶体金标记黄瓜细菌性角斑病菌多克隆抗体(C... 详细信息

应用免疫胶体金技术进行黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)的快速检测研究。为了研制黄瓜细菌性角斑病的免疫胶体金检测试纸条,通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金,选择25 nm胶体金标记黄瓜细菌性角斑病菌多克隆抗体(CMb)。采用双抗夹心法,将CMb-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,将羊抗兔二抗和CMb包被在硝酸纤维素膜上,分别作为质控线(C)和检测线(T),组装成试纸条。该试纸条检测灵敏度为106 cfu/mL,与唐菖蒲疮痂病菌(Pseudomonas fluorescens biovarⅡ)等26个菌株无交叉反应,特异性强,检测时间为15 min。稳定性试验表明试纸条在37℃条件下放置15 d可保持检测结果的可靠性。用试纸条对田间采集的病叶进行检测,C线和T线清晰可见,缓冲液对照呈阴性反应。本试纸条可应用于生产上黄瓜细菌性角斑病早期快速检测,进而指导病害防治。

关键词：黄瓜细菌性角斑病快速检测胶体金试纸条

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黄瓜细菌性角斑病对噻唑锌的抗药性风险评估

农药 2013年第11期52卷 832-834,850页

作者：李夏冰刘瑜时浩杰吴慧明张传清浙江农林大学农业与食品科学学院植物保护系杭州311300

[目的]最大限度阻止或延缓黄瓜细菌性角斑病对噻唑锌的抗药性发生和抗药性群体的形成,延长噻唑锌的使用寿命,确保化学防治效果。[方法]紫外诱变和药剂驯化获得突变体。采用浊度法测定抗药性突变体的抗药性水平、交互抗药性、抗药性遗传... 详细信息

[目的]最大限度阻止或延缓黄瓜细菌性角斑病对噻唑锌的抗药性发生和抗药性群体的形成,延长噻唑锌的使用寿命,确保化学防治效果。[方法]紫外诱变和药剂驯化获得突变体。采用浊度法测定抗药性突变体的抗药性水平、交互抗药性、抗药性遗传稳定性。[结果]该突变体对噻唑锌表现为低抗药水平,抗药性突变体不稳定。抗药性突变体与8-羟基喹啉铜、双唑锌无交互抗药性。[结论]黄瓜细菌性角斑病对噻唑锌的抗药性风险比较低。

关键词：噻唑锌毒力黄瓜细菌性角斑病抗药性风险分析

黄瓜细菌性角斑病PMA-qPCR检测方法的建立和应用

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生物技术通报 2016年第2期32卷 70-75页

作者：孔维文李云龙王敬琦刘婷婷陈南金一何晓青北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 北京市植物保护站北京100029

黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同... 详细信息

黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同株的gap1基因序列,找出gap1基因的保守区并根据保守区基因序列设计了一对特异性引物Dxf1和Dxr1,以其他5种非丁香假单胞菌基因组为模板进行实时定量PCR扩增,只有丁香假单胞菌有扩增曲线,证明引物非常特异。(2)以gap1基因为目的基因构建其克隆载体,将克隆载体导入到大肠杆菌感受态细胞中进行培养,使其大量复制。再将质粒提取,以提取的质粒作为标准品,根据其浓度将其稀释为5×101-5×107 7个梯度绘制标准曲线,获得的扩增效率为96.6%,并做组内重复和组间重复,变异系数均在2%内,证明标准曲线重复性良好。(3)将构建好的方法用于实际样品的检测,得到的Ct值为27.99,根据标准曲线所得的起始模板与Ct值之间的线性关系公式,检测到100 mg患病叶片中含有的菌体为7.69×102拷贝。研究表明,该方法可以快速鉴定并检测实际样品中的活的致病菌的数量,为黄瓜细菌性角斑病的防控提供技术支持。

关键词：黄瓜细菌性角斑病 PMA-qPCR 丁香假单胞菌检测有活力菌体

黄瓜细菌性角斑病菌拮抗细菌的筛选及微粉剂研制

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黄瓜细菌性角斑病菌拮抗细菌的筛选及微粉剂研制

作者：苑宝洁河北北方学院

学位级别：硕士

近年来,黄瓜细菌性角斑病发生严重,导致黄瓜减产。本论文主要通过对黄瓜细菌性角斑病菌高效拮抗菌株的筛选,以期获得一株对黄瓜细菌性角斑病菌具有良好拮抗作用的芽胞杆菌,并优化发酵工艺及剂型加工工艺,最终建立芽胞杆菌微粉剂防治黄... 详细信息

近年来,黄瓜细菌性角斑病发生严重,导致黄瓜减产。本论文主要通过对黄瓜细菌性角斑病菌高效拮抗菌株的筛选,以期获得一株对黄瓜细菌性角斑病菌具有良好拮抗作用的芽胞杆菌,并优化发酵工艺及剂型加工工艺,最终建立芽胞杆菌微粉剂防治黄瓜细菌性角斑病的田间应用技术。1.筛选到1株对黄瓜细菌性角斑病菌具有明显抑制作用的芽胞杆菌。以黄瓜细菌性角斑病为靶标,通过平板对峙法及喷雾接种法对黄瓜根际土壤中疑似拮抗细菌进行筛选,获得一株对其具有明显抑制效果的生防细菌ZF145,经形态学、生理生化、Biolog测定和多基因序列分析,鉴定菌株ZF145为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)。该菌株在平板离体试验中抑菌圈直径为5.60 cm,抑制率为62.22%;在盆栽试验和田间试验中,将1×10CFU/mL的贝莱斯芽胞杆菌ZF145菌悬液稀释100倍液喷施后,对黄瓜细菌性角斑病均有明显的防治效果,盆栽防效为71.10%,田间防效为61.30%。采用平板对峙法和双层培养法证明贝莱斯芽胞杆菌ZF145可以明显抑制5株病原细菌和8株病原真菌的生长,具有较为广谱的抑菌效果。2.建立了贝莱斯芽胞杆菌ZF145的发酵工艺。通过单因素试验及正交试验确定了贝莱斯芽胞杆菌ZF145的最佳发酵培养基配方为:糖蜜25 g/L、棉籽饼粉12.5 g/L、氯化钠0.2 g/L,p H值=8.0;最适发酵条件为:温度为28℃,接种量为4%,装液量为50 mL/250mL的三角瓶,转速为240 r/min,培养时间为36～40 h。3.明确了贝莱斯芽胞杆菌ZF145的微粉剂配方。通过生物相容性试验及喷雾干燥试验对微粉剂的载体及喷雾干燥条件进行优化,确定了贝莱斯芽胞杆菌微粉剂的最佳载体为IVF-42,载体含量为10%,最佳进风口温度为140℃、进样速率为25%。通过单因素试验确定了贝莱斯芽胞杆菌微粉剂的配方为:母粉10%、润湿剂IVF-A为1%、分散剂IVF-D为7%、稳定剂磷酸二氢钾2%、紫外保护剂糊精1%、填料IVF-24为15%、IVF-42补足至100%。经机械粉碎及气流粉碎将其研制成微粉剂,贝莱斯芽胞杆菌微粉剂的粒径(D)为7.25μm、润湿时间为13.33 s、悬浮率为76.81%、持久起泡性为39.17 mL、含水率为1.11%、杂菌率为0.64%、p H值为6.59,各项检测结果均符合国家标准。4.建立了贝莱斯芽胞杆菌微粉剂对黄瓜细菌性角斑病的田间防治技术。贝莱斯芽胞杆菌微粉剂按200 g/666.7 m在不同的环境条件下喷粉施用对黄瓜细菌性角斑病均有明显的防治效果,其防效均在55.00%以上,与喷雾处理的防治效果(46.23%)具有显著性差异。且贝莱斯芽胞杆菌微粉剂在不同环境下喷粉处理后的第1、3、5、7、10、15 d均可在叶片上检测到3×10CFU/g以上的贝莱斯芽胞杆菌,贝莱斯芽胞杆菌ZF145微粉剂在黄瓜叶片上具有较强的定殖能力。

关键词：黄瓜细菌性角斑病贝莱斯芽胞杆菌发酵工艺微粉剂防治效果定殖能力

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黄瓜细菌性角斑病的药剂防治

甘肃农业科技 1989年第5期 33-34页

作者：阎瑞英高雪莲武威地区农技服务中心

黄瓜细菌性角斑病〔Pseudomonas lachrymans(Smith et Bryan)Carsn〕是我区目前生产上严重危害黄瓜的一种病害。经调查发病面积在一千亩以上,病叶率75％,减产30——45％,已对黄瓜的稳产高产造成了威胁。为了筛选防治该病的有效药剂,198... 详细信息

黄瓜细菌性角斑病〔Pseudomonas lachrymans(Smith et Bryan)Carsn〕是我区目前生产上严重危害黄瓜的一种病害。经调查发病面积在一千亩以上,病叶率75％,减产30——45％,已对黄瓜的稳产高产造成了威胁。为了筛选防治该病的有效药剂,1988年用四种农药进行药剂防效试验。一、试验材料及方法: 1.试验地情况:试验地设在武威市金羊乡窑沟村,试验面积为0.8亩,试验地前茬为小麦,肥力中等,黄瓜品种为金棒子。 2.供试药剂:58％甲箱灵锰锌,68％瑞毒铝铜可湿性粉剂,30％DT胶悬剂,农用抗菌素120。 3.处理内容:DT胶悬剂500倍液,甲箱

关键词：黄瓜细菌性角斑病防效有效药剂病斑

山东东平县棚室栽培黄瓜细菌性角斑病综合防治技术

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长江蔬菜 2023年第5期 68-70页

作者：牛新华山东省东平县东平街道农技站山东东平271500

近年来,山东东平县黄瓜种植面积不断增加,但由于环境和管理技术的差异,各种病虫害频发,影响了产品的优质高产。黄瓜细菌性角斑病是保护地黄瓜栽培的主要细菌性病害之一,合理有效地控制黄瓜细菌性角斑病是保障产品质量和提高产品价值的... 详细信息

近年来,山东东平县黄瓜种植面积不断增加,但由于环境和管理技术的差异,各种病虫害频发,影响了产品的优质高产。黄瓜细菌性角斑病是保护地黄瓜栽培的主要细菌性病害之一,合理有效地控制黄瓜细菌性角斑病是保障产品质量和提高产品价值的重要保证。根据多年的工作经验,总结了黄瓜细菌性角斑病的症状、传播途径、发生规律等,提出了科学的综合防治措施,希望能给广大农民朋友带来帮助。

关键词：黄瓜细菌性角斑病细菌性病害棚室栽培保护地黄瓜黄瓜种植山东东平县综合防治技术综合防治措施

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黄瓜细菌性角斑病

科技致富向导 2005年第7期 24-24页

黄瓜细菌性角斑病,在长江以北的华东、华北和东北地区发生较多,近年有发展的趋势。日本等国亦有此病发生,截至目前只发现黄瓜有此病发生。严重发病时,成片的叶片群体干枯,果实腐烂。一、病原及侵染病原在分类中属于假单孢杆菌属细菌,菌... 详细信息

黄瓜细菌性角斑病,在长江以北的华东、华北和东北地区发生较多,近年有发展的趋势。日本等国亦有此病发生,截至目前只发现黄瓜有此病发生。严重发病时,成片的叶片群体干枯,果实腐烂。一、病原及侵染病原在分类中属于假单孢杆菌属细菌,菌体呈短杆状,在一端生有1～5根鞭毛,菌性属于好气性,但不耐酸性环境,在pH6.8～7.0的环境中发育良好。它的适温为25～28℃,温度升到49～50℃(10分

关键词：黄瓜细菌性角斑病果实腐烂

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黄瓜细菌性角斑病

现代农业科技 1999年第10期 22-22页

作者：郭保国五河县头铺乡农技站

该病是由假单胞杆菌属黄瓜角斑病菌引起的病害。全国各地都有发生，是露地黄瓜中、后期和温室、大棚黄瓜前期常见的病害。危害叶片和果实，严重时叶片干枯，果实腐烂，造成严重减产。症状识别　主要发生在叶片上，最初在叶片上出现水渍... 详细信息

该病是由假单胞杆菌属黄瓜角斑病菌引起的病害。全国各地都有发生，是露地黄瓜中、后期和温室、大棚黄瓜前期常见的病害。危害叶片和果实，严重时叶片干枯，果实腐烂，造成严重减产。症状识别　主要发生在叶片上，最初在叶片上出现水渍状小斑点，后扩大，因受叶脉限制形成多角形黄褐色的病斑。潮湿时，叶背病斑处有白色菌脓，最后病斑容易开裂或穿孔。果实及茎上病斑初期呈水浸状，表面有白色菌脓。果实上病斑可向内扩展，沿维管束的果肉逐渐变色，并可蔓延到种子。幼苗发病时，子叶上初生水浸状圆斑，稍凹陷，后变褐色干枯。本病与霜霉病症状相似，容易混淆。发生规律　病菌在种子上或随病残体残留在土壤中越冬。种子上的病菌播种发芽后即侵染子叶

关键词：黄瓜细菌性角斑病病斑菌脓细菌溢脓