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鹿茸肽的酶解工艺优化及其体外抗蓝光活性评价

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食品工业科技 2023年第16期44卷 386-394页

作者：张佳怡李春楠金泽成赵峻露程端端兰梦李雅静孙佳明长春中医药大学药学院吉林长春130117 长春中医药大学人参科学研究吉林长春130117

目的:为了更好的开发鹿茸的高价值产品,本研究确定了碱性蛋白酶酶解鹿茸肽的最佳工艺条件,并对其体外抗蓝光活性进行评价。方法:选择酶解温度、酶底比、酶解时间、pH四个因素,每个因素三个水平,在单因素实验的基础上进行正交实验优化,... 详细信息

目的:为了更好的开发鹿茸的高价值产品,本研究确定了碱性蛋白酶酶解鹿茸肽的最佳工艺条件,并对其体外抗蓝光活性进行评价。方法:选择酶解温度、酶底比、酶解时间、pH四个因素,每个因素三个水平,在单因素实验的基础上进行正交实验优化,以鹿茸肽酶解收率为指标,获得酶解鹿茸肽的最佳工艺,测定鹿茸肽的含量;利用CCK-8法检测不同浓度鹿茸肽培养下的人类永生化表皮细胞(Human immortal keratinocyte line,HaCat)在蓝光照射后的存活率;ELISA法分析超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(Glutathione-reduced,GSH)的分泌水平以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;紫外法计算鹿茸肽对DPPH自由基、OH自由基清除的能力。结果:最佳鹿茸肽酶解工艺条件为温度45℃,酶解时长5 h,pH8.5,酶底比6%,此时的鹿茸肽酶解收率为52.7%;设置不同浓度鹿茸肽给药组(12.5、25、50、75、100μg/mL),与蓝光照射模型组相比,给药组能够减轻蓝光照射对HaCat细胞增殖活力的抑制作用,提高细胞存活率,具有显著性差异(P鹿茸肽对DPPH自由基、OH自由基的清除能力较强,其IC50分别是0.98和0.63 mg/mL。结论:鹿茸肽具有较好的抗蓝光活性,对皮肤美白、抗衰老和损伤修复具有一定的作用,这为鹿茸的精深加工和开发利用提供了理论依据。

关键词：鹿茸鹿茸肽抗蓝光酶解法 HaCat细胞

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酶解鹿茸肽的制备、纯化及抗氧化活性

高等学校化学学报 2010年第12期31卷 2390-2395页

作者：王华黄宜兵高科翔孙辉高忠礼吉林大学中日联谊医院长春130033 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130021

利用一种工业用碱性蛋白酶对新鲜梅花鹿鹿茸进行水解,制备得到生物活性肽.首先,考察了酶用量、底物浓度和反应时间对水解反应的影响,确定了最佳水解条件为酶与底物质量比1:150,底物与溶剂质量比1:13,水解时间60min.其次,利用硫酸胺分级... 详细信息

利用一种工业用碱性蛋白酶对新鲜梅花鹿鹿茸进行水解,制备得到生物活性肽.首先,考察了酶用量、底物浓度和反应时间对水解反应的影响,确定了最佳水解条件为酶与底物质量比1:150,底物与溶剂质量比1:13,水解时间60min.其次,利用硫酸胺分级沉淀法制备了鹿茸多肽粗提液,同时采用缓冲液保护其活性,再经SephadexG-25凝胶层析柱进行分离纯化,得到了具有最强抗氧化活性的鹿茸肽组分(VAP-B).最后,利用制备型高效液相色谱柱对VAP-B进一步纯化,得到了分子量在800以内的小肽活性组分(VAP-B1),其蛋白含量为70.45%.在此基础上,对小肽活性组分VAP-B1进行了理化性质分析,检测其抗氧化活性,包括清除超氧阴离子、羟自由基以及抗脂质过氧化的能力和还原能力.实验结果表明,当鹿茸肽VAP-B1浓度为20mg/mL时,对邻苯三酚自氧化的抑制率达到91.9%,有明显的清除超氧阴离子的作用;当浓度为10mg/mL时,对羟基自由基的清除作用达到100%,且在一定的浓度范围内呈剂量依赖关系.此外,鹿茸肽VAP-B1还具有一定的防止脂质过氧化和还原的作用.

关键词：鹿茸肽碱性蛋白酶酶解抗氧化活性

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不同来源鹿茸肽对成骨细胞作用的比较

中国生化药物杂志 2012年第6期33卷 701-705页

作者：刘中天刘吉华洪勇姜宁高向东尚靖中国药科大学新药筛选中心江苏南京210009 中国药科大学中药学院江苏南京210009 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

目的比较塔里木马鹿茸肽与梅花鹿茸肽对成骨细胞增殖分化的影响,并分析药材差异性。方法以相同工艺从两种鹿茸中提取不同肽段的鹿茸肽。以MTT法及PNPP法检测不同肽段鹿茸肽对原代大鼠成骨细胞的增殖分化作用。采用粉末鉴别及薄层色谱法... 详细信息

目的比较塔里木马鹿茸肽与梅花鹿茸肽对成骨细胞增殖分化的影响,并分析药材差异性。方法以相同工艺从两种鹿茸中提取不同肽段的鹿茸肽。以MTT法及PNPP法检测不同肽段鹿茸肽对原代大鼠成骨细胞的增殖分化作用。采用粉末鉴别及薄层色谱法分析塔里木马鹿茸与梅花鹿茸的结构及甘氨酸含量差异。以凝胶电泳法及HPLC法分析鹿茸肽成分差异。结果从塔里木马鹿茸中分离得到3种不同肽段的鹿茸肽,分别为相对分子质量(Mr)>30 kD组分(样A)、Mr5～10 kD组分(样B)、Mr>5 kD组分(样C);从梅花鹿茸中分离得到3种不同肽段的鹿茸肽,分别为Mr>30 kD组分(样D)、Mr5～10 kD组分(样E)、总肽组分(样F)。样B和C显著促进大鼠成骨细胞增殖并上调碱性磷酸酶活性,样F仅具有促进细胞增殖作用,其余组分作用微弱。塔里木马鹿茸与梅花鹿茸粉末形态类似,但含有更多甘氨酸成分,其鹿茸肽含更多潜在活性成分。结论塔里木马鹿茸与梅花鹿茸存在较大差异,前者包含抗骨质疏松成分。

关键词：塔里木马鹿梅花鹿鹿茸肽成骨细胞增殖碱性磷酸酶

酶解鹿茸肽的制备分离纯化及其抗氧化活性的研究

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酶解鹿茸肽的制备分离纯化及其抗氧化活性的研究

作者：高科翔吉林大学

学位级别：硕士

鹿茸系鹿科动物梅花鹿(Cervus Nippon Temminck)或马鹿(Cervus elaphus Linnaeus)的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角。鹿茸具有多种生物效用,其生物活性与蛋白质结构及氨基酸组成密切相关,作为一种特殊的软骨组织,是一个天然的富含多种活性因... 详细信息

鹿茸系鹿科动物梅花鹿(Cervus Nippon Temminck)或马鹿(Cervus elaphus Linnaeus)的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角。鹿茸具有多种生物效用,其生物活性与蛋白质结构及氨基酸组成密切相关,作为一种特殊的软骨组织,是一个天然的富含多种活性因子的细胞因子库,在其自体生长过程中,成骨、造血、经生长、纤维细胞、上皮细胞生长同步进行,作为鹿体最活跃的生长点在其骨化之前贮存大量的生长因子,它们是其临床作用的生物化学基础,现代医学研究表明鹿茸具有抗氧化、保护心肌、促生长、增强免疫力、促进神经组织再生修复、促代谢、抗炎、免疫调节、生血、促进皮肤组织及骨折愈合等广泛的药理活性。本文采用新鲜梅花鹿鹿茸,其含水量81.94%,干物质蛋白含量为64.1%,利用一种工业用碱性蛋白酶Alcalase,在50℃、pH8.0、水解度10%的条件下设计正交试验进行水解,对酶浓度(底物蛋白:酶/g:g)、底物浓度(鹿茸干物质:水/g:g)和反应时间进行优化,采用缓冲溶液保护鹿茸肽活性及硫酸胺分级沉淀法制备鹿茸多肽粗提液,水解液依次经过离心、过滤,然后经Sephadex-G 25凝胶层析柱和制备型高效液相色谱柱分离纯化,得到一分子量在800U之内的小肽,最后进行真空冷冻干燥,得到生物活性鹿茸肽,其蛋白含量为70.45%,并对其组成成分进行了理化分析。我们检测了鹿茸肽的抗氧化性,包括超氧阴离子清除实验、羟自由基清除实验、脂质过氧化实验、DPPH自由基清除实验和还原力实验。结果表明,鹿茸肽在不同检测系统均可表现不同程度的抗氧化能力。

关键词：鹿茸肽分离纯化 Alcalase酶抗氧化

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鹿茸寡肽的制备及其促成骨细胞的增殖作用

高等学校化学学报 2008年第9期29卷 1791-1796页

作者：王华林喆刘强蔡明军徐力张学忠吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130021 长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心长春130117 吉林大学中日联谊医院长春130033

从梅花鹿鹿茸中提取了天然鹿茸总多肽（VATP）.在进一步分离纯化的过程中,筛选出具有促进成骨细胞增殖的高活性肽组分（VAP-B）,并通过制备型HPLC对其纯化,得到了分子量分布约为200～600的小肽活性组分（VAP-B2）.细胞周期分析结果表明... 详细信息

从梅花鹿鹿茸中提取了天然鹿茸总多肽（VATP）.在进一步分离纯化的过程中,筛选出具有促进成骨细胞增殖的高活性肽组分（VAP-B）,并通过制备型HPLC对其纯化,得到了分子量分布约为200～600的小肽活性组分（VAP-B2）.细胞周期分析结果表明,鹿茸肽VAP-B2组分促进了人成骨肉瘤细胞OS-732的周期转化,使其细胞周期S期细胞指数明显增加,即表现为S期DNA含量明显提高.碱性磷酸酶（ALP）活性检测结果表明,随着鹿茸肽VAP-B2剂量的增加,ALP的活性明显增加.这与成骨细胞增殖分化及成熟过程中,细胞的周期性变化和骨形成标志物碱性磷酸酶水平的明显增高相符.

关键词：梅花鹿鹿茸鹿茸肽分离与纯化生理活性成骨细胞